KAI1/CD82 在早孕小鼠子宫内膜组织的表达研究

目的：观察KAI1／CD82 mRNA和蛋白在小鼠妊娠D1-D8子宫内膜组织的表达。方法：以胚胎与肿瘤同源性为理论基础,胚胎植入与肿瘤侵袭转移相似为切入点,采用免疫组化和RT-PCR技术。结果：KAI1／CD82 mRNA和蛋白在早孕子宫中,KAI1／CD82mRNA的表达渐增多,蛋白表达的量和范围也渐增强。结论：KAI1／CD82mRNA和蛋白在早孕子宫组织中的动态表达,提示它在胚胎精确侵袭子宫内膜的调节中发挥作用,是滋养层细胞精确侵袭调控的分子机制之一。     

冻存密度对外周血单个核细胞冻存效果的影响

探讨冻存密度对外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)冻存效果的影响。设定新鲜PBMC组(F组)及3个PBMC冻存密度组即2.0×10~7/mL(A组),4.0×10~7/mL(B组),6.0×10~7/mL(C组)。通过对冻存前后的PBMC活率及复苏后多种细胞因子诱导的杀伤细胞(Cytokine-induced killer,CIK)的扩增倍数、淋巴细胞亚群、体外杀伤效率进行比较,验证其冻存效果。结果显示,冻存前F组与冻存后A组、B组、C组的细胞活率分别为(96.0±0.3)%、(95.6±0.4)%、(94.7±0.2)%和(94.9±0.4)%,B组与C组显著低于A组,P0.05;细胞扩增14 d后,F组与A组、B组、C组细胞扩增倍数分别为(156.4±18.2)倍、(160.2±28.4)倍、(126.1±19.8)倍和(110.4±11.3)倍,B组与C组显著低于F组(P0.05);PBMC冻存前复苏后淋巴细胞亚群结果无显著差异。与F组相比,A组、B组、C组细胞扩增14 d后,CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3-CD56+、CD3+CD56+淋巴细胞亚群无显著差异(P0.05),体外杀伤效率无显著差异(P0.05)。过高的冻存密度会影响PBMC冻存效果而间接影响细胞的复苏应用,而过低的冻存密度则增加冻存体积而大大提高冻存成本,因此,选择合适的细胞冻存密度是细胞库或细胞银行必须要考虑的问题。     

过表达CD82对植入期小鼠子宫内膜整合素αV、β3、E-cadherin和β-catenin表达的影响

目的探讨CD82对着床窗口期小鼠子宫内膜上皮细胞内整合素αV、β3、E-cadherin以及β-catenin蛋白表达的影响。方法将构建的CD82腺病毒转染原代培养的小鼠子宫内膜上皮细胞。检测妊娠小鼠子宫内膜上皮细胞转染CD82腺病毒后,细胞内整合素αV、β3、E-cadherin和β-catenin的表达变化情况。结果提取的上皮细胞纯度为(93.2±0.6)%。构建的CD82腺病毒转染效率达到(92.0±4.5)%,转染原代培养的小鼠子宫内膜上皮细胞24 h后,RT-PCR检测发现CD82基因表达明显升高。转染48 h后,Western blot检测CD82蛋白水平明显升高。免疫细胞化学检测妊娠第4天的小鼠子宫内膜上皮细胞转染CD82腺病毒后,整合素αV、β3以及β-catenin的表达较未转染组均有明显上升(P0.05),但E-cadherin的表达量无明显变化(P0.05)。结论胚胎植入前,CD82可能影响小鼠子宫内膜上皮细胞内整合素αV、β3和β-catenin的蛋白表达。     

实验动物新西兰兔适宜营养水平的研究

根据地方饲料资源特点 ,应用计算机软件 ,设计不同的饲料配方 ,并生产相应的颗粒料 ,饲喂 6 0只一级新西兰幼兔、 2 4只繁殖母兔。在饲养管理条件相同的情况下 ,进行动物分组对比试验 ,观察幼兔生长情况、母兔繁殖情况 ,研究新西兰兔不同发育阶段所需的适宜的营养水平。试验按 2× 3因子设计。试验结果 :1、幼兔生长发育的最佳配方 :消化能 11 0 3MJ/kg ,粗蛋白质 15 10 % ,粗脂肪 3 0 4% ,粗纤维 10 2 6 % ,钙 1 34 5 % ,磷0 5 6 %。 2、繁殖母兔的最佳配方 :消化能 10 91MJ/kg ,粗蛋白质 18 17% ,粗脂肪 2 96 % ,粗纤维 10 2 8% ,钙1 47% ,磷 0 5 8%。     

检测小鼠肝炎病毒的SNaPshot分型技术及其应用

建立一种能对MHV_1、MHV_3、JHM、A_(59) 4种常见小鼠肝炎病毒(Murine Hepatitis Virus,MHV)进行分型检测的SNaPshot新方法。根据MHV 4种常见毒株基因序列比对结果,设计内外两对PCR通用引物和4个单碱基延伸引物,提取MHV 4种常见毒株RNA,逆转录后进行PCR扩增,纯化扩增产物,用SNaPshot方法进行单碱基延伸,将产物进行毛细管凝胶电泳,根据电泳结果分析毒株基因型。优化SNaPshot分析条件,进行灵敏度、特异性分析。用ELISA法和SNaPshot方法检测41例小鼠(Mus musculus)血清样本,将阳性样本进行克隆测序检测。当T1~T4引物修饰的poly T的数量分别为0、3、10和15,其浓度比为4︰6︰5︰10,引物大小分别为16 bp、19 bp、26 bp和31 bp时,SNa Phot分型检测MHV c DNA的最低浓度为1.25 mg/L,特异性为100%,与ELISA和T-克隆测序比较,其准确性为100%(41/41),阳性样本均为JHM毒株。实验结果说明,所建立的SNaPshot检测方法能对MHV_1、MHV_3、JHM、A_(59)进行分型检测,并且具有灵敏、特异、准确的优点。     

│ω│滤波器对光声成像的影响

光声成像结合了组织纯光学成像和组织纯声学成像的优点,是一种很有潜力的无损伤的医学成像技术。本文研究了四种不同的ω滤波器,即RL滤波器,SL滤波器,改进的SL滤波器和Kwoh-R eed滤波器,利用滤波反投影算法分析了它们对光声图像重建质量的影响,由仿真和实验结果表明,Kwoh-R eed滤波器对强噪音有着很好的抑制作用,能明显的提高图像的对比度。实验所用的光源为YAG激光器,波长为532 nm,重复频率为30 H z,脉宽为7 ns,探测器为针状的PVDF膜水听器,接收面积的直径为1 mm。     

|ω|滤波器对光声成像的影响

光声成像结合了组织纯光学成像和组织纯声学成像的优点,是一种很有潜力的无损伤的医学成像技术。本文研究了四种不同的｜ω｜滤波器,即RL滤波器,SL滤波器,改进的SL滤波器和Kwoh-Reed滤波器,利用滤波反投影算法分析了它们对光声图像重建质量的影响,由仿真和实验结果表明,Kwoh-Reed滤波器对强噪音有着很好的抑制作用,能明显的提高图像的对比度。实验所用的光源为YAG激光器,波长为532nm,重复频率为30Hz,脉宽为7ns,探测器为针状的PVDF膜水听器,接收面积的直径为1mm。     

γ-氨基丁酸信号对小鼠胎盘早中期建立的影响

为了观察γ-氨基丁酸B型受体R1亚基(GABAB1R,GB1)在妊娠小鼠第1天至第8天(D1～D8)子宫中的表达规律,探讨γ-氨基丁酸(GABA)信号是否参与了胎盘早中期建立.应用半定量RT-PCR、免疫组织化学及Western blotting检测GB1在妊娠小鼠D1～D8子宫中的表达情况,原代分离D8.5的绒毛膜锥(EPCs)及蜕膜细胞,检测GABA及GABA B型受体激动剂baclofen、拮抗剂2-hydroxysaclofen对EPCs黏附及外延生长以及对蜕膜细胞侵袭能力的影响.D8时体内注射0.05 g/kg、0.5 g/kg及5 g/kg的GABA,于D14收集胎盘,制作石蜡切片.结果显示,GB1 mRNA及蛋白动态表达于D1～D8子宫.100μmol/L GABA及5μmol/L Baclofen促进EPCs的外延生长,抑制蜕膜细胞的侵袭,同时,20μmol/L 2-hydroxysaclofen成功逆转GABA对EPCs及蜕膜细胞的侵袭调节作用.5 g/kg的GABA可导致D14小鼠胎盘的迷路层滋养层细胞增多,母鼠血窦及胎鼠血管减少或发育不良,海绵滋养层的细胞滋养层细胞变小,糖原细胞减少或消失.结果提示,在小鼠早中期胎盘建立过程中,GABA信号促进滋养层侵袭至母体蜕膜组织,而抑制蜕膜细胞积极主动的侵袭行为,并可损害胎盘的结构.     

转基因动物表达生产人体活性蛋白的研究进展

由于基因工程技术的应用,那些过去只能从组织或捐献血液中提取的、具有重要医学实验研究或临床治疗价值的活性蛋白,现在可通过转基因生产系统而大量生产,例如:参与凝血控制的Ｃ蛋白(ＰＣ)和凝血因子Ⅷ和Ⅸ,它们均微量地存在于正常人体血浆中(≤ｍｇ/Ｌ),用提纯方法获取它们花费昂贵,不仅如此,血浆中还潜伏着某些传染性病原的威胁。对ＨＩＶ和肝炎Ｃ病毒经血液制品传播的担忧正促使研究人员努力寻求取代来自人类血液蛋白药物的替代物质;最近对克雅氏病(ＣＪＤ)的恐惧已经使得美国红十字会不再从欧洲进口部分血液制品[1]。将稀有人体蛋白基因…     

金黄色葡萄球菌反向线性杂交探针检测方法的建立

目的建立一种检测金黄色葡萄球菌的简单、快速、灵敏、准确的方法。方法根据金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶nuc基因,设计一对通用引物及两条特异性探针,用生物素标记通用引物的5＇端,将两条特异性探针固定于硝酸纤维膜上,使PCR产物与探针杂交。结果建立的反向线性杂交探针方法,其检测限为2 ng/μL,检测特异性和准确性均为100%。结论建立的反向线性杂交检测方法具有较高的敏感性和特异性,可用于实验动物金黄色葡萄球菌的快速检测。