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流式细胞分选技术在微生物表面展示文库筛选中的应用进展 总被引:7,自引:0,他引:7
流式细胞分选技术具有测量速度快、统计学精度高、可在分析的同时把具有指定特征的细胞分选出来等特点,已广泛应用到微生物(细菌、酵母、噬菌体和杆状病毒等)表面展示文库的筛选。筛选配基的类型涵盖抗原模拟表位、特异性单链抗体或单链T细胞受体、酶变异体以及蛋白酶抑制剂等。本文对这方面的研究进展作一综述。 相似文献
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人CD14基因的克隆及序列测定 总被引:1,自引:0,他引:1
采用PCR技术,从佛波酯乙醇刺激的HL-60细胞基因组DNA中扩增获得了1.1 kb的人CD14基因.序列分析表明,有四个碱基发生了突变,其中两处为首次报道. 相似文献
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Ca~(2+)与细胞功能的调节 总被引:16,自引:0,他引:16
Ca~(2+)做为一种信使参与多种细胞功能的调节。本文着重从激动剂引起的Ca~(2+)动员(Ca~(2+)mobilization)方面阐述 Ca~(2+)对某些细胞反应系统的调节机理,这种调节作用对于细胞生理功能的表现有极其重要的意义。 相似文献
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微生物展示技术在重金属污染生物修复中的研究进展 总被引:3,自引:0,他引:3
自然界对环境金属污染物的迁移和转化具有微秒而复杂的选择控制机理,生物修复技术以其投资少,效率高,可以原位处理低浓度有害污染物的特性而在环境治理中具有极大潜力。考虑传统的生物修复技术常常不能满足重金属治理的要求,基于重金属离子高效结合肽的微生物展示技术,有望在重金属生物修复中发挥重要作用。 相似文献
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利用IgA蛋白酶β结构域为骨架构建细菌表面展示随机肽库 总被引:1,自引:0,他引:1
以IgA蛋白酶β结构域为骨架构建细菌表面展示随机肽库。设计合成两条寡核苷酸双链,链1含有一个随机编码序列(NNK)10,其3'端可与链2互补。通过两条链的退火、延伸、酶切、回收后与酶切、去磷酸化的载体以最佳连接比连接,采用酚∶氯仿抽提去除残留的连接酶,分批进行电转化,获得一库容量为5×106的随机肽库。随机挑选10个克隆进行测序,结果显示所构建肽库的基本框架与预期设计相符,四个寡核苷酸出现的频率也与理论值相接近,表明所构建的随机肽库是成功的。 相似文献
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重组人可溶性CD14在昆虫细胞表达系统中的表达 总被引:4,自引:0,他引:4
BAC-TO-BAC杆状病毒表达系统是一种快速、高效、便捷的表达系统.将人可溶性CD14(sCD14)基因克隆入pFASTBAC1转移质粒中,重组质粒转化DH10BAC感受态细胞,目的基因通过同源重组插入BacmidDNA中,后者转染sf21昆虫细胞获得重组杆状病毒.利用重组蛋白C-末端的6×His@Tag,经TALON金属螯合色谱将重组病毒感染昆虫细胞获得的无血清培养上清--步纯化得到重组蛋白,计算表明从1L培养基中可纯化到约8mg纯度大于95%的重组sCD14蛋白,免疫印迹结果表明重组蛋白具有与抗6×His单抗和抗CD14单抗结合的抗原性.疑胶迁移实验和细胞活性实验表明重组sCD14蛋白能在体外与LPS结合,并能增强LPS诱导THP-1细胞产生细胞毒性因子. 相似文献
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以GST融合蛋白为靶从噬菌体肽库中筛选结合肽 总被引:2,自引:0,他引:2
以重组的谷胱甘肽S-转移酶(GST)和目标蛋白的融合蛋白为靶,通过将其固定于谷胱甘肽琼脂糖凝胶上,可以方便地从噬菌体肽库中筛选目标蛋白的结合肽.用此方法筛选到含WWXF结构的HIV-1病毒蛋白R(Vpr)的结合肽,与经典的将Vpr包被于培养板上的筛选方法相比,此方法具有简便、快速的优点. 相似文献
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为了探讨胰岛素样生长因子结合蛋白 3(IGFBP- 3)分子上的胰岛素样生长因子 1 (IGF- 1 )结合位点并找出其关键氨基酸残基组成 ,首先建立了研究 IGF- 1与 IGFBP- 3相互作用的酵母双杂交模型 ,可以定性和定量地分析两个蛋白质之间的相互作用大小 ;同时利用基因体外定点突变的方法 ,对推断出的 IGF- 1结合位点中的氨基酸突变 ,经 DNA序列分析 ,构建了 5种 IGFBP- 3突变体 .然后在酵母双杂交模型中通过对报告基因活性的定量分析 ,检测 IGF- 1与各种 IGFBP- 3突变体之间相互作用的大小 .结果表明 ,IGFBP- 3分子上的 Lys2 2 2 ,Gln2 2 3突变后 ,与 IGF- 1的结合力大大下降 ,而 Arg2 2 5,Pro2 2 6,Ser2 2 7突变后也导致与 IGF- 1结合力的部分下降 .从而初步确定了IGFBP- 3分子中第 2 2 2~ 2 2 7位的氨基酸区域为 IGF- 1的结合位点 ,并且 IGFBP- 3分子上 Lys2 2 2 ,Gln2 2 3在与 IGF- 1结合中起着重要作用 . 相似文献