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1.
碱裂解法是目前最为广泛应用的细菌质粒DNA的提取方法。但该法提取DNA所需时间较长,通常需要2h以上。为了快速提取质粒DNA,对常规碱裂法中溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、RNA酶A及无水乙醇的反应时间由原来的5min,5min,10min,30min,10min分别缩短至5s,1min,5s,10min,5min。这种改良方法极大地缩短了DNA的提取时间,可在30min内完成整个DNA的制备,且制备的DNA可直接应用于进一步的酶切,连接及PCR等各种分子生物学分析。  相似文献   
2.
影响复合针介导的大豆遗传转化效率的主要因素研究   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的:提高复合针介导的大豆遗传转化效率。方法:以萌发1d的半片大豆种子作为目标组织,用复合针对其子叶节组织进行刺伤处理,并接种于含有pCAMBIA1201载体的根癌农杆菌LBA4404中;采用GUS染色法测定瞬时表达效率。结果:刺伤处理中,用复合针刺伤2次时,转化效率最高,平均每个外植体达到9个蓝色斑点;基因型对转化效率也有较大影响,所试5个品种中,合丰25的转化效率最高,平均为7_3个蓝色斑点;共培养时间以5d为宜;添加抗氧化剂1.0mmol/L二硫苏糖醇+1.0mmol/L硫代硫酸钠+3.3mmol/L半胱氨酸时,能够明显提高瞬时转化效率。结论:提高了复合针介导的大豆遗传转化效率。  相似文献   
3.
琼脂糖凝胶中DNA片段的挤压回收法   总被引:6,自引:1,他引:5  
为了简化琼脂糖凝胶中DNA片段的回收,该文报道一种新的挤压回收法。将含有DNA片段的凝胶块放在折叠的封口膜之间,然后用一小塑料平板将凝胶块中的DNA溶液用力挤出,用移液枪把所有挤压出的DNA溶液放入effendorf管中,然后用常规的苯酚抽提法进行纯化。DNA回收率达到40-60%(w/w)。该方法简单而有效,且回收的DNA能够直接应用于酶切、连接及PCR等各种分子生物学操作。  相似文献   
4.
目的 虽然大豆遗传转化取得了较大进展,但其转化效率仍然偏低。因此,有必要建立一个更加简单和高效的大豆转化系统。本研究的目的是以大豆成熟种子萌发产生的叶片(MSDL)为靶外植体,高频诱导和转化大豆体细胞胚(somatic embryos,SEs)。方法 萌发7 d的大豆幼苗上摘取叶片,并将其切成1.2 cm×1.2 cm的外植体。将叶片外植体置于胚胎诱导培养基(EIM)上诱导体细胞胚发生。将叶片外植体浸入携带p CAMBIA1301植物表达载体的农杆菌EHA105菌液进行遗传转化。结果 MSDL (包括初生叶和次生叶)均能被诱导产生SEs。大多数SE发生在叶片切口处。所试的不同基因型均能诱导SEs。SEs的最高诱导率为95.0%。β葡糖醛酸糖苷酶(GUS)染色结果表明,平均转化效率达到75.4%。DNA印迹(Southern blot)结果表明,目的基因稳定整合在大豆基因组中,拷贝数为1~3个。结论 本研究建立了以大豆MSDL为靶组织的体细胞胚高频诱导和遗传转化。该系统有望在大豆基因组编辑技术的开发上得到应用。  相似文献   
5.
茉莉酸甲酯:一种重要的植物信号转导分子   总被引:6,自引:0,他引:6  
作为一种信号转导分子,茉莉酸甲酯在植物生长发育、代谢调节、抗病、耐逆、防御相关基因的诱导表达等方面均起着重要的作用。由于茉莉酸甲酯所具有的上述多效性,其作用与机制受到人们的广泛关注。本文简要介绍了植物中茉莉酸甲酯信号转导作用的相关研究进展。  相似文献   
6.
薛仁镐  张标 《遗传学报》2007,34(4):339-346
茉莉酸甲酯是一种调节植物形态发生、诱导防御相关基因的植物信号转导分子。为了解内源茉莉酸甲酯在植物发育中的作用,将编码茉莉酸甲基转移酶的NTR1基因与CaMV 35S启动子连接并导入大豆植株。PCR及Northern杂交结果表明,NTR1基因稳定整合在大豆基因组并得到过量表达。与野生型植株相比,转基因大豆叶片与根的形态发生了显著的变化。大部分转基因大豆叶片变得细长,初生根生长受到抑制而侧根的生长却受到促进。定量分析结果表明,转基因大豆植株叶片中茉莉酸甲酯的含量比对照高出 2~2.5 倍。这些结果表明,内源茉莉酸甲酯的积累参与了大豆形态发生的调控。  相似文献   
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