国产混合纤维素膜为载体的点免疫结合试验

应用国产混合纤维素膜为载体代替进口硝酸纤维素膜、以Tween-20作阻断剂代替昂贵的牛血清白蛋白进行点免疫结合试验。结果表明,国产混合纤维素膜可以保持点免疫结合试验固有的优点,且价廉、易买到;Tween-20阻断未出现明显非特异性背景着色。这些改进有利于点免疫结合试验技术的推广。     

聚丙烯酰胺凝胶电泳脂蛋白带的耐尔氏蓝染色法

目前聚丙烯酰胺凝胶电泳用考马斯亮蓝G或R染蛋白带、用过碘酸-Schiff试剂染糖蛋白带,均取得了满意的结果.至于用油红(OR)、苏丹黑(SB)对琼脂、醋酸纤维膜等凝胶中的脂蛋白带的染色鉴定是成功的,但对聚丙烯酰胺凝胶中的脂蛋白带的染色则不够满意.我们应用耐尔氏蓝[Nile’s blue] 染色法染盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳的脂蛋白带取得了较好的结果.现介绍如下:     

日本血吸虫32kDa蛋白质基因在真核表达载体中的亚克隆

设计和合成特定寡核苷酸引物,TRIZOL提取日本血吸虫成虫RNA,RT-PCR法扩增日本血吸虫32kDa蛋白质(Sj32)基因编码序列,将扩增产物连接pGEM-T克隆载体,再亚克隆到真核表达载体pBKCMV中.结果RT-PCR法特异性扩增出Sj32编码基因片段,其大小约为1270bp,经双酶切、PCR鉴定表明所构建的质粒pGEM-Sj32和pBK-Sj32中含有目的基因.pBK-Sj32重组质粒的成功构建,为进一步表达Sj32及其在血吸虫病免疫诊断、免疫预防中的作用研究提供了条件.     

Sephadex G200柱层析提取BALB/C小鼠血性腹水IgG单克隆抗体(McAb)

在免疫学实验中,饱和硫酸铵法和DEAE纤维素离子交换法是提取IgG的常规方法。然而,对于溶血样品IgG的提取,Sephadex G200柱层析法(G200法)有其独到之处,现将实验报告如下。 将经处理的Sephadex G200装柱(2.6×50cm),用pH7.4、0.1mol/L PBS平衡过夜。次日加BALB/C小鼠血性腹水(含IgG_1 McAb)4ml,用PBS洗脱。     

酶联免疫检测仪-考马斯亮蓝法测定蛋白质含量

蛋白质定量方法虽然较多,但有些方法操作费时,如凯氏定氮法和Lowry氏法;有些方法需要的样品量较大,如用751型分光光度计进行紫外线吸收法测定;有些方法灵敏度不高,如双缩脲法。为弥补上述不足,我们试用酶联免疫检测仪-考马斯亮蓝法测定蛋白质含量,现将实验报告如下。     

日本血吸虫32dDa蛋白质基因在真核表达载体中的亚克隆

设计和合成特定寡核苷酸引物,TRIZOL提取日本血吸虫成虫RNA,RT－PCR法扩增日本血吸虫32kDa蛋白质（Sj32）基因编码序列,将扩增产物连接pGEM-T克隆载体,再亚克隆到真核表达载体pBK CMV中。结果：RT－PCR法特异性扩增出Sj32编码基因片段,其大小约为1270bp经双酶切、PCR鉴定表明所构建的质粒pGEM-Sj32和pBK-Sj32中含有目的基因。pBK-Sj32重组质粒的成功构建,为进一步表达Sj32及其在血吸虫病免疫诊断、免疫预防中的作用研究提供了条件。