重组抗HER2 ScFv/tBid 基因的表达对SGC7901胃癌细胞的促凋亡作用

目的：构建重组抗HER2 ScFv/tBid载体并观察其对胃癌SGC7901细胞的促凋亡作用。 方法： 将重组抗HER2 ScFv/tBid基因克隆入真核表达载体pCMV中,转染SGC7901细胞,用RT-PCR方法检测目的基因在mRNA水平的表达,间接免疫荧光法检测目的蛋白表达和细胞形态学变化,通过细胞计数检测转染目的基因后对细胞生长的影响,通过检测细胞周期来观察其促凋亡作用。 结果：转染SGC7901细胞后,检测出目的蛋白的表达。细胞计数发现细胞的增殖被明显抑制。细胞周期分析有明显的凋亡峰出现,说明重组抗HER2 ScFv/tBid表达后有促凋亡作用。 结论： 重组抗HER2 ScFv/tBid基因可以在转染的SGC7901细胞中表达,并且可抑制转染细胞的生长,诱导细胞发生凋亡。     

CXCR4在脊索瘤组织中的表达及其临床意义

目的:探讨脊索瘤组织中CXCR4的表达情况,并分析其在脊索瘤侵袭和复发中的作用及临床意义.方法:应用免疫组织化学方法检测42例脊索瘤及16例骨样骨瘤患者标本中CXCR4的表达,并分析其与侵袭复发的关系.结果:脊索瘤组织中CXCR4的阳性表达率为80％(34/42),而在骨样骨瘤中的表达率为12.5％(2/16),两者比较有显著差异(P＜0.01),在正常脊索组织中无表达.CXCR4的表达与脊索瘤患者的性别、年龄无关(P＞0.05);而与脊索瘤有无复发有关(P＜0.05).结论:CXCR4可能在脊索瘤细胞侵袭、复发的过程中起重要作用,为进一步的研究奠定基础.     

涉及桡骨远端骨巨细胞瘤的外科手术疗效比较

目的：探讨和比较不同手术术式治疗涉及桡骨远端的骨肉瘤的手术适应症选择,临床疗效和安全性。方法：将2005 年-2014 年我院收治的涉及到桡骨远端并进行外科手术治疗的骨巨细胞瘤患者共88 例进行回顾性分析。根据影像学Campanacci分级,主 要手术方法分为以下三种,分别为：A组：微波天线高温原位灭活,自体髂骨,异体骨粒符合骨水泥重建修复术;B：瘤骨切除并腓 骨移植术;C：瘤骨刮除灭活并原位植骨术。结合详实的随访资料对两组患者在术后的复发率,腕关节功能（Enneking）等情况给予 分析和评价。结果：A 组复发率为10.87 %,腕关节功能MSTS93 功能评分为26.32± 2.92分。B 组复发率为0,腕关节术后的 MSTS93 功能评分为22.85± 4.16 分。C 组复发率为30.24 %。腕关节术后的MSTS93 功能评分为26.97± 2.84 分。三组相比,A、 B 与C 组在复发率中有明显统计学差异（P<0.05）,A 组、C组的术后功能评分明显优于B 组（P<0.05）,但两组之间无统计学差异 （P>0.05）。A 组中有1 例切口表层感染,B 组中有2 例皮肤感染,均经加强换药后治愈。结论：瘤段切除手术能够有效的降低复发 率,但局部功能恢复较差,容易出现切口感染等并发症。微波灭活手术可以有效的杀灭肿瘤组织并保证良好的功能性,但复发率 相对较高。在临床工作中应根据患者具体病情和需要给予针对性的手术方案。     

成年犬股骨微波灭活骨缺损模型的建立

目的　建立成年犬股骨微波灭活骨缺损的实验动物模型 ,为骨缺损修复的研究提供实验依据。方法应用自行研制的骨肿瘤微波治疗仪 ,以 1 5kHz频率、70W功率加热至 5 0～ 5 5℃ ,维持 2 0min ,造成犬股骨中段不同大小的骨缺损。结果　在保持犬股骨连续性的前提下 ,长度 1 5cm的骨缺损 9个月时有 1 2被新生骨填充 ,长度2 5cm和 3 5cm的骨缺损 9个月时无愈合倾向 ,但后者骨折的发生率高。结论　成年犬股骨微波高温造成的骨缺损 ,长 2 5cm、宽 1 0cm 9个月不能自愈 ,适宜于各种骨修复材料的填充 ,是理想的实验模型     

低强度周期性静水压力对人膝关节软骨细胞的影响

目的:探讨低强度周期性静水压力对体外培养的人膝关节软骨细胞增殖、凋亡,以及细胞Ⅱ型胶原分泌表达的影响。方法:体外酶消化法分离培养成人膝关节正常软骨细胞,将培养的第3代软骨细胞分为两组:正常对照组、3.0MPa组压力实验组,应用多功能恒温体外细胞培养中高压静水压力加载装置加载低强度周期性压力,共5d,每天2h。Ⅱ型胶原免疫组织化学染色法和甲苯胺蓝染色法鉴定软骨细胞,流式细胞术检测细胞凋亡,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法绘制细胞生长曲线,qRT-PCR、Western-Blot检测Ⅱ型胶原的分泌和表达。结果:软骨细胞Ⅱ型胶原免疫组织化学染色和甲苯胺蓝染色均显示为阳性。与正常对照组相比,3.0MPa组表现出促进软骨细胞增殖,抑制细胞凋亡,且Ⅱ型胶原的合成分泌明显升高(P0.05)。结论:通过体外模拟人生理情况下较低强度(3.0MPa)的周期性静水压力对人软骨细胞增殖、凋亡水平及周围基质分泌合成功能的影响,初步证实了较低强度压力有助于软骨自我修复和自身保护作用的发挥。     

大鼠髓核细胞原代培养及表型鉴定

目的:探讨Ⅱ型胶原酶联合透明质酸酶消化分离培养髓核细胞及免疫细胞化学表型鉴定的可行性。方法:无菌条件下分离SD大鼠凝胶状髓核,采用Ⅱ型胶原酶联合透明质酸酶消化分离髓核细胞并连续培养,倒置相差显微镜下观察,随后进行免疫细胞化学染色检测不同代次髓核细胞HIF-1、Ⅰ、Ⅱ型胶原、MMP2及蛋白聚糖的表达情况,并给予MTT法测定髓核细胞生长曲线。结果:Ⅱ型胶原酶联合透明质酸酶分离培养原代髓核细胞需要12 d左右贴壁,达95%融合需要34 d,而传代髓核细胞贴壁速率明显增快至10 h,且其倍增时间约为2.5 d;免疫细胞化学显示髓核细胞均表达HIF-1、Ⅰ、Ⅱ型胶原、MMP2和蛋白聚糖,且随着髓核细胞传代其HIF-1α、HIF-1β、Ⅰ型胶原及MMP2表达均增加,但Ⅱ型胶原表达降低,而蛋白聚糖表达无明显差异;MTT法显示随着髓核细胞传代其增殖有所减缓。结论:Ⅱ型胶原酶联合透明质酸酶可成功分离髓核细胞,提高培养效率,且HIF-1α、HIF-1β、Ⅰ、Ⅱ型胶原及MMP2可作为髓核细胞表型分子用于髓核细胞的鉴定。     

中低温度热疗对人骨肉瘤SaoS-2细胞VEGF表达和分泌的影响

目的:探讨中低温度热疗对人骨肉瘤SaoS-2细胞株VEGF蛋白表达和分泌的影响.方法:经43℃中低温作用过后的SaoS-2细胞分别提取其全细胞蛋白和收集其培养上清,再使用Western Blot方法和ELISA方法分别检测SaoS-2细胞表达和分泌VEGF蛋白的状况.结果:43℃加热可以抑制人骨肉瘤SaoS-2细胞表达和分泌VEGF,并且其抑制效应随着加热时间的延长而逐渐增强.结论:中低温度引起的VEGF表达和分泌的降低,在中低温度热疗的抗肿瘤机制中可能发挥了一定的作用.     

人白细胞介素—2基因在人骨肉瘤细胞系内表达

从ｐＨＩＧ５３质粒内切下人白细胞介素－２ｃＤＮＡ基因,并经中间一ｐＳＰ７２转换成与ｐＤＯＲ－ｎｅｏ载体相区域的酶切位点,然后将ＩＬ－２ｃＤＮＡ定向连接入ｐＤＯＲ－ｎｅｏ载体,构建成功人ＩＬ－２逆转录病毒载体,经脂质体民入人骨肉瘤细胞系Ｍａ中,经Ｇ４１８筛选后测转基因肿瘤细胞培养上清中ＩＬ－２表达量,每１×１０＾５细胞２４ｈＩＬ－２表达量为５０－８００Ｕ,为骨肉瘤的基因治疗创造条件。     

矫形器在地震后骨科伤员中的应用分析

目的:总结汶川地震中骨科伤员使用矫形器的救治经验,为大规模突发灾难事件应用矫形器救治康复提供参考.方法:对本科自2008年5月收治的60例汶川地震转运的骨科伤员术前术后配戴不同部位的矫形器,进行康复训练,然后对矫形器的康复效果进行分析.结果:我院共救治骨科病人60例,骨折伤员57例,神经损伤3例;有25例伤员行手术治疗;3例截肢伤员因残端感染严重而行多次残端清创、修整.除截肢伤员外,其余所有伤员均配戴矫形器进行康复训练.所有配戴矫形器的伤员未出现并发症,经过三个月的康复治疗,全部伤员康复出院.结论:汶川地震转运骨科伤员的术前术后配戴矫形器,能积极防治相关并发症,具有促进伤员早日康复的作用,对今后灾难救援具有指导意义.     

人成骨肉瘤细胞CD147基因编码区的克隆和序列测定

克隆人成骨肉瘤细胞CD147基因编码区并进行序列测定。以人成骨肉瘤细胞系MG63的mRNA为模板,采用RT-PCR方法得到人CD147的编码区cDNA,克隆至载体pcDNA3．1( )中,酶切鉴定后进行序列分析。结果获得人CD147编码区基因和重组质粒pcDNA3．1( )／asCD147,并经DNA序列分析证实其序列和献报道一致。以上结果证明了CD147在成骨肉瘤细胞中也有表达,为进一步进行其结构和功能研究打下了基础。