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1.
ob/ob小鼠是糖尿病相关研究中使用最广泛的动物模型之一,近年来,市场需求呈上升趋势。与野生型小鼠相比,其瘦素蛋白基因105号密码子发生CT点突变,导致不能产生正常的瘦素蛋白。该模型4周前外观表型与野生型无异,而ob/ob纯合子不育,因而在繁殖建系过程中,需要通过基因型鉴定纯合、杂合和野生三种基因型。该文建立了基于高分辨率溶解曲线分析(high resolution melting analysis,HRM)的基因型鉴定方法,基因型分型结果与常规PCR加酶切方法一致,也与DNA测序结果吻合;通过该方法分型后获得纯合子小鼠外观表型、血糖浓度参数符合预期。该方法较常规方法省时、高效、节省实验成本,可用于大规模ob小鼠繁殖中的基因型鉴定。  相似文献   
2.
呼吸道合胞病毒(RSV)感染遍布全球,并可导致严重的疾病,但目前尚无成功的疫苗问世。为寻求可能用于RSV疫苗研制的重组蛋白抗原,我们在克隆RSV-A全长G蛋白基因的基础上,构建了多种共表达载体蛋白和G蛋白片段的表达载体,并从中筛选出能以可溶形式高效表达抗原蛋白的原核表达体系。通过亲和层析纯化了重组蛋白抗原DsbA-G101,将其免疫Balb/c小鼠后获得了相应的抗血清。经ELISA检测表明DsbA-G101具有良好的免疫原性。基于本研究所构建的系列表达载体,可以比较不同的G蛋白片段免疫原性的强弱及载体蛋白的优劣,从中发现最佳的RSV抗原蛋白。  相似文献   
3.
组织切片多光谱定量分析技术是近年建立起来的新的组织病理学分析方法,由三大技术环节组成,即多重免疫荧光标记、多光谱成像设备与光谱拆分算法、定量组织切片图像分析软件。该分析技术可以获得传统病理学、免疫组化、多标记流式细胞术无法获得的信息。我们简述了该方法的原理,及其在肿瘤免疫和其他疾病诊断、预后效果研判、疾病发生机制等领域的应用进展。  相似文献   
4.
一种经济实用的目标DNA片段回收法   总被引:5,自引:0,他引:5  
介绍了一种经济、实用 ,不需任何特殊设备和试剂的从普通琼脂糖胶中回收目标DNA的新方法。首先用普通琼脂糖电泳使PCR产物分离 ,在长波长紫外灯下切割目标带胶块 ,然后制备一块新胶 ,插上两把相同的大齿梳子 ,形成“加样孔”和“回收孔”。将胶块置于“加样孔”后 ,进行二次电泳 ,并在紫外下时时监测 ,待目标带进入“回收孔”时 ,吸出DNA溶液 ,经无水乙醇沉淀后 ,可用于PCR扩增、探针制备等研究  相似文献   
5.
目的从单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)水平探索小鼠生化标记基因Hbb多态性的形成机理。方法从DNA、RNA和蛋白多肽3个方面分析研究Hbb基因的多态性。结果基因组DNA中有4个SNP位点与Hbbd/s多态性相关:分别为外显子1中的2个T(G),外显子2中的G(A)和外显子3中的A(G);RNA水平有4个SNP位点与Hbbd/s多态性相关:分别对应为外显子1中的2个T(G),外显子2中的G(A)和外显子3中的A(G);蛋白多肽水平第13、20和139位氨基酸残基,即Cys/Gly、Ser/Ala和Thr/Ala间的转换与Hbb/s多态性相关,分别对应于外显子1中的2个T(G)和外显子3中的A(G)。结论第13、20和139位氨基酸残基,即Cys/Gly、Ser/Ala和Thr/Ala间的转换可能是Hbbd/s多态性的形成原因。  相似文献   
6.
目的:分析转基因c-Ha-ras在C57-ras癌症小鼠模型中的组织表达谱及时空表达差异。方法:利用半定量及荧光定量RT-PCR法,分析不同首建鼠系、不同周龄小鼠各脏器中转基因c-Ha-ras的表达。结果:转基因c-Ha-ras在心、肝等13种组织器官中均有表达,在肺脏中表达最高,在肝脏中表达最低,No.2、No.3和No.5等3个首建鼠均呈现相似的变化规律;转基因在No.5首建鼠中表达水平最高,而在同一个首建鼠系中,12周龄时表达高于8周龄和24周龄。结论:转基因c-Ha-ras在各脏器中能高效表达,并间接表明该转基因能稳定遗传,为C57-ras癌症小鼠模型用于新药临床前致癌性评价提了供理论支持。  相似文献   
7.
目的将新近建立的单管双向等位基因专一性扩增(single-tube bi-directional allele specific amplification,SB-ASA)方法用于分析近交系小鼠基因组中的单核苷酸多态性(SNP)。方法以5个近交系小鼠为研究对象,采用SB-ASA方法对其16个SNP位点进行检测,并通过双盲实验和测序验证该方法的可靠性;且考察了该方法中PCR反应各成分及扩增条件对结果的影响。结果16个SNP位点,SB-ASA都成功地对5个品系小鼠进行了分型,与测序结果完全一致;双盲实验结果显示通过3个SNP位点即可鉴别5个品系。结论SB-ASA方法可用于近交系小鼠SNP的遗传检测,可望作为一种新的分子生物学遗传检测方法推广应用。  相似文献   
8.
改进的免疫双向扩散方法及其应用   总被引:3,自引:0,他引:3  
介绍了一种改进的免疫双向扩散方法及其在重组呼吸道合胞病毒(RSV)疫苗研制中的用途。本法在琼脂凝胶中附加0.1μg/mL左右的澳酚蓝,使凝胶呈淡蓝色,与抗原一抗体复合物产生的白色沉淀线形成较大的反差,可显示出比较微弱的沉淀线,因而改善了免疫双向扩散法的灵敏度。用这种改进的方法检测RSV抗血清滴度、筛查RSV阳性小鼠以及检测重组RSV蛋白疫苗的抗原反应性,均取得了较传统方法更佳的效果。  相似文献   
9.
细胞质雄性不育高粱叶绿体 ndh D 基因的序列变异   总被引:7,自引:0,他引:7  
片段SAAU-02 700特异地扩增自7种具可育细胞质的高粱材料的总DNA,含有叶绿体psa C(88bp)和ndh D(192bp)基因的部分序列。该片段与Eco Ri HindⅢ酶切的总DNA,线粒体DNA和叶绿体DNA杂交,在总DNA中获得了0.74kb的杂交带,而在叶绿体中获得0.74kb和0.45kb两条杂交带。与线粒体DNA无杂交;与经Hae Ⅲ酶切的总DNA杂交,在不育系中获得4.9kb的杂交带,而保持系的杂交带为4.45kb。参考GenBank中高粱的近缘物种玉米叶绿体基因组的序列,构建了ndh D基因区的酶切位点图谱,借此分析得出高粱不育系的叶绿体ndh D基因序列已发生改变。这种变异与高粱细胞质雄性不育反生的关系正在探讨中。  相似文献   
10.
目的 探究肠道病毒A71型(enterovirus A71, EV-A71)VP1-E98K突变对人清道夫受体B2敲入(human scavenger receptor class B member 2 knock-in, hSCARB2-KI)小鼠致病性的影响。方法 利用pSVA-EV-A71-Isehara感染性克隆重组质粒获取拯救的EV-A71 Isehara株,分别在人恶性胚胎横纹肌瘤(human rhabdomyosarcoma, RD)细胞和转染hSCARB2的RD细胞(RD-hSCARB2)中传代并收获病毒,感染小鼠后建立hSCARB2-KI小鼠感染模型。研究中还采用了感染小鼠的临床评分指标、RT-qPCR、HE染色和免疫荧光技术、ELISA、病毒滴定等方法研究病毒的致病性。结果 用RD细胞中连续传代获得的EV-A71 Isehara株攻击hSCARB2-KI小鼠,未观察到预期的体质量减少、行动迟缓、肢体瘫痪等临床表现;经测序确定该病毒株衣壳蛋白发生了VP1-E98K突变,故称之为VP1-98K突变株。而野毒型EV-A71 Isehara株(VP1-98E野毒株)感染的h...  相似文献   
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