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人可溶性白介素-4受体(sIL-4R)在甲醇酵母中的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
白细胞介素-4(IL-4)作为一种多功能的细胞因子在哮喘等变态性炎症反应中具有关键作用。IL-4通过结合细胞表面的白介素-4受体(IL-4R)发挥其生物学效应。sIL-4R缺少跨膜和胞内结构域,结合IL-4后不能产生信号传递来介导IL-4的生物学活性,但sIL-4R与IL-4结合的高度特异性和极高的亲和力使它非常适合作为理想的IL-4拮抗剂应用于哮喘等疾病的治疗。采用RT-PCR方法以人的单核细胞总RNA为模板扩增得到编码sIL-4R的基因片段,经测序证实后插入到甲醇酵母分泌表达质粒pPIC9K中,得到重组质粒pPIC9K/sIL-4R,利用限制性内切酶BalⅡ将其线性化后用电穿孔法导入Pichia pastoris GS115。分别用SDS-PAGE、Western blot和Ligand bioding blot对重组菌发酵上清中的sIL-4R进行鉴定。结果表明,在分子量约为30kD处有sIL-4R特异条带出现,并具有结合其配基IL-4的生物学活性。 相似文献
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人可溶性低密度脂蛋白受体在甲醇酵母中的表达 总被引:3,自引:0,他引:3
为获得低密度脂蛋白受体配基结合结构域在甲醇酵母中的分泌表达 ,首先用RT PCR方法以人肝癌Bel 740 2总RNA为模板扩增了编码低密度脂蛋白受体配基结合结构域的基因片段。核酸测序分析表明克隆到的DNA片段的序列与报道的人LDLR的cDNA序列相同。然后构建了甲醇酵母表达质粒pPIC9K sLDLr ,并将其线性化后用电穿孔法导入PichiapastorisGS115。分别用SDS PAGE、Westernblot和Ligandbindingblot对GS115 pPIC9K sLDLr上清中的重组sLDLR进行鉴定。SDS PAGE和Westernblot分析表明表达的sLDLR的表观分子量为 36kD。Ligandbindingblot分析表明表达的sLDLR具有配基结合的生物学活性 相似文献
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高密度脂蛋白受体在胆固醇逆向运输中起重要作用,并且其可以做为动脉粥样硬化的新型治疗靶点。为了构建以竞争性受体-配体相互作用为基础的体外高通量药物筛选模型,在甲醇酵母中表达了高密度脂蛋白受体胞外结构域。应用RT-PCR方法从人肝癌Bel-7402总RNA中扩增了编码高密度脂蛋白受体胞外结构域的基因片段,此基因片段测序证实后亚克隆至甲醇酵母分泌表达质粒pPIC9K中。经测序验证读码框正确后将重组质粒电转至Pichia pastorisGS115中。应用PCR方法确定目的基因的整合和Mut^ 表型。重组菌株用1%甲醇诱导5天后取发酵上清进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果表明,在分子量约64.5kDa处有sHDLR表达。随后应用Dil-AcLDL为配体证明了表达的sHDLR具有结合其配体AcLDL的生物学活性。 相似文献
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