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为了建立适合米根霉的遗传转化体系,应用重叠延伸PCR的方法构建了以潮霉素B抗性为选择标记的单交换整合型表达载体p BS-hygro-ldh A;分别采用PEG/Ca Cl2介导的原生质体转化、原生质体电转化及萌发孢子电转化的方法将表达载体p BS-hygro-ldh A转化入米根霉AS 3.819菌株中,并研究了菌丝酶解时间、孢子萌发时间以及电转化电场强度对于转化效率的影响;通过荧光定量PCR(q PCR)对米根霉转化子基因组中质粒整合拷贝数进行了检测,并研究了其对米根霉转化子抗性稳定性的影响。实验结果表明成功获得整合了表达载体p BS-hygro-ldh A的米根霉转化子。菌丝酶解140 min产生的原生质体其再生率和转化率最高,原生质体电转化最佳电场强度为13 k V/cm,孢子萌发2.5 h转化率最高,萌发孢子电转化最佳电场强度为14 k V/cm。萌发孢子电转化方法转化率要高于原生质体转化的方法。荧光定量PCR检测结果表明,在一定范围内,高质粒整合拷贝数的米根霉转化子比较稳定。研究建立了用于工业米根霉菌株的遗传转化体系,为米根霉代谢调控研究以及菌种改造工作提供了基础与支持。 相似文献
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药囊花茎叶的化学成分研究 总被引:2,自引:1,他引:1
药囊花(Cyphotheca montana Diels)茎叶的乙醇提取物具有抗菌活性,进一步的活性追踪表明活性成分在乙酸乙酯和正丁醇萃取物中,我们从这两种萃取物中共分离鉴定出9个化合物,其结构通过波谱分析等分别鉴定为:槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖甙(1),杨梅素-3-O-α-L鼠李糖甙(2),山萘酚-3-(2″,6″-二-O-(E)-p-羟基苯丙烯酰-β-D-吡喃葡萄糖甙(3),3,3′-O-二甲基逆没食子酸-4-O-β-D-吡喃葡萄糖甙(4),槲皮素(5),2α,3β,19α,23-四羧基乌苏-12-烯-28-酸-28-0-β-D吡喃葡萄糖甙(6),乌苏酸(7),β-谷甾醇(8)和胡萝卜甙(9),这些化合物均为首次从我国该特有单种属植物中分离得到。 相似文献
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米根霉乙醇脱氢酶(ADH)突变菌株的诱变选育 总被引:4,自引:0,他引:4
米根霉发酵生产L-乳酸过程中,由于丙酮酸在丙酮酸脱羧酶、乙醇脱氢酶(ADH)催化下生成乙醇,使得丙酮酸向乳酸转化的流量减少。采用亚硝基胍(NTG)诱变米根霉AS3.3462孢子液,诱变剂量为0.15 mg/ mL时,致死率为70%~80%。在含丙烯醇的YPD筛选培养基上筛选获得两株ADH活力降低的突变株mut-1和mut-2,检测突变株mut-1和mut-2的最大ADH活力分别为35.67和43.09U/mL,是原始菌株的41.63%和50.29%。发酵72h后,原始菌株的乙醇与乳酸浓度分别为28.9g/L和40.31g/L,而mut-1和mut-2突变株的乙醇产量分别为4.87g/L和6.56g/L,乳酸产量为54.45g/L和44.07g/L。在相同的发酵条件下,米根霉ADH突变株mut-1和mut-2对还原糖的利用速率高于出发菌株,其生物量积累亦高于出发菌株。 相似文献
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无载体固定化米根霉重复间歇发酵生产L-乳酸 总被引:1,自引:1,他引:0
通过研究影响米根霉菌丝体形态的培养基因素,初步构建了无载体固定化米根霉重复间歇发酵生产L-乳酸的工艺条件.研究结果表明,首批次发酵培养基采用120 g/L葡萄糖,3 g/L硝酸铵,K 和Na 浓度比为1:1,发酵72 h后,米根霉菌体形态为均匀的茵丝体小球,直径为1.0 mm~2.0 mm,此时L-乳酸产量可达100.8 g/L,葡萄糖转化率为84%.在此基础上,利用米根霉菌丝体小球重复间歇发酵16批次,每批次发酵24h,此时葡萄糖转化率均高于75%,L-乳酸产量保持在60.0 g/L以上,米根霉菌丝体小球形态保持稳定. 相似文献
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