抗凋亡策略在细胞大规模培养中的应用

随着阐明凋亡发生的分子机制,现在可运用多种方法阻止细胞凋亡的发生。在大规模细胞培养过程中应用这些方法可促进细胞的存活,实现细胞大规模高密度培养,从而提高细胞生产有价值生物技术产品的能力。     

抗人肝癌单抗片段抗体HAb18F(ab'''')_2的冻干工艺研究

选择适合于HAb18F(ab')2片段抗体的冻干保护剂及其冻干工艺,是确保该生物制品的质量关键之一,对不同种类和不同浓度的保护剂进行了研究,结果表明10%蔗糖对HAb18F(ab')2片段抗体冻干样品的剂型、外观、残水量(<3%)、复溶时间(<10s)、纯度(>95%)及稳定性没有影响。研究优化与保护剂相结合的适用于HAb18F(ab')2片段抗体的最佳冻干工艺,为抗体片段扩大生产提供依据。     

抗人肝癌单抗片段抗体HAb18F(ab′)2的冻干工艺研究

选择适合于HAb18 F(ab′)2片段抗体的冻干保护剂及其冻干工艺,是确保该生物制品的质量关键之一,对不同种类和不同浓度的保护剂进行了研究,结果表明10%蔗糖对HAb18 F(ab′)2片段抗体冻干样品的剂型、外观、残水量(＜3%)、复溶时间(＜10 s)、纯度(＞95%)及稳定性没有影响.研究优化与保护剂相结合的适用于HAb18 F(ab′)2片段抗体的最佳冻干工艺,为抗体片段扩大生产提供依据.     

HFRSV内影像型抗独特型人单抗重链可变区基因克隆

利用反转录－ＰＣＲ方法,从分泌肾综合症出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）内影像型抗独特型人单抗杂交瘤细胞系（Ｃ８）中,成功地克隆了抗ＨＦＲＳＶ１ｄ人单抗重链可变区基因,并将此基因重组入Ｍ１３噬菌体ＤＮＡ中,测定了此重链可变区基因全序列。经计算机分析,基因全长共３５１ｂｐ、编码１１７个氨基酸,氨基酸序列同源性分析发现所推得的该单抗ＣＤＲ２区与ＨＦＲＳＶＧ２蛋白Ｃ端有同源区,此区可能具有较强的抗原性。     

无血清培养HAb18细胞的生长代谢与抗体分泌特征

通过逐步降低血清浓度,HPLC氨基酸分析及正交实验筛选研制了HAb18杂交瘤细胞的无血清培养基。对在该无血清培养条件下的细胞进行了计数,对培养上清液进行了葡萄糖、谷氨酰胺、乳酸和氨浓度以及抗体分泌量和抗原结合活性测定,并对动力学参数进行了分析,结果表明HAb18细胞在无血清培养条件下达到的最大细胞密度和抗体分泌量分别为0.91×106个/ml和43.8mg/L;细胞比生长速率较在有血清条件下稍有下降,而抗体合成速率提高(0.0207/h比0.0218/h,0.387pg/cell/h比0.218pg/cell/h,P<0.01)。无血清培养时葡萄糖和谷氨酰胺消耗无明显变化,但乳酸浓度降低,氨浓度升高;此外,分泌抗体的抗原结合活性增加。研究无血清培养条件下的HAb18细胞生长代谢和抗体分泌特征可为建立HAb18无血清悬浮流加培养工艺打下基础。     

连续灌流培养杂交瘤细胞生产单克隆抗体

自 2 0世纪 70年代以来 ,工程抗体在基础医学研究、临床诊断和治疗 ,以及免疫预防等领域中的广泛应用 ,大大促进了其产业化的进程。目前工业化生产单克隆抗体的主要方法是通过发酵罐、中空纤维和固定床等生物反应器培养系统 ,以微载体、微包囊法在体外大规模高密度培养杂交瘤细胞 ,再通过相关的纯化手段浓缩纯化制备抗体[1 ,2 ] 。就操作方式而言 ,一般采用两个基本策略 :①大容量高密度的悬浮培养 ,最多采用的是搅拌式气升式生物反应器 ,通过微载体依托细胞相对固定化 ,降低了搅拌培养时对细胞的剪切力 ,提高细胞的密度和稳定性及生产率。…     

扩张柱床吸附层析与固定柱床层析纯化单克隆抗体的比较

为满足Ⅰ类新药二期临床的药品需求量,单抗生产由实验室规模扩大到中试规模,在目标产品的下游纯化工艺中,采用扩张柱床吸附技术代替一期临床实验室规模方法中的澄清、浓缩、和最初的疏水层析,其后的纯化步骤保持不变。由于采用新的纯化路线,使得制备周期缩短23,处理能力由100ml小鼠腹水扩大至18～50L杂交瘤细胞培养液,回收率提高20%以上,并很容易根据需要线性放大规模,为单抗的的产业化提供了更为简便和高效的下游纯化模式。     

动物细胞大规模培养生产蛋白的工艺选择

目前全世界蛋白治疗药物的迅速增长和市场需求已远远超过了现有生产能力。动物细胞规模化生产重组蛋白和抗体的工艺选择可考虑使用当前较成熟的工业化支持技术平台,以缩短产品工艺研发的时间,加快工业化进程。当前被FDA批准的生物技术产品以及公开发表的生产工艺占有主流优势的是搅拌式生物反应器悬浮培养,工艺设计是流加或灌流培养。其大规模细胞培养生产所面临的挑战是获得最大生产力的同时注重维持产品的质量;去除所有培养环境中外源因子的污染,更为精确有效的工艺控制手段,规模化培养中氧气的限定与溶解CO2浓度累积的控制等。     

六种云杉的核型分析

对６种（含１变种）云杉属植物的染色体数目及形态特征进行了分析研究。研究树种均为我国特有种,其中４种在本文中首次报道。分析材料全部取自各树种中心产区的原始林内。其核型公式：鳞皮云杉（Ｐ．ｒｅｔｒｏｆｌｅｘａ）Ｋ（２ｎ）＝２４＝２２ｍ＋２ｓｍ;云极（Ｐ．ａｓｐｅｒａｔａ）Ｋ（２ｎ）＝２４＝２０ｍ＋４ｓｍ;青插（Ｐ．ｗｉｌｓｏｎｉｉ）Ｋ（２ｎ）＝２４＝２０ｍ＋４ｓｍ＋１Ｂ;紫果云极（Ｐ．ｐｕｒｐｕｒｅａ