大鼠胰腺发育中原癌基因c-met的表达及蛋白定位

目的:研究原癌基因c-met在大鼠胰腺发育不同阶段的表达及定位.方法:采用RT-PCR技术检测c-met基因在大鼠胰腺不同发育时期:孕15.5天(E15.5)和孕18.5天、新生、生后14天(P14)、P21及成年胰腺的表达.并用免疫组化技术对该基因编码的蛋白-肝细胞生长因子受体c-MET蛋白在胰腺发育不同阶段的定位进行分析.结果:c-met基因在E15.5、E18.5较成年特异性高表达.免疫组化结果显示该基因编码的蛋白c-MET在新生后的胰腺大量定位与胰岛细胞.结论:提示c-met可能在胰腺发育过程中起到调控作用,参与胰腺发育中新生后胰岛结构重塑过程.     

干细胞因子在消化系统肿瘤细胞中的表达及意义

以SGC7901、SW480、HepG2 3种细胞株为研究对象,分析顺铂(CDDP)对干细胞因子(stem cell factor,SCF)基因和蛋白质表达的影响,探讨SCF与消化系统肿瘤的关系.采用MTT方法筛选药物半数抑制浓度,用RT-PCR方法检测SCF mRNA表达量,并用Western Blotting方法检测SCF蛋白质表达水平.结果表明,CDDP可以抑制SCF mRNA在3种细胞株中的表达,差异均有统计学意义(P<0.05).SCF蛋白质在SGC7901细胞实验组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);SW480、HepG2细胞实验组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).因此,SCF在消化系统肿瘤细胞增殖过程中可能起重要作用.     

大鼠胰腺胚胎发育功能相关基因表达谱的分析

目的:研究大鼠胰腺胚胎发育不同阶段的基因表达谱,对比其功能相关基因随大鼠胰腺发育的变化.方法:采用显微分离及提取技术获得胚胎发育不同阶段胰腺组织并提取RNA,采用高密度寡核普酸芯片(Affemetrix芯片)对胚胎发育至第12.5天、15.5天、18.5天胚胎胰腺及成年胰腺进行基因转录水平分析,用生物信息学方法分析具体基因的表达情况.结果:胰腺的生物学功能尤其beta细胞功能相关基因insulin RNA,amylopsin RNA,GLUT-2 RNA等在胚胎15.5及18.5天显著高表达.结论:E15.5到E18.5直至出生是胰腺功能完善和成熟的阶段,这个时期以细胞功能成熟为主.     

C-met及相关基因在m大鼠胰腺发育功能完善中的表达

目的：研究原癌基因c—met及其相关基因在大鼠胰腺发育及细胞功能完善过程中的表达。方法：采用高密度寡核苷酸芯片（Affymetrix芯片）对孕12．5（E12．5）、E15．5和E18．5、新生、成年胰腺进行基因转录水平分析,并用RT—PCR验证基因在大鼠胰腺不同发育时期的表达。结果：c—met基因在E15．5、E18．5较成年特异高表达。芯片中c—met转录调控基因和信号传导通路相关基因的表达趋势与c—met高度相似。RT—PCR（所用引物设计区域与芯片相同）验证,c—met表达趋势与芯片结果相符;与芯片c—met探针所用引物不同RT—PCR,结果却在各发育阶段呈现与芯片不同的表达趋势。结论：提示c—met可能在胰腺发育细胞功能完善的关键阶段起调控作用,参与胚胎胰腺发育中晚期细胞功能完善的信号传导过程。并且c—met在胰腺发育中发挥作用有可能存在不同转录本。     

抗 Trx 单克隆抗体用于血吸虫病诊断的研究 *

摘要 目的： 建立双抗体夹心 ELISA 法检测日本血吸虫硫氧还蛋白 （Thioredoxin,Trx ）。方法： 用重组日本血吸虫 Trx （rTrx ） 蛋白免 疫 BALB/c 小鼠, 筛选高滴度、 高特异性的单克隆抗体建立双抗体夹心 ELISA 法。通过检测日本血吸虫排泄 - 分泌物 （ excretorysecretions,ES ） 与 rTrx 的浓度评价该方法的敏感性; 通过对健康人血清的检测确定其特异性; 通过对布氏姜片吸虫病、 华支睾吸虫 病、 卫氏并殖吸虫病、 囊虫病患者血清进行交叉反应试验, 评价该方法的特异性。 结果： 获得 2 株稳定分泌抗 rTrx 蛋白单克隆抗体 的杂交瘤细胞株, 命名为 McTrx1 和 McTrx2。以 McTrx1 为包被抗体, HRP-McTrx2 为酶标抗体, 建立的双抗体夹心 ELISA 可检 测出 ES 的最低浓度为 4.8 μg/ml, 检测出 rTrx 的最低浓度为 1.2 μg/ml。 该方法的特异性为 96%。 结论： 以抗 rTrx 蛋白单克隆抗体 McTrx1 与 McTrx2 为基础建立的双抗体夹心 ELISA 法具有较高的特异性。     

C-MET在大鼠胰腺发育过程中的表达

目的:研究CMET在大鼠胰腺发育阶段的表达和细胞定位.方法:运用RT-PCR和WesternBlot技术分别检测C-MET在大鼠胰腺发育阶段的mRNA和蛋白表达水平;运用免疫组化和免疫荧光技术检测不同时期C-MET在胰腺的组织细胞学定位.结果:RT-PCR结果显示E18.5 C-METmRNA高表达.Western Blot结果显示其蛋白在P14,P21高表达,并存在两种亚型,分子量分别为190KD和170KD.免疫组化和免疫荧光结果显示在不同发育时期C-MET在胰岛B细胞和间充质细胞都有表达.结论:C-MET在大鼠胚胎发育后期及生后出现高表达,并表达于胰岛B细胞和间充质细胞,可能参与了胰岛形成、结构重塑和功能维持.     

罗格列酮对胰岛素抵抗人肝细胞Angpil3和LXRα基因表达的影响

研究罗格列酮对胰岛素抵抗人肝L02细胞Angptl3基因及与脂代谢相关的LXRα基因的影响.采用高胰岛素诱导法建立胰岛素抵抗模型(IR-L02),分别加入含有和不含罗格列酮的不同葡萄糖浓度培养液培养,用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法(GOD-POD法)检测培养液残存葡萄糖量,并用RT-PCR方法检测基因Angptl3、LXRα mRNA表达水平的变化.结果表明相同葡萄糖浓度下罗格列酮作用组(IR-R组)的培养液残存葡萄糖量比无罗格列酮作用组(IR组)减少;IR-R组的Angptl3、LXRα mRNA表达水平较IR组显著升高(P<0.05).     

抗Trx单克隆抗体用于血吸虫病诊断的研究

目的：建立双抗体夹心ELISA 法检测日本血吸虫硫氧还蛋白（Thioredoxin,Trx）。方法：用重组日本血吸虫Trx（rTrx）蛋白免疫BALB/c 小鼠,筛选高滴度、高特异性的单克隆抗体建立双抗体夹心ELISA法。通过检测日本血吸虫排泄- 分泌物（excretorysecretions,ES）与rTrx的浓度评价该方法的敏感性;通过对健康人血清的检测确定其特异性;通过对布氏姜片吸虫病、华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病、囊虫病患者血清进行交叉反应试验,评价该方法的特异性。结果：获得2 株稳定分泌抗rTrx 蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为McTrx1 和McTrx2。以McTrx1 为包被抗体,HRP-McTrx2 为酶标抗体,建立的双抗体夹心ELISA 可检测出ES的最低浓度为4.8 μg/ml,检测出rTrx 的最低浓度为1.2 滋g/ml。该方法的特异性为96 %。结论：以抗rTrx 蛋白单克隆抗体McTrx1 与McTrx2为基础建立的双抗体夹心ELISA 法具有较高的特异性。     

干细胞因子与消化系统疾病的关系

干细胞因子（stem cell factor,SCF）是一种具有广泛生物活性的细胞因子,是酪氨酸激酶C-Kit的配体。SCF最初仅作为早期造血细胞的调节因子被研究,随着研究技术的改进和研究内容的深入,发现SCF不仅对造血功能有重要的调节作用,而且还在许多组织中表达,并发挥广泛的生物学作用,目前SCF的生物学作用正被深入广泛地研究。该文重点介绍SCF与消化系统疾病的关系。     

罗格列酮对胰岛素抵抗人肝细胞Angpil3和LXRce基因表达的影响

研究罗格列酮对胰岛素抵抗人肝L02细胞Angptl3基因及与脂代谢相关的LXRα基因的影响。采用高胰岛素诱导法建立胰岛素抵抗模型（IR-L02）,分别加入含有和不含罗格列酮的不同葡萄糖浓度培养液培养,用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法（GOD—POD法）检测培养液残存葡萄糖量,并用RT-PCR方法检测基因Angptl3、LXRαmRNA表达水平的变化。结果表明相同葡萄糖浓度下罗格列酮作用组（IR—R组）的培养液残存葡萄糖量比无罗格列酮作用组（IR组）减少;IR—R组的Angptl3、LXRαmRNA表达水平较IR组显著升高（P〈0．05）。