抑咽侧体素基因在大猿叶虫生殖滞育准备中的功能分析

【目的】本研究旨在明确大猿叶虫Colaphellus bowringi促咽侧体素(allatotropin, AT)和抑咽侧体素(allatostatin, AST)基因的分子特征,分析其在该虫生殖和滞育过程中的表达差异,并探究其在大猿叶虫生殖滞育准备中的功能。【方法】利用前期建立的大猿叶虫转录组数据库,鉴定大猿叶虫CbAT和CbASTs基因序列并克隆其开放阅读框(ORFs),并对其序列进行生物信息学分析;通过qRT-PCR技术检测CbAT和CbASTs在大猿叶虫注定滞育和注定非滞育雌蛹和雌成虫头部的表达模式;对注定滞育大猿叶虫2日龄雌蛹进行CbAST-B, CbAST-C以及CbAST-B+CbAST-C RNAi试验后,检测4日龄雌成虫保幼激素(juvenile hormone, JH)信号基因以及卵黄原蛋白基因的表达量变化。【结果】鉴定并克隆了大猿叶虫的一个促咽侧体素基因CbAT(GenBank登录号: MT977128)及两个抑咽侧体素基因CbAST-B(GenBank登录号: MT977126)和CbAST-C(GenBank登录号: MT977127),其开放阅读框分别长408, 600和303 bp。通过氨基酸序列比对和系统进化分析发现,CbAT, CbAST-B和CbAST-C均与鞘翅目昆虫的同源蛋白聚在一支,在进化上表现出较高保守性。qRT-PCR检测发现,CbAT基因在注定滞育与注定非滞育2日龄雌蛹到4日龄雌成虫头部中始终无表达差异;而CbAST-B和CbAST-C基因分别自雌成虫1和2日龄开始在注定滞育雌成虫头部显著高表达,且在注定滞育和注定非滞育个体中的差异表达状态一直持续到滞育准备期结束。在注定滞育2日龄雌蛹中沉默CbAST-B, CbAST-C以及同时沉默CbAST-B和CbAST-C后,检测4日龄雌成虫头部的干扰效率发现,CbAST-B和CbAST-C的表达均受到显著抑制,干扰效率达70%以上。在去除触角的头部中,JH合成途径基因AACT, FPPS和JHAMT以及脂肪体中JH应答基因Kr-h1和JHE1的表达在dsCbAST-B, dsCbAST-C和dsCbAST-B+dsCbAST-C处理组中均被显著上调,脂肪体中卵黄原蛋白基因Vg1和Vg2的表达也被显著上调。【结论】CbAT基因可能并非造成大猿叶虫产卵前期与滞育准备期保幼激素信号产生差异的主要原因,而在生殖滞育准备期CbAST-B和CbAST-C抑制了JH的合成,进而抑制Vgs的表达以促进滞育的发生。本研究进一步揭示了昆虫生殖滞育准备期保幼激素信号的上游调控机制,有助于进一步理解昆虫对环境的季节性适应策略,为挖掘害虫防治的新靶标提供了新的指导和借鉴。     

新疆千里光Senecio jacobaea在中国的适生区预测

【背景】菊科植物新疆千里光原产于欧亚大陆,在北美和澳洲为入侵植物,目前在中国只有新疆有分布记录。新疆千里光一旦成为入侵植物,将对农业、畜牧业和人类健康都可能产生危害,所以需要评估其在中国的扩散趋势。【方法】搜集新疆千里光在中国和世界其他地区的分布记录,结合当前和未来(2050年)气候条件下19种生物气候变量,应用Maxent模型和Diva Gis软件,定量预测新疆千里光在中国目前和未来的潜在分布区域;并通过接受者操作特征曲线(ROC)分析法对模型进行精度检验。另外,通过Maxent给出新疆千里光在欧洲(原产地)、北美洲和大洋洲(入侵地)以及中国等4个分布区的年均温度和年均降水量的气候阈值。【结果】用中国和全球分布的数据预测的结果有些差异。前者结果表明除了新疆地区,其他省份几乎没有新疆千里光的适生区;而后者显示在中国其他几个省份也有可能分布,且在甘肃四川交界处有较高适生性。前者模型精确度较高,但2个结果都显示新疆千里光在中国目前和未来的分布区大部分还是在新疆地区。中国分布区年均温度和年均降水量的阈值比其他2个地区都低。【结论与意义】新疆千里光在当前和未来气候条件下在中国未来的扩散趋势较弱,基本局限于新疆地区。用中国分布数据预测优于全球分布数据预测结果,新疆千里光不同分布区的气候阈值的差异揭示分布于中国的新疆千里光与其他地区的种群的生态位有所不同,可能是一个新的亚种,希望未来能进行进一步的研究。     

朱红毛斑蛾实时荧光定量PCR内参基因的筛选

筛选朱红毛斑蛾Phauda flammans(Walker)在不同成虫组织、性别及发育阶段处理条件下稳定表达的内参基因,为进一步开展朱红毛斑蛾相关基因的定量研究提供参考.本研究以不同成虫组织(头、胸、腹、足、翅和触角)、不同成虫性别和不同发育阶段(卵、幼虫、蛹和成虫)为实验材料,对10个候选内参基因进行实时荧光定量PCR(qRT-PCR),并使用GeNorm、NormFinder和BestKeeper软件及RefFinder网站对候选内参基因的表达稳定性进行评价和综合分析.结果表明:在朱红毛斑蛾不同成虫组织基因定量研究中,TUB2＞GAPDH＞TUBJ＞AK＞EFlα＞ACTIN3＞TBP＞TUB3＞ACTIN2＞RPL32,建议以TUB2和GAPDH作为内参基因;在不同成虫性别基因定量研究中,TUB1＞EFlα＞ACTIN3＞RPL32＞ACTIN2＞TUB2＞AK＞GAPDH＞TUB3＞TBP,建议以 TUB1 和EFlα作为内参基因;在不同发育阶段基因定量研究中,ACTIN3＞TBP＞TUB1＞EFlα＞TUB3＞ACTIN2＞GAPDH＞RPL32＞TUB2＞AK,建议以ACTIN3和TBP作为内参基因.基于GeNorm分析,最佳内参基因使用数目为2个.     

HSP70和JNK信号转导通路在肝癌组织中的表达及意义

目的探讨HSP70和JNK信号转导通路在肝癌组织中的作用,以及它们之间的关系。方法用SP免疫组化方法检测62例肝癌组织中HSP70、JNK1、JNK2和c-Jun的表达。应用SSPS统计软件进行数据处理。结果(1)HSP70蛋白1级染色16例(25.8%),2级染色25例(40.3%),3级染色21例(33.9%)。JNK1、JNK2和c-Jun蛋白低表达分别为40例(64.5%)、33例(53.2%)和36例(58.1%),高表达分别为22例(35.5%)、29例(46.8%)和26例(41.9%)。(2)HSP70蛋白表达与肝癌分化程度呈正相关(r=0.449,P=0.000),JNK1、JNK2和c-Jun蛋白表达均与肝癌分化程度呈负相关(r=-0.351,P=0.005;r=-0.303,P=0.017;r=-0.302,P=0.017)。(3)HSP70蛋白的表达与JNK1(r=-0.385,P=0.002)、JNK2(r=-0.309,P=0.015)和c-Jun(r=-0.302,P=0.017)蛋白的表达呈负相关。(4)Kaplan-Meier法生存分析发现HSP70和JNK1蛋白的表达与术后无复发生存时间密切相关(P<0.01)。(5)多因素Cox比例风险模型分析,结果HSP70与预后明显相关(P=0.004)。结论HSP70蛋白与肝癌的进展和预后密切相关。JNK信号转导通路与肝癌的分化有关。HSP70可能通过抑制JNK信号传导途径,而阻断由其介导的肝癌细胞的凋亡,提高了肝癌细胞在应激状态下的稳定性。     

心电图计分法定量评价糖尿病小型猪心肌梗死面积

目的探讨简便的Wagner心电图QRS评分结果与糖尿病小型猪急性心肌梗死面积的相关性。方法巴马小型猪12只,随机分为糖尿病组（n=6）和正常组（n=6）。一次性静脉注射STZ（150mg／kg）的方法建立小型猪糖尿病模型,分别在给药前、给药后1周、2周和3周,采集血液,监测血糖,空腹血糖持续增高（FBG≥7．0retool／L）者认为建模成功;其次,定位结扎糖尿病组和正常对照组小型猪冠脉左前降支第1和第2对角支之间部位,并在缺血10rain、30min、1h、48h后查心电图,行QRS心电图计分;然后利用心肌组织Evan’sblue和TTC染色计算梗死心肌体积;分析QRS心电图计分与心肌梗死体积的相关性。结果所有动物急性心肌缺血病理变化明显,48h后都有病理性Q波形成,糖尿病组QRS评分明显较对照组高（6．9±2．4VS．4．1±1．8,P〈0．05）;病理染色结果显示其梗死面积明显比对照组大（29．2±5．1％vs．15．3±3．4％,P〈0．05）,二者相关系数为0．92。结论糖尿病心肌急性缺血更容易导致心肌组织坏死,梗死面积明显比对照组大;心电图检测判断心梗面积与病理情况下心梗面积相关性良好。     

覆膜血管支架对DebakeyⅢ型主动脉夹层患者近、中期疗效分析

目的:探讨覆膜血管支架对DebakeyⅢ型主动脉夹层患者的近、中期疗效及安全性。方法:选取我院收治的DebakeyⅢ型主动脉夹层患者46例,根据治疗方法的不同平均分为两组,对照组予以保守治疗,实验组予以覆膜血管支架置入进行治疗。手术后,观察并比较两组患者的术后一般情况、血液学指标、并发症的发生情况以及中期随访的情况。结果:术后,实验组患者的血常规,肝肾功能未见明显改变(P0.05)。与治疗前相比,血清谷草转氨酶、谷丙转氨酶、肌酐、尿素氮、白细胞计数、血小板计数以及中性粒细胞百分含量水平升高显著(P0.05);血清红细胞计数、血红蛋白含量、红细胞比积水平降低显著(P0.05)。实验组的并发症发生率为13.04%显著低于对照组并发症发生率47.83%(P0.05),实验组中期总有效率为95.65%显著高于对照组中期总有效率为65.22%,(P0.05),差异均有统计学意义。结果:覆膜血管支架治疗DebakeyⅢ型主动脉夹层患者的近、中期疗效显著,安全性较高。