融合Th细胞表位序列Myostatin重组基因疫苗的构建及其对免疫动物肌肉力量的影响

目的:本实验利用基因重组技术,构建融合Th细胞TT830-844表位序列的人重组Myostatin基因疫苗真核表达载体pVAC-TT-Ms,检测该基因疫苗对免疫小鼠前肢抓力的影响,为后续以Myostatin作为靶分子来改善废用性肌肉萎缩等病症的研究提供实验基础。方法:化学耦联方法合成Myostatin C-末端成熟肽(330 bp)基因序列及其N-端融合TT表位序列的DNA片段,重组质粒pVAC-TT-Ms的构建、纯化及瞬时转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)按该类研究中的常规实验操作,并检测重组基因疫苗pVAC-TT-Ms免疫小鼠骨骼肌前肢抓力的变化。结果:酶切和测序结果表明,重组Myostatin基因疫苗表达载体pVAC-TT-Ms构建成功。重组质粒pVAC-TT-Ms OD260/280比值和电泳结果显示,该质粒作为基因疫苗符合免疫动物的质量要求。细胞荧光免疫检测结果表明,瞬时转染的CHO细胞中目的蛋白明显表达。动物免疫实验初步证明,重组Myostatin基因疫苗可显著提高免疫小鼠的前肢抓力,与正常对照组比较,免疫小鼠前肢抓力平均增加了29.88%。结论:本实验成功构建了在真核细胞中能有效表达融合TT表位序列人重组Myostatin基因疫苗表达载体,初步证明了重组Myostatin基因疫苗可显著增加免疫小鼠前肢抓力。     

一种菊科植物抽提物对小鼠血液生化成分的影响

探讨一种菊科植物抽提物对小鼠血液生化成分的影响。利用半自动生化分析仪测定血液生化成分,结果表明该抽提物可降低血清白蛋白和总蛋白含量;降低乳酸脱氢酶、肌酸激酶活性和丙氧酸氧基转移酶活性;对血清中尿素、尿酸、肌酐都有明显降低作用;可减少血清二价金属离子Ca^2 、Mg^2 含量,增加Cl^-含量;对碱性磷酸酶、天冬氨酸氧基转移酶、血清无机磷影响不明显。     

驱虫斑鸠菊注射液治疗白癜风的作用机制研究

探讨驱虫斑鸠菊(VW)注射液治疗白癜风的作用机制。进行以下实验探讨VW对小鼠免疫功能的影响:淋巴细胞转化试验测定小鼠脾T、B细胞增殖活性;脾细胞介导羊红细胞定量溶血分光光度法测定B细胞生成抗体活性,流式细胞法测定B细胞上CD19表达活性;迟发型超敏反应(DTH)试验测定T细胞活性、眼3H演-TdR掺入法测定T细胞分泌IL-2活性等。用酶学方法研究VW对小鼠体内酪氨酸酶的作用。用半定量逆转录聚合酶链反应技术检测酪氨酸酶基因表达活性。结果表明,VW可以明显抑制小鼠体内T、B细胞的增殖反应(P<0.01);对绵羊红细胞(SRBC)诱导的正常小鼠脾脏抗体形成细胞活性、CD19B细胞亚类表达、小鼠DTH反应和T细胞分泌IL-2活性也具有明显的抑制作用,这些抑制作用与药物浓度有一定的剂量效应关系。VW还可以提高小鼠血清酪氨酸酶活性,增强酪氨酸酶基因的表达。以上结果说明,VW可抑制小鼠免疫功能,可以从转录水平增强酪氨酸酶活性,进而促进黑素合成。     

驱虫斑鸠菊对小鼠免疫分子的影响

探讨驱虫斑鸠菊对小鼠免疫功能的影响,揭示其免疫作用机理。利用[^3H]-TdR参入法测定驱虫斑鸠菊对小鼠体内免疫功能的影响,运用酶联免疫吸附实验测定驱虫斑鸠菊对小鼠B淋巴细胞分泌抗体功能的影响;采用流式细胞测定方法测定CD19B细胞亚类表达水平;采用[^3H]-TdR参入法利用CTLL－2细胞株测定T淋巴细胞分泌IL－2活性。结果驱虫斑鸠菊的低、中、高三个剂量对体内T、B淋巴细胞的增殖活性、血清总抗体和抗原特异性抗体含量、CD19B细胞亚类表达均有明显的抑制作用,对T淋巴细胞分泌IL－2活性也具有明显抑制作用。说明驱虫斑鸠菊对机体体液免疫和细胞免疫功能都具有明显抑制作用。