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1.
目的:探讨apelin在肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导的肝细胞凋亡中的作用及可能机制。方法:PCR检测HepG2细胞和原代小鼠肝细胞中APJ受体的表达;采用Hoechst 33342染色检测TNF-α诱导的HepG2细胞凋亡;用活性氧(ROS)检测试剂盒结合流式细胞术测定细胞内ROS水平;通过Western blot检测信号分子JNK的磷酸化水平;比较给予apelin处理对上述指标的影响。结果:HepG2细胞和原代小鼠肝细胞均表达APJ受体;apelin可抑制TNF-α导致的细胞内ROS生成增多和JNK磷酸化水平升高并减少TNF-α诱导的HepG2细胞凋亡。结论:Apelin可能通过拮抗TNF-α诱导的细胞内ROS水平升高,使JNK信号失活,从而抑制HepG2细胞凋亡。  相似文献   
2.
为研究外源性Rb和P53基因导入血管平滑肌细胞后对c-fos和c-jun基因表达的调控作用,将Rb基因或P53基因重组腺病毒载体转染人脐动脉血管平滑肌细胞,应用RT-PCR和免疫组化法检测c-fos、c-jun的mRNA及蛋白质表达水平,以DNA琼脂糖凝胶电泳和β-半乳糖苷酶染色分别观察细胞凋亡和细胞衰老.结果显示,野生型P53基因导入可诱导平滑肌细胞凋亡,c-fos和c-jun mRNA及蛋白质表达水平显著增高.外源性Rb基因导入能促进细胞衰老,下调c-fos基因表达,但对c-jun基因表达没有明显影响.  相似文献   
3.
氧化型低密度脂蛋白诱导血管平滑肌细胞凋亡的机理研究   总被引:2,自引:0,他引:2  
近年来的研究发现,氧化型低密度脂蛋白(oxi-dizedlowdensitylipoprotein,OX-LDL)是导致动脉粥样硬化发生的重要因素[1].OX-LDL具有双重效应,既有强烈的促细胞生长效应,又可诱导细胞发生凋亡.这主要根据过氧化物量的变化而定,少量的OX-LDL可促进增殖,而长时间大量的OX-LDL作用于平滑肌细胞则可导致其凋亡[2].OX-LDL诱导的平滑肌细胞凋亡有助于氧化脂质的生成,导致动脉粥样硬化形成.在动脉粥样硬化晚期,由于斑块中的平滑肌细胞凋亡,细胞外基质分泌减少,使斑块极不稳定而易于破裂,诱发急性临床事件如心肌梗塞、猝死等的发生[3].OX-…  相似文献   
4.
5.
通常,逆转录PCR(RT-PCR)需要高质量的mRNA,操作过程复杂,效率低且易受到RNase的破坏,为了简化操作,提高效率,用10%甲醛盐溶液固定杂交瘤细胞,以Np-40渗透化处理细胞后做RT-PCR,获得了大约350bp的特异性免疫球蛋白重链可变区基因片段,与用同一对引物得到的常规RT-PCR扩增产物一致.这项技术可用于获得特定结构基因片段,连结并扩增嵌合蛋白基因及构建多克隆免疫球蛋白文库等.  相似文献   
6.
外源性Rb基因对平滑肌细胞p21基因表达的影响   总被引:1,自引:0,他引:1  
应用RT-PCR和免疫组化法测定p21mRNA及蛋白表达水平;蛋白质印迹法观察Rb蛋白的磷酸化;流式细胞术分析细胞周期,并以细胞形态观察和β-半乳糖苷酸染色检测细胞衰老。结果发现,外源性Rb基因导入人脐动脉血管平滑肌细胞后,诱导p21基因表达,使Rb主要怍于非磷酸化状态,引起约70%的细胞生长停滞在G0/G1期,平滑肌细胞发生衰老。结果提示,Rb基因通过诱导p21基因表达以调节细胞周期和促进细胞衰  相似文献   
7.
目的分析高浓度血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激人脐静脉内皮细胞(HUVECs)时细胞内活性氧(ROS)、NOX4mRNA水平和细胞凋亡的变化。方法倒置显微镜下观察人脐静脉内皮细胞形态;免疫组化法检测人脐静脉内皮细胞Ⅷ因子相关抗原的表达;RT—PCR检测HUVECs中NOX4的表达;流式细胞仪检测各组细胞内ROS生成量和细胞凋亡率,Hoechst染色分析细胞凋亡。结果高AngⅡ刺激HUVECs时,NOX4mRNA表达上调,细胞内ROS生成增加,细胞凋亡增加。结论高AngⅡ上调HUVCEs内NOX4mR—NA表达并促进细胞内ROS生成和细胞凋亡。  相似文献   
8.
为研究外源性Rb和P53基因导入血管平滑肌细胞后对c-fos和c-jun基因表达的调控作用,将Rb基因或P53基因重组腺病毒载体转染人脐动脉血管平滑肌细胞,应用RT-PCR和免疫组化法检测c-fos、c-jun的mRNA及蛋白质表达水平,以DNA琼脂糖凝胶电泳和β-半乳糖苷酶染色分别观察细胞凋亡和细胞衰老.结果显示,野生型P53基因导入可诱导平滑肌细胞凋亡,c-fos和c-jun mRNA及蛋白质表达水平显著增高.外源性Rb基因导入能促进细胞衰老,下调c-fos基因表达,但对c-jun基因表达没有明显影响.  相似文献   
9.
人血清载脂蛋白AⅡ的分离纯化及其抗血清的制备   总被引:3,自引:1,他引:2  
本文应用超迷离心,盐酸胍处理、DEAE-Sepharose CL-6B离子交换柱层析分离纯化了人血清载脂蛋白AⅡ。经等电聚焦电泳、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫电泳等鉴定,其纯度达到电泳纯和免疫纯。以此载脂蛋白AⅡ纯品免疫家兔产生的抗血清,效价较高,特异性强,与载脂蛋白AⅠ、B、CⅠ、CⅡ、CⅢ、E和白蛋白没有交叉反应。  相似文献   
10.
细胞内RT-PCR扩增免疫球蛋白重链可变区基因   总被引:1,自引:0,他引:1  
通常,逆转录PCR(RT-PCR)需要高质量的mRNA,操作过程复杂,效率低且易受到RNase的破坏,为了简化操作,提高效率,用10%甲醛盐溶液固定杂交瘤细胞,以NP-40渗透化处理细胞后做RT-PCR,获得了大约350bp的特异性免疫球蛋白重链可变区基因片段,与用同一对引物得到的常规RT-PCR扩增产物一致。这项技术可用于获得特定结构基因片段,连结并扩增嵌合蛋白基因及构建多克隆免疫球蛋白文库等。  相似文献   
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