植物糖基转移酶的结构与机理及糖基化工程的研究进展

糖基转移酶(glycosyltransferases, GTs)广泛存在于各种有机体中,通过糖基化反应参与维持细胞代谢稳态.糖基转移酶能够识别多种受体,催化活化的糖基从供体分子转移到受体分子上,改变受体分子的化学稳定性、水溶性以及受体分子的转运能力和生物活性等,进而有助于提高其生物利用度和生物活性等.许多被糖基化修饰的化合物成为药物分子的重要来源.然而,天然产物中的糖苷类化合物存在含量低、提取难度大和提取产物纯度差等问题.在利用化学合成方法合成糖苷类化合物的过程中,无法实现特定位点的糖基化修饰,同时原料试剂和副产物易对环境造成污染.因此,近年来对糖基转移酶的研究日渐增多.本文简要综述了植物糖基转移酶的结构和生物技术应用的研究进展,为基于植物糖基转移酶结构的糖基化工程和生物活性糖苷化合物的生产提供有用信息.     

脱Ca~（2＋）与结合Ca~（2＋）蝮蛇毒酸性磷脂酶A_2晶体的培养和X射线衍射数据

钙离子是磷脂酶Ａ２催化必须的铺因子,以蝮蛇毒酸性磷脂酶Ａ２为材料,采用在晶体培养液中加入ＥＤＴＡ或ＥＧＴＡ螯合剂络合法除去ＰＬＡ２中可能有的Ｃａ＾２＋离子和加入ＣａＣｌ２以确保ＰＬＡ２能克分结合上钙离子的方法培养充分结合Ｃａ＾２＋和脱Ｃａ＾２＋的ＰＬＡ２晶体。加了螯合剂后长出的晶体为长棒状六方柱,加Ｃａ＾２＋离子后长出的晶体则为短粗的六方柱。经Ｘ射线鉴定两种晶体为同晶型,空间群为Ｐ６１,晶胞参数很     

脱Ca~（2＋）与结合Ca~（2＋）蝮蛇毒酸性磷脂酶A_2晶体的培养和X射线衍射数据

钙离子是磷脂酶Ａ２催化必须的辅因子,以蝮蛇毒酸性磷脂酶Ａ２为材料,采用在晶体培养液中加入ＥＤＴＡ或ＥＧＴＡ螯合剂络合法除去ＰＬＡ２中可能有的Ｃａ２＋离子和加入ＣａＣｌ２以确保ＰＬＡ２能克分结合上钙离子的方法培养充分结合Ｃａ２＋和脱Ｃａ２＋的ＰＬＡ２晶体。加了螯合剂后长出的晶体为长棒状六方柱,加Ｃａ２＋离子后长出的晶体则为短粗的六方柱。经Ｘ射线鉴定两种晶体为同晶型,空间群为Ｐ６１,晶胞参数很接近。现已收集到这两种晶体的高分辨率衍射数据。进一步的结构分析和结构比较将有助于详细和清楚地分析Ｃａ２＋离子对分子构象的影响。     

一种精子表面GPI锚定蛋白初步鉴定方法的建立

精子表面糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定蛋白(GPI-Aps)在精子不同阶段都发挥着关键作用.本研究介绍了嗜水气单胞菌毒素(aerolysin)作为生物探针来鉴定精子表面的GPI锚定蛋白.实验依次进行了嗜水气单胞菌培养、毒素提取纯化、多克隆抗体制备以及三明治蛋白印迹验证实验.凝胶蛋白分离实验显示,硫酸铵沉淀加Sephadex G-100层析柱纯化得到了分子质量为45 kD高纯度细菌毒素;蛋白印迹实验验证了制备的多克隆抗体的特异性;三明治蛋白印迹结果显示,嗜水气单胞菌毒素能识别出12条精子脂筏提取蛋白条带,其分子质量主要分布在15~130 kD之间;Alex488标记的免疫荧光实验显示,嗜水气单胞菌毒素识别的GPI锚定蛋白主要分布在精子头部和尾部.研究结果提示,嗜水气单胞菌毒素能够有效地识别精子表面的GPI锚定蛋白.     

人工饲养条件下白暨豚的行为节律

1985年4月至1986年3月观察了饲养6年的雄性白暨豚“淇淇”的十种宏观行为,即顺时针方向游、逆时针方向游、仰游、侧游、转游、直立、玩、性行为、捕食和休息。行为型式变换次数的统计表明,白暨豚存在明显的食前节律和昼夜节律。另外,顺时针方向游发生在夜间为多,逆时针方向游白天发生的多。以上2种行为所占的总时间大致相等。典型的休息行为均发生在夜间,全年在1月和5—8月出现2个高峰期。4—5月和8—9月出现2个性行为高峰。转游在早晨和白天摄食后共出现3个高峰期,而且与饲养池条件有关。呼吸行为的昼夜节律不明显。     

过氧化物酶6在大鼠附睾中的表达及分布

通过双向电泳结合质谱技术分离鉴定正常成年大鼠附睾头段与尾段管腔液中的蛋白组成,从附睾头段及尾段管腔液的22个差异蛋白点中鉴定出12个蛋白质.其中11个蛋白质在不同种属哺乳动物的附睾组织中已有鉴定报道,而过氧化物酶6(peroxiredoxin 6,Prdx6)为新发现的存在于附睾头段及尾段管腔液中的体液蛋白.采用RT-PCR、Western印迹及免疫组化技术,对该蛋白在大鼠附睾中的表达及分布进行了分析.实验表明,Prdx6与精子的成熟、贮存及保护有一定关系,其具体机制值得进一步深入研究.     

江浙蝮蛇蛇毒中性磷脂酶A2的结构模拟研究

从我国江浙蝮蛇蛇毒纯化出的中性磷脂酶Ａ２（ＡＴＸ）不仅具有酶催化活性,还具有突触前神经毒性。用图象模拟和能量极小化及分子动力学方法,根据美国西部菱斑响尾蛇（Ｃ．ａｔｒｏｘ）蛇毒ＰＬＡ２的晶体结构构建了ＡＴＸ二体和单体模型,它们的基本折叠与Ｃ．ａｔｒｏｘＰＬＡ２是很相似的。能量计算表明,二体的总势能比单体相应能量的两倍低２６３．６ｋｃａｌ／ｍｏｌ;ＡＴＸ二体模型中两亚基间的作用与Ｃ．ａｔｒｏｘＰＬＡ     

建立长江天鹅洲白鱀豚保护区的可行性研究

白豚（Ｌｉｐｏｔｅｓｖｅｘｉｌｌｉｆｅｒ）为我国特有珍稀动物,其种群数量仅２００头左右,十分濒危。为了拯救这一物种,针对白豚和长江的特点,作者选择了长江天鹅洲故道作为拟建的白豚半自然保护区,进行可行性研究。经过四年的工作,从水质理化状况、水生生物状况、鱼类资源、水体生产力以及故道周围环境等多角度,分析了天鹅洲故道的环境特征,摸清了该故道的本底,并将故道环境与长江环境进行了比较。在上述工作的基础上,又引５头江豚（Ｎｅｏｐｈｏ－ｃａｅｎａｐｈｏｃａｅｎｏｉｄｅｓ）入天鹅洲故道进行了二年的试养,并获成功。本底调查和试养江豚的结果表明,长江天鹅洲故道是建立白豚半自然保护区的理想场所。这个保护区的建立是保护白豚的一项有效、可行、必要的保护措施。     

长江江豚对八里江江段的利用及其栖息地现状的初步评价

通过定点和流动观察的方法，作者使用行为指数和栖息地利用指数定量分析了长江江豚（Neophocaena phocaenoides asiaeorientalis))于1996—2000年间对八里江江段的利用和选择状况。结果表明：江豚在八里江江段的行为指数大小顺序为摄食＞抚幼＞玩耍＞休息，摄食和抚幼是江豚在八里江江段的优势行为；江豚栖息于离岸距离100—300m的近岸带占81．8％，栖息于水深小于9m的水区占73．3％；江豚分布密度随水深增加而逐步递减(典型的指数分布)；江豚活动水区的流速范围是0．3-1．2m／s，透明度范围是0．2—0．8m，江豚在八里江江段对水体流速和透明度没有明显的选择性；栖息地利用指数高的断面一般是饵料鱼类聚集、2—4股水流的交汇处。八里江江段的众多异质小生境为江豚提供了充足饵料和繁育抚幼的适宜场所；同时八里江江段为江豚提供了庇护、休息和玩耍的足够活动空间。八里江江段成为长江干流适宜江豚活动的最佳栖息地之一，也是常年江豚在此大规模集聚的理想江段之一[动物学报49(2)：163—170，2003]。     

池养雄性白鱀豚性自慰行为与血清睾酮浓度之间的关系

自 1996年 3月至 1998年 12月 ,作者采用放射免疫分析法每月 1次测定雄性白豚 (Lipotesvexillifer)“淇淇”血清睾酮浓度。春季每天 1次 ,其它季节每三天 1次 ,每次 1h ,用目标动物取样法观察“淇淇”的行为。结果发现 ,性自慰 (腹面贴池壁、伸出阴茎 )行为的发生频率和血清睾酮激素水平都有周期性变化 ,春季为高峰期 ,秋季有 1个小峰 ,性自慰行为与血清睾酮激素浓度两者的周期较为一致。从性自慰行为和血清睾酮激素水平季节变化 ,推测出“淇淇”性腺活动的周期性变化 ,活动期为 2～ 10月 ,血清睾酮浓度为 2 4 8～ 9 6 6ng/ml;春季高峰在 4月前后 ,血清睾酮浓度为 3 4 4～ 9 6 6ng/ml;秋季小峰在 10月 ,血清睾酮浓度为 3 33～4 2 5ng/ml;11月至次年 1月为性腺活动相对静止期 ,血清睾酮浓度为 1 2 4～ 2 85ng/ml。白豚是一种季节性繁殖动物 ,繁殖高峰期在 4月前后。