FUT4-siRNA增强5-aza-dC对鳞癌细胞增殖和迁移的抑制

岩藻糖基转移酶IV（fucosyltransferase IV,FUT4）是催化蛋白质岩藻糖基化的关键酶．已经证明,FUT4-siRNA能够抑制鳞癌细胞的增殖．5-氮杂-2-脱氧胞苷（5-aza-dC）是临床常用化疗药物,但5-aza-dC是否对鳞癌有治疗作用,以及与FUT4-siRNA联合使用能否加强对鳞癌细胞增殖和迁移的抑制尚不清楚．本研究以鳞癌细胞系A431和SCC12为对象,探讨5-aza-dC及其与FUT4-siRNA联合使用对细胞增殖和迁移的影响．MTT结合流式细胞周期分析显示,5-aza-dC处理A431和SCC12细胞4 d后,细胞增殖被明显抑制,抑制率分别为18%和20% (P<0.05);与对照组比较,加药处理组G1期细胞数量减少,S期细胞数量明显增加．Western印迹结果揭示,A431细胞FUT4表达水平较SCC12细胞高．经5-aza-dC处理后SCC12细胞FUT4表达有所增加,但仍低于A431细胞中的表达．FUT4-siRNA转染结合台盼蓝活细胞记数证明,FUT4-siRNA明显降低细胞FUT4表达,5-aza-dC处理同时转染FUT4-siRNA的A431和SCC12细胞增殖进一步被抑制,抑制率分别为54%和60% (P<0.05)．细胞划痕法显示,5-aza-dC与FUT4-siRNA联合使用,对细胞迁移能力的抑制作用比5-aza-dC单独使用增强．上述结果提示,5-aza-dC通过诱导细胞S期阻滞抑制鳞癌细胞增殖,FUT4-siRNA与5-aza+dC联合使用可加强对细胞增殖和迁移的抑制．     

HaCaT细胞中FUT4表达与其启动子区甲基化的相关性分析

岩藻糖基转移酶Ⅳ(Fucosyltransferase Ⅳ,FUT4)在正常细胞中表达量很低,但其低表达的调控机制以及是否受其启动子甲基化调控并不十分清楚。文章采用Western blot、免疫荧光和Real-time PCR的方法检测正常人永生化表皮细胞系HaCaT细胞FUT4的表达,观察DNA甲基转移酶抑制剂5-aza-dC处理对FUT4表达的影响。应用甲基化特异性PCR方法分析HaCaT细胞中FUT4启动子甲基化状态。结果表明,HaCaT细胞中FUT4的表达水平明显低于人表皮鳞癌细胞A431和SCC12。5 μmol/L的5-aza-dC处理72 h的HaCaT细胞,其FUT4 mRNA水平明显升高,并且与未经5-aza-dC处理的对照组相比,U引物扩增检测到的产物量增加,M 引物扩增检测到的产物量明显减少。这些结果表明,HaCaT细胞中FUT4的低表达可能与其启动子区CpG岛甲基化有关。     

小鼠单个胚泡LeY与MMPs分泌水平的分析

小鼠单个胚泡LeY与MMPs分泌水平的分析@孔英$大连医科大学糖生物学研究所生物化学教研室! 中国 大连116027 @燕秋$大连医科大学糖生物学研究所生物化学教研室! 中国 大连116027 @朱正美$大连医科大学糖生物学研究所生物化学教研室! 中国 大连116027     

白血病抑制因子对胚泡金属蛋白酶表达的影响

为了探讨白血病抑制因子 (LIF) 对胚泡着床作用的机理,胚泡经与LIF及其特异性抗体培养后,通过RT-PCR及免疫印迹技术,分析了LIF与着床前小鼠胚泡的基质金属蛋白酶9(MMP9)表达和分泌之间的关系.结果显示：LIF可明显诱导胚泡MMP9的分泌和基因表达; 经LIF特异性抗体封闭后,胚泡MMP9的分泌及基因表达下降,且下降趋势随着LIF被封闭时间延长而减弱,对MMPs组织抑制因子1(TIMP1)的影响则不明显.说明LIF可能通过诱导MMP9的分泌及基因表达来影响胚泡对子宫内膜细胞外基质的水解,促进着床.     

免疫球蛋白糖链结构异常和自身免疫性疾病

免疫球蛋白在人体体液免疫中发挥巨大作用,而其均为糖蛋白.免疫球蛋白中与蛋白质相连的寡糖链结构及组成对其功能有很大影响,当寡糖链糖基化异常时,可导致一些自身免疫性疾病.从IgA肾病和类风湿性关节炎的结构基础、分子机制、酶学基础、临床意义等方面对这两类自身免疫性疾病的发病机制与糖基化异常之间的密切相关性予以详细论述,为这两类疾病在临床上建立一种特异、灵敏的血清学检测方法提供了理论基础,开辟了一条新途径.     

甾体激素对子宫内膜Lewis合成关键酶基因的影响

甾体激素对子宫内膜Lewis合成关键酶基因的影响@葛常辉$大连医科大学糖生物学研究所生物化学教研室! 中国 大连 116027 @王晗$大连医科大学糖生物学研究所生物化学教研室! 中国 大连 116027 @孔英$大连医科大学糖生物学研究所生物化学教研室! 中国 大连 116027 @燕秋$大连医科大学糖生物学研究所生物化学教研室! 中国 大连 116027 @朱正美$大连医科大学糖生物学研究所生物化学教研室! 中国 大连 116027     

免疫球蛋白的糖链与自身免疫疾病

随着糖结构分析技术的不断发展和完善,免疫球蛋白（Ｉｇ）的寡糖链在维系蛋白空间构象和生物功能中的作用,及其糖链异常所引起的病理性改变也进一步明确,这也是当今糖生物学研究的重点之一。本文对Ｉｇ的糖链及糖链异常与自身免疫疾病如类风湿关节炎（ＲＡ）、ＩｇＡ型...     

人FUT4基因近端启动子结构的初步分析

LeY是一种双岩藻糖化寡糖,在大多数上皮来源的肿瘤细胞（包括乳腺癌、卵巢癌等）中高表达.岩藻糖基转移酶Ⅳ（fucosyltransferase Ⅳ, FUT4）是合成LeY的关键酶. 前期工作发现,FUT4通过增加LeY糖的合成来促进细胞的增殖. 但有关FUT4的转录调控机制尚不清楚. 本文通过对人FUT4基因近端启动子进行生物信息学分析,并构建不同长度启动子序列荧光虫荧光素酶报告基因表达载体,分析其转录活性. 使用First EF程序分析并获得FUT4近端启动子序列,采用PCR 法扩增FUT4基因近端不同长度的启动子序列,定向克隆,获得不同长度的启动子重组质粒. 重组质粒经双酶切及测序鉴定正确. 荧光素酶活性分析不同长度的FUT4 基因启动子片段的转录活性.结果显示,pGL6-FUT4-1.2 kb在MCF-7和MDA- MB-231细胞中转录活性明显升高（P<0.05）.说明FUT4基因启动子区域定位于转 录起始位点上游的-800～-1 600 bp的区域内.     

鳞癌细胞增殖能力与岩藻糖基转移酶表达水平及糖蛋白岩藻糖基化修饰有关

岩藻糖基转移酶（fucosyltransferases,FUTs）是一类催化糖蛋白和糖脂发生岩藻糖基化（修饰）酶,主要包括FUT1~FUT9。已有研究证明,很多癌组织中都有不同FUT基因表达升高的现象。本研究证明,表皮鳞癌细胞的增殖能力与几种FUT基因表达水平有关。本文比较研究了人表皮鳞癌A431和SCC12细胞的增殖速度和几种FUT的表达状况,以揭示鳞癌细胞增殖能力与几种FUT基因表达水平的关系。细胞倍增时间结合MTT法揭示,鳞癌A431细胞的倍增时间约为26 h,而鳞癌SCC12细胞的倍增时间约为33 h（P < 0.05）,提示A431细胞增殖速度比SCC12细胞明显加快。与增殖速度一致的是,Western 印迹显示,A431细胞中与DNA合成相关的增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）蛋白表达水平比SCC12细胞高。实时定量PCR（qPCR）检测FUT1-9基因 mRNA转录本,揭示A431细胞中几种FUT基因的mRNA水平均显著高于SCC12细胞。凝集素免疫印迹法和Western 印迹法进一步证明,A431细胞中总蛋白的岩藻糖基化水平比SCC12细胞中的明显升高。敲低FUT4基因表达后,A431细胞中LeY寡糖的表达水平下调,细胞增殖被明显抑制。这些结果证明,较强的表皮鳞癌细胞增殖能力可能与几种FUT基因的高表达,以及糖蛋白的岩藻糖基化（修饰）相关。岩藻糖基转移酶表达水平与临床表皮鳞癌的恶性增生的相关性有待进一步证明。     

细胞表面LeY寡糖在胚胎着床中的功能性作用

细胞表面LeY寡糖在胚胎着床中的功能性作用@朱正美$大连医科大学生物化学教研室!　中国 大连 116027 @葛常辉$大连医科大学生物化学教研室!　中国 大连 116027 @孔英$大连医科大学生物化学教研室!　中国 大连 116027 @王晓奇$大连医科大学生物化学教研室!　中国 大连 116027 @王晗$大连医科大学生物化学教研室!　中国 大连 116027 @燕秋$大连医科大学生物化学教研室!　中国 大连 116027 @段恩奎$中国科学院动物研究所计划生育生殖生物学国家重点实验室!　中国 北京100080 @曾国庆$中国科学院动物研究所计划生育生殖生…