草鱼(Ctenopharyngodon idellus)线粒体DNA控制区及其两侧tRNA基因的克隆与结构分析

动物线粒体ＤＮＡ控制区是线粒体基因组复制与基因表达的最主要的调控区．采用杂交和测序的方法对草鱼线粒体ＤＮＡ控制区进行定位、克隆并测定了控制区及其旁侧的ｔＲＮＡＰｈｅ、ｒＲＮＡＰｒｏ和ｒＲＮＡＴｈｒ三个基因的序列,与多种脊椎动物的相应序列进行了比较,并进行了结构分析．草鱼线粒体控制区全长９２７ｂｐ,含有与酵母和爪蟾线粒体启动子相似的序列,其ＣＳＢⅠ、ＣＳＢⅡ和ＣＳＢⅢ序列与其他几种动物的ＣＳＢ比较相当保守,ＴＡＳ与其回文基序可形成稳定的茎环结构,成为Ｈ－链复制的终止信号．草鱼线粒体ｔＲＮＡＰｈｅ、ｔＲＮＡＰｒｏ和ｔＲＮＡＴｈｒ可折叠成三叶草形二级结构,其基因具有许多不同于细胞质ｔＲＮＡ基因的结构特点,可能反映了线粒体ｔＲＮＡ与线粒体核糖体具有不寻常的作用方式     

In vitro Oocyte Maturation in the Zebrafish Brachydanio rerio and Fertilization and Development of the Mature Egg

Maturation process of zebrafish oocyte was investigated using in vitro incubation.In medium EM-199 containing 0.5 μg/ml of 17α-hydroxyprogesterone incubated under 80％ O_2 and at 25°C,germinal vesicles(GV)of oocytes in stage Ⅳ migrated from midway between the center and theperiphery ofoocytes to the periphery in 40 minutes and the oocytes went into stage V.Half an hourlater,the oocytes underwent germinel vesicle breakdown(GVBD)with a breakdown rate of 59％.Two more hours were needed for such oocytes to complete their final maturation.The mature eggscould not come off from the follicle layer surrounding them by themselves(ovulation).By removingthe follicle and adding active sperms for insemination,we could make the mature eggs fertilized.Thechorion was elevated and blastoderm formed on the animal pole.The cleavage and development ofthese fertilized eggs followed the same course as the naturally matured and fertilized eggs.Usingblastula formation as a marker of successful fertilization of the in vitro matured egg,the fertilizationrate was 78％.This is the first report on the successful in vitro incubation of mature oocytes inzebrafish.The establishment of this in vitro oocyte maturation technology has laid the foundationfor further investigation of the transfer of foreign genes in the germinal vesicles of oocytes.     

中国十一个少数民族的皮纹研究 Ⅱ.掌纹

研究了中国11个少数民族(其中回族两个群体)5013人的掌纹样本,计算出了a—b脊线数、atd角、掌褶纹类型、掌纹真实花样、掌纹主线各个项目的基本参数,比较了不同民族、性别、左右侧以及人种间的差异。各民族的掌纹各具特点而又显示出蒙古人种的一般特征。     

中国十三个民族的初潮年龄

用现状法和回忆法调查了15个民族的初潮年龄。汉族平均初潮年龄(MMA),以北京(12.77±0.14岁)与广州(12.81±0.16岁)为最小,四川布拖县城镇汉族(14.48±1.28岁,回忆法)居中,农村样本最大。农村居民中,北京郊区的MMA最小(14.91±0.71岁),江西吉水县次之(15.29±0.26岁),而偏僻山区湖北郧县最大(16.04±0.52岁)。少数民族中用现状法得MMA最早的是黎族(13.62±0.16岁),其余的人群是:朝鲜族15.82±0.14岁,藏族14.30±0.32岁,达斡尔族14.64±0.29岁,海南崖县回族15.08±0.24岁,临夏回族15.19±0.33岁,羌族15.57±0.29岁,东乡族16.39±0.14岁和保安族17.23±0.46岁。又用回忆法得出了5个民族的MMA:蒙族14.97±1.60岁,苗族15.50±1.54岁,彝族16.80±1.58岁,以及北京市的满族14.34±1.69岁和回族14.38±1.63岁。     

中国十一个少数民族的皮纹研究 Ⅰ.指纹

研究了中国11个少数民族(12个群体)5013人的指纹花样和指纹脊线数,计算出各项基本参数,比较分析了不同性别、左右侧、不同民族和人种间的差异以及指纹花样和指纹脊线数在不同手指上的分布特点。分析表明,这些民族的指纹具有各自的特点又具有蒙古人种的一般特性。     

淡水瓦氏雅罗鱼基因文库的构建和抗冻蛋白基因同源序列的筛选

极地海域中的鱼类非常耐寒。它们的血液里常含有两种能降低其体内冰点的蛋白质：抗冻糖蛋白（ＡＦＧＰ）和不含糖的抗冻蛋白或抗冻多肽（ＡＦＰ）。这些蛋白的编码基因已经被克隆,并将黄盖鲽ＡＦＰ导入虹鳟鱼和大西洋鲑鱼,而改变了它们的抗冻性能。为开展中国的抗冻转基因鱼研究,本项目对中国北方的耐寒淡水鱼的抗冻基因进行了分离研究。所用实验材料鱼为中国内蒙古北部生活的瓦氏雅罗鱼（Ｌｅｕｃｉｓｃｕｓｗａｌｅｃｋｉｉ）,属鲤形目（Ｌｙｐｃｉｎｉｆｏｒｍｅｓ）,鲤科（Ｌｙｐｒｉｎｉｄａｅ）,雅罗鱼亚科（Ｌｅｕｃｉｓｉｎａｅ）。基本按标准方法构建瓦氏雅罗鱼的基因文库,只在包装反应至３０分钟时,再加一份ＢＨＢ２６９０制备物,并延长３０分钟反应时间。所得文库的成斑率大于１×１０５ｐｆｕ。已知ＡＦＰ基因常常多至４０个拷贝,故已够用。采用通用的原位分子杂交和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ分析进行瓦氏雅罗鱼ＡＦＰ基因同源序列的分离及其亚克隆分析。以北美黄盖鲽ＡＦＰ基因片段为探针,从瓦氏雅罗鱼ＤＮＡ文库中筛选了三个阳性克隆。图一所示为其中一个的双份膜及其复筛结果。图二为这个阳性克隆ＤＮＡ经过三种限制酶切后,同时与北美黄盖鲽ＡＦＰ基因片段和该基因０．４ＫｂｃＤＮ     

中国不同民族中苯硫脲味盲基因频率的研究

用阈值法对中国15个不同民族的苯硫脲味盲基因频率进行了研究,共调查了7495人。结果表明,味盲基因(t)的频率以撒拉族为最高(0.3989),其余依次为鄂温克族(0.3886),甘肃回族(0.3586),藏族(0.3521),朝鲜族(0.3445),蒙古族(0.3279),广东回族(0.3259),苗族(0.3216),东乡族(0.3206),达斡尔族(0.3193),羌族(0.3129),汉族(0.3113),鄂伦春族(0.3030),保安族(0.2953),彝族(0.2635),而以黎族的频率为最低(0.2150)。各民族间味盲百分率差异是极显著的(p<0.01),各民族总计中尝味平均阈值在男、女之间也有极显著差异(p<0.001),而男、女受试者中的味盲率则没有显著差异。     

斑马鱼卵母细胞的体外成熟及成熟卵的受精发育

采用体外培养的方法,研究斑马鱼卵母细胞的成熟过程。Ⅳ时相初级卵母细胞在o．5μg／m1 17a－羟基孕酮的EM－199培养液中,80％氧气,25℃的体外培养条件下,在40min内,胚泡(GV)逐渐由卵母细胞中央至动物极边缘l／2处移到动物极边缘,进八V时相卵母细胞。30min后胚泡破裂(GVBD),胚泡破裂率为59％。此种卵母细胞继续培养2h才完全成熟。成熟卵不能从滤泡膜中自然排出。冷开水中剥离其外边的滤泡膜后加入具有受精能力的精子,即能使成熟卵受精,受精膜举起,胚盘在动物极形成。其后受精卵的分裂、发育等与自然成熟受精卵相同。以发育至囊胚为受精标准,这种体外成熟卵受精率为78％。这是斑马鱼卵母细胞体外培养成熟的首例报道。鱼类卵母细胞体外成熟技术的建立,为外源基因卵母细胞胚泡内转移奠定了基础。