牙齿发育的分子机制

在牙齿发育过程中,已知BMPs和FGFs信号通路在上皮和间充质之间的序的相互作用中起着重要的作用。BMP4是启动牙形态发生的一个关键的信号分子。转录因子Msx基因主要起信号介导和传递的作用。已发现鸟类仍具有牙齿发育的潜能。鸟类牙齿发育停止在牙原基阶段的可能原因是Bmp4不在预定的牙胚组织中表达,导致发育信号的传递受阻。     

研究报告: 实验性自身免疫性葡萄膜炎模型中肝脏免疫系统紊乱的研究

葡萄膜炎是一种反复发作的炎症性疾病,可导致免疫系统功能障碍和多器官损伤．然而,葡萄膜炎是否导致肝功能损害尚不十分清楚．本文通过运用流式分析技术和激光共聚焦成像技术,研究了实验性自身免疫葡萄膜炎模型的肝脏病理和功能变化．结果显示肝损伤可出现在葡萄膜炎的炎症后期并与眼损伤程度相关．并且CD3⁺ CD4⁺ T细胞、CD3^- NK1.1⁺ DX5^- NK细胞、和CD11b⁺ F4/80^- ly6c⁺ 细胞在感染的眼睛和肝脏中增加．将CD3⁺ CD4⁺ T细胞回输给炎症的小鼠后,眼睛和肝脏的病理损伤加重．此外,在炎症的小鼠中可见血管扩张,大量淋巴细胞浸润到炎症的眼和肝脏的血管周围．总之,我们的研究结果提示,肝损伤可以发生在小鼠葡萄膜炎模型中,这种损伤可能与通过外周循环浸润到肝脏的CD3⁺ CD4⁺ T细胞有关．     

7种金花茶组植物叶片营养成分分析

为选育金花茶优良品种，以7种金花茶组(Camellia sect. Chrysantha)植物成熟叶片为试材，对其总黄酮、茶多酚、总多糖、总皂苷、总氨基酸及维生素E等6种营养物质及K、Ca、Na、Fe、Mn、Zn、Se等7种矿质元素含量进行测定比较，通过聚类分析，考查不同金花茶组植物叶片间存在的药用价值差异。结果表明，7种金花茶组植物叶片的营养成分含量丰富且存在显著差异：凹脉金花茶(Camellia impressinervis)的茶多酚含量最高，达7.13%；东兴金花茶(C. tunghinensis)的总皂苷含量最高，达0.41 g·100 g^-1；柠檬金花茶(C. limonia)的总黄酮含量最高，达671.67 mg·100 g^-1。矿质元素方面各种类均呈现高钾低钠的特征，凹脉金花茶、柠檬金花茶和小果金花茶(C. nitidissima var. microcarpa)K含量高于Ca，且各品种中均检测出Se元素。综合结果表明，凹脉金花茶叶片中茶多酚、总多糖、总氨基酸等各类营养成分含量相对较高，具有潜在的研究与开发价值。     

问号钩端螺旋体疫苗候选基因LB061的抗原性和保守性研究

目的 克隆表达和鉴定问号钩端螺旋体黄疸出血群赖型赖株中疫苗候选基因LB061,研究LB061的免疫原性和在不同血清型钩端螺旋体菌中的保守性。方法 生物信息学软件分析预测LB061的特征。构建原核表达质粒pQE31-LB061,经IPTG诱导后用SDS-PAGE及Western印迹法鉴定表达情况。用表达的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,Western印迹法检测其抗原性和在不同血清型钩端螺旋体中的保守性。Western印迹法检测钩端螺旋体全菌兔抗血清中的LB061抗体。结果 生物信息学预测结果显示,LB061含有DUF839家族结构域。成功克隆了重组质粒pQE31-LB061,表达的重组蛋白能刺激BALB/c小鼠产生抗体(效价为1∶32000),并能与相应抗体反应,具有良好的抗原性。在16株不同血清型的钩端螺旋体中均可检测到LB061蛋白的表达,并在钩端螺旋体赖株全菌兔抗血清中检测到其抗体。结论 LB061蛋白可以作为外膜蛋白刺激宿主免疫系统产生抗体,具有良好的抗原性和保守性。本研究为其作为疫苗候选基因的研究奠定了基础。     

鸟类仍保留牙齿发生定位的分子机制

众所周知现代鸟类不长牙齿,而其侏罗纪和白垩纪的祖先则长有牙齿,然而,在发育中鸡胚口腔中却残留着牙齿发生的原基,在形态上与哺乳动物臼牙牙原基极为相似,现代鸟类的胚胎组织是否具有牙齿发育的潜能,目前已有不少研究者对这一问题进行了探讨,Kollar和Fisher等人将鸡胚胎下颌靠近口腔面的上皮与小鼠的牙间充质进行组织重组实验,并植入小鼠眼球中作intraocular grafting培养,他们的实验结果表明重组后的组织块可以发育形成牙齿的结构,包括形成成釉细胞（ameloblast),并能分泌釉质,Kollar等认为在进化进程中鸟类牙齿的消失并非由于口腔上皮中有关釉质合成的遗传信息的丢失,而是牙齿发育过程中的组织之间所必须的相互作用（次级诱导）受阻而造成的。Lemus和Fuenzalida等人的实验结果进一步证实了这一结论。他们用鹌鹑胚胎躯体的上皮组织与蜥蚁或兔子的牙间充质重组后,用鸡胚绒毛进行培养,得到了发育很好的牙齿结构,发现鹌鹑的上皮细胞也可以分形成釉质细胞,并分泌牙釉质,Cummings将鹌鹑胚胎的牙上皮组织与小鼠胚胎的牙间充质组织重组后也得到类似的结果。根据小白鼠牙齿发育中已知的调控分子信号通路,我们曾对鸟类不长牙齿的分子机制进行了研究,我们的研究发现鸟类牙组织仍保留与哺乳动物早期牙齿发生相类似的信号通路,能表达相关的基因并产生相应的信号分子,鸟类牙齿发育停滞在牙原基时期的可能原因是Bmp4不在预定牙上皮组织中表达,导致发育信号的传递受阻,因此,鸟类胚胎的牙原基组织是一个很好的实验模型,用于研究上皮与间充质组织之间的相互作用,导致器官发育的分子机制。在本研究中,我们又进一步对鸡胚发育中与牙原基定位的有关分子信号通路进行了研究,研究证实了,与小白鼠的发育相似,在鸡胚发育中,在任何可见的牙齿发生了形态变化出现之前,Pax9作为预定牙间充质的标记基因（Fig.1),利用体外器官培养,组织重组和原位杂交等方法,证实了Pax9在下颚间充质中的定位表达是由其上方上皮中的两种信号分子所决定（Fig.2),其中FGF8诱导Pax9的表达（Fig.3).而BMP4则抑制该表达（Fig.4)。通过这两种信号之间的诘抗作用决定了间充质中Pax9的表达部位,亦即牙原基的发生部位,因此,与小白鼠相似,在鸟类中牙原基的发生部位是由两类具有诘抗作用的信号分子所决定的,本研究结果进一步证实了在鸟类胚胎发育过程中仍保留与牙齿发育有关的早期信号通路。     

遮阴对南山茶与红皮糙果茶幼苗生长及生理特性的影响

以2年生南山茶Camellia semiserrata、红皮糙果茶C. crapnelliana实生苗为试材，研究全光照(CK)、30%遮阴、50%遮阴和70%遮阴等处理对其生长、生物量分配及叶片部分生理生化指标的影响。结果表明，30%遮阴可显著增加南山茶幼苗株高净生长量、总生物量，其叶绿素a、叶绿素b显著增加，SOD、CAT酶活性及Pro含量均与CK组无显著差异，MDA含量则显著降低；红皮糙果茶幼苗则在30%遮阴下显著增加株高和地径，叶绿素a、叶绿素b含量及SOD酶活性、Pro含量与CK组无差异，MDA含量显著下降。说明两种山茶属植物幼苗较适宜的光照条件为遮阴30%。此外，红皮糙果茶幼苗在50%遮阴条件下与CK组比较，虽然地径生长受抑制，但株高生长无显著差异，且叶绿素a、叶绿素b含量与CAT酶活性显著增加，Pro、MDA含量显著下降，表明红皮糙果茶幼苗能通过调节叶绿素含量、CAT酶活性和Pro含量积极应对50%遮阴的弱光环境，进行适应性生长。因此生产上及绿化应用中，南山茶幼苗对光照的需求更为严格，遮阴控制在30%；红皮糙果茶幼苗则可适应更加荫蔽的环境(50%遮阴)。     

一种超高灵敏的埃博拉病毒胶体碳侧流免疫层析检测方法的建立

埃博拉出血热 (Ebola hemorrhagic fever, EHF) 由于其高感染性和高致死率特点,快速鉴别诊断并实施隔离是最有效的防止疫情扩散的措施。文中建立了一种可以快速、高灵敏筛查埃博拉病毒 (Ebola virus,EBOV)感染的现场检测技术,用碳纳米颗粒标记抗EBOV基质蛋白VP40兔多克隆抗体,组装成一种可在15 min内检测埃博拉病毒的胶体碳侧流免疫层析试纸条。将标记胶体碳颗粒的兔多抗喷涂于玻璃纤维素膜上制备碳标垫;以1 mg/mL的抗VP40单克隆抗体 (McAb,4B7F9) 和羊抗兔IgG,按照2 μL/cm的包被量印迹于硝酸纤维膜上,分别作为检测线与质控线,组装试纸条。该试纸条能够特异地检测EBOV重组VP40蛋白、EBOV病毒样颗粒(Virus-like particles,VLP) 和灭活EBOV,而与马尔堡病毒样颗粒 (MARV-VLP)、流感病毒A/PR/8 (IAV/PR/8)、黄热病毒 (YFV-17D)、登革热病毒2型 (DEN2) 无交叉反应,显示良好的特异性,对1 500份阴性血清进行检测,假阳性率为1.3‰,仅为WHO授权ReEBOV?胶体金试纸的1/100;该胶体碳试纸条检测灭活EBOV的最低检出限为100 ng/mL (相当于106 copies/mL),远优于ReEBOV?胶体金试纸条检出限 (10 μg/mL,相当于108 copies /mL)。热稳定性评价显示试纸条可在室温稳定保存1年以上。文中建立的EBOV胶体碳免疫层析试纸条能够快速、超高灵敏、特异地检测EBOV,为现场快速筛查EBOV感染提供一种新方法。     

用RAPD分析四种无尾类的系统演化关系

利用RAPD技术检测了分属无尾目3个科（雨蛙科、蟾蜍科、蛙科）的黑眶蟾蜍（Bufomelanostictus)、中国雨蛙（Hyla chinensis）、泽陆蛙（Rana limnocharis）、沼水蛙（R.guentheri)的系统发生关系。经19个随机引物对4个物种基因组DNA进行扩增,选择其中扩增谱带清晰的16个引物进行分析,计算不同科间及同一科内不同种间的遗传距离,结果表明：16个引物获得的RAPD谱带均表现出不同程度的多态性;泽陆蛙与沼水蛙间的亲缘关系最近,而黑眶蟾蜍与中国雨蛙之间的亲缘关系较黑眶蟾蜍与蛙科的泽陆蛙、沼水蛙之间以及中国雨蛙与泽陆蛙、沼水蛙之间的亲缘关系近,从基因组DNA水平上也说明雨蛙科与蟾蜍科间的亲缘关系更近,与蛙科的亲缘关系更远,这与形态学、染色体和线粒体DNA多态性研究的分析结果一致,从而进一步从分子水平上为无属目这3科的系统演化提供了新的证据。     

猕猴前列腺增生动物模型的建立

利用猕猴（Macaca mulatta）建立前列腺增生动物模型,并探讨丙酸睾酮（TP）诱导猕猴前列腺增生模型的最佳剂量及给药时间。雄性猕猴12只,随机分为3个剂量的实验组和对照组共4组,每组3只。去势8周后,皮下注射给药。实验组按低、中、高剂量分别给予丙酸睾酮（TP）0.8、2.5、7.5 mg/(kg?d),对照组给予等体积溶剂,连续8周。B型超声探测去势前、去势后8周及TP干预4周、8周时猕猴前列腺体积,并采集分离各个实验阶段的血清备用。给药8周后处死动物,取前列腺,称量湿重,测量体积,计算前列腺重量指数及体积指数,H.E染色切片观察前列腺增生情况,并进一步测量腺腔面积及腺上皮细胞高度。同时,采用ELISA方法测定血清及前列腺组织中二氢睾酮（DHT）水平。B型超声结果显示,去势8周时,各组猕猴前列腺体积均明显小于去势前（P < 0.05）。TP干预4周及8周时,各剂量组猕猴前列腺体积均显著大于对照组（P < 0.05）,且在干预4周TP中剂量组达到最佳效果（P < 0.01）。而TP干预4周与8周相比,各组间并无显著性差异（P > 0.05）。解剖结果显示,各实验组猕猴前列腺湿重、体积及脏器指数均明显大于对照组（P < 0.05）,且在中剂量组达到最大值。而显微图像分析结果显示,实验组猕猴前列腺上皮细胞增生,与对照组比较,各剂量组猕猴前列腺腺腔面积明显增加（P < 0.01）,腺上皮细胞高度明显增高（P < 0.01）。二氢睾酮（DHT）水平检测结果显示,与对照组相比,药物干预后各实验组猕猴血清中DHT含量明显增高（P < 0.01）,且在中剂量组达到最大值。TP干预4周与8周相比,各组间并无显著性差异（P > 0.05）。同时,各实验组前列腺组织中DHT含量相较于对照组也明显增高,但剂量-效应关系不显著,中剂量组优于高、低剂量组。TP药物干预去势猕猴可成功建立猕猴前列腺增生模型,初步判定较为适宜的造模条件为丙酸睾酮给药剂量2.5 mg/(kg?d),给药时间4周。     

问号钩端螺旋体中一个新的OmpA家族蛋白抗原性及保守性研究

目的克隆表达和鉴定问号钩端螺旋体(L.interrogans)黄疸出血群赖型赖株中一个新的外膜蛋白(Omp)A家族基因LA0301,研究LA0301编码蛋白的抗原性和在15个钩端螺旋体(简称钩体)血清群代表株中的保守性,探讨其在疫苗研究中的意义。方法生物信息学软件分析预测LA0301的特征。构建原核表达重组体pQE31-LA0301,经IPTG诱导后用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及蛋白质印迹法(Western blot)鉴定表达情况。用表达的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,Western印迹检测其免疫反应性和在不同血清型钩体中的保守性。酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western印迹检测兔抗钩体全菌血清中的LA0301编码蛋白的抗体。结果生物信息学预测结果显示,LA0301具有OmpA家族的结构域。克隆表达了重组质粒pQE31-LA0301,重组蛋白能刺激BALB/c小鼠产生特异性抗体,效价为1:32000。在兔抗钩体全菌血清中检测到特异的LA0301蛋白抗体,并在15个血清群的代表株钩体中均可检测到LA0301蛋白。结论LA0301蛋白是问号钩体中一个新的OmpA家族蛋白,具有良好的抗原性和保守性,并且能在钩体感染的过程中刺激机体产生相应的抗体。为进一步研究钩体新型疫苗候选基因奠定了基础。