向小黑杨转化蜘蛛杀虫毒素基因（英文）

近年来,危害小黑杨Populus simonii×Ｐ.nigra的害虫发生严重,给林业生产造成很大损失。为了提高小黑杨的抗虫能力,避免使用杀虫剂带来的污染,用农杆菌介导法将澳大利亚漏斗蛛Atrax robustus的毒蛋白基因和苏云金芽孢杆菌CryⅠA（b）基因C末端的融合基因BGT转化入小黑杨。PCR 和Southern印记分析转基因植株,结果表明,BGT杀虫基因已经整合在小黑杨基因组上。活性实验表明,取食转基因杨树6天和9天后,舞毒蛾Lymantria dispar 2龄幼虫的校正死亡率分别是37.0%和92.6%。方差分析表明取食转基因和对照杨树的舞毒蛾幼虫体重差异显著。这些结果显示转基因杨树上的舞毒蛾的发育速率受到影响。     

同安钮夜蛾核型多角体病毒Opdi108 基因的分子克隆和细胞定位(英文)

【目的】同安钮夜蛾Ophiusa disjungens（鳞翅目, 夜蛾科）是危害桉树的主要害虫之一。同安钮夜蛾核型多角体病毒(OpdiNPV)是从O. disjungens中分离到的新病毒。本研究主要目的是从分子水平上了解该病毒。【方法】对一条PstⅠ的酶切片段进行了克隆、 测序和分析。【结果】在基因数据库中通过对碱基序列的比对, 发现了一个Ac108的同源基因, 命名为Opdi108 (GenBank登录号为EU 732666)。该基因的开放阅读框含有225对碱基, 其编码蛋白与其他已知杆状病毒同源物有16%~37%的氨基酸序列一致性。在起始密码子ATG上游有一个晚期启动子TAAG。C末端含有His-tag的Opdi108基因在大肠杆菌中Escherichia coli进行了表达, 融合蛋白的分子量为28.7 kDa。以荧光蛋白EGFP为标记物, 构建了Opdi108与EGFP的重组体, 利用Bac-to-Bac表达系统实现了与AcMNPV的重组, 用该重组病毒vEGFP-Opdi108感染斜纹夜蛾Trichoplusia ni 细胞。感染24和72 h后分别用共聚荧光显微镜观察, 发现Opdi108定位在细胞质内。【结论】本研究从分子生物学角度研-OpdiNPV, 为进一步利用该病毒防治包括同安钮夜蛾在内的害虫, 以及构建重组杀虫剂等奠定基础。     

舞毒蛾核型多角体病毒多角体蛋白基因的克隆、测序和表达

从东北林业大学实验林场采集并纯化了舞毒蛾核型多角体病毒（LdMNPV-NEFU)。用蛋白酶K消化,提取了病毒基因组DNA。用PCR方法,克隆出了该病毒的多角体蛋白（polyhedrin)基因,并对该基因进行了序列测定。结果显示,该基因序列是一个含有735个碱基对的开放阅读框（ORF）,该阅读框编码245个氨基酸。有5对碱基与加拿大病毒株LdMNPV-G的多角体蛋白基因序列存在差异。LdMNPV-NEFU分离株的多角体蛋白基因的第54,109,379,508和701位（从起始密码子中的A开始）分别是C,G,T,C和G,而LdMNPV-G分离株的多角体蛋白基因（ORF）相应位置上的碱基分别是G,C,C,T和T,两个ORF编码的对应位置的氨基酸绝大多数相同,只有一对不同,即由LdMNPV-NEFU编码的天冬氨酸和由LdMNPV-G编码的对应位置的组氨酸。以质粒pT-7-7为载体,多角体蛋白基因在大肠杆菌BL21（DE3）菌株中进行了原核表达。     

重组杆状病毒杀虫剂的生物安全性

分别就重组杆状病毒杀虫剂对捕食性天敌和寄生性天敌的影响、与其它生物间的基因重组和生态效应等问题进行了综述。研究成果表明,重组病毒的生态适应性降低,因而对生态环境以及捕食性和寄生性天敌等非靶标生物种类的危险性也大大降低。但重组病毒也不是绝对安全的,对其生物安全性还要进行长期、深入全面地分析和研究。     

夹竹桃、鱼藤、乌桕对锈同心舟蛾的毒杀活性

为有效控制锈同心舟蛾HomocentridiapictaHampson对木荷(SchimasuperdaGardn.etChamp.)的危害,用索氏提取法获得夹竹桃(NeriumindicumMill.)叶、鱼藤(DerristrifoliateLour.)叶和乌桕(Sapiumsebiferum(L.)Roxb.)皮的乙醇提取物,在室内分别测定3种植物提取物对锈同心舟蛾3龄幼虫的防治效果。实验结果和方差分析表明,3种植物提取物为锈同心舟蛾都具有防治效果,3.5d后,受试昆虫的校正死亡率都达到60%以上;其中以夹竹桃和乌桕的提取物对受试昆虫的影响最为明显,6d后,受试昆虫的校正死亡率都达到90%以上。3种植物对锈同心舟蛾的毒杀作用由大到小的顺序依次是乌桕、夹竹桃和鱼藤。     

松墨天牛表皮蛋白基因的克隆及表达分析

【目的】本研究旨在探索松墨天牛Monochamus alternatus Hope中昆虫表皮蛋白（ICP）基因在幼虫各组织中和不同发育阶段的时空表达模式。【方法】用cDNA末端快速扩增方法(rapid amplification of cDNA ends, RACE) 克隆了松墨天牛表皮蛋白基因,用实时荧光定量PCR分析了该基因在幼虫体内和不同虫态中的表达。【结果】克隆获得的松墨天牛幼虫表皮蛋白基命名为MoalICP（GenBank 登录号：AGX00998.1）,开放阅读框长408 bp,编码135个氨基酸,推测得到的蛋白的分子量为14.51 kDa。由MoalICP推导的蛋白与桑天牛Apriona germari ICP (AAM66718.1)氨基酸序列一致性为79%;与丽蝇蛹集金小蜂Nasonia vitripennis ICP (NP_001161297.1)、果蝇Drosophila mojavensis ICP (XP_002005461.1)、玉带凤蝶Papilio polytes ICP (BAM18876.1)等19种昆虫表皮蛋白的氨基酸序列一致性在35%~45%之间;在第10-26位氨基酸位处含有一个跨膜片段。MoalICP在幼虫头、体壁、脂肪体、血细胞、中肠和马氏管均有表达;在蛹和成虫中的表达量分别是在幼虫中的44%和161%。【结论】MoalICP与其他昆虫有较高的氨基酸序列一致性。MoalICP在松墨天牛幼虫内广泛表达;在各个发育阶段中,以成虫中的表达量最高。本文为进一步研究松墨天牛表皮蛋白基因的生理功能和松墨天牛的表皮化学奠定基础。     

棉卷叶野螟泛素基因的克隆、序列分析及原核表达

本研究用RT-PCR方法，克隆了棉卷叶野螟Haritalodes derogata (Fabricius)泛素基因编码区，GenBank登录号为EU580145。序列分析表明，该编码区长228 bp，编码76个氨基酸，推测的编码蛋白的相对分子质量和等电点分别为8.53 kD和5.83。同源性比较发现，棉卷叶野螟泛素基因与其他10种昆虫泛素基因在氨基酸水平上具有93%以上的相似性。系统发育树显示棉卷叶野螟与斜纹夜蛾Spodoptera litura (Fabricius)遗传距离较近，通过同源建模获得了该棉卷叶野螟基因编码蛋白的理论三维结构。将棉卷叶野螟泛素基因与pET-32a(+)连接，构建原核表达载体pET-32a-ub，经IPTG诱导，棉卷叶野螟泛素基因在大肠杆菌BL21(DE3) 中高效表达。本研究成功克隆了棉卷叶野螟泛素基因的编码区，并经Western blotting分析证明实现了该基因的原核表达，为进一步研究其在该昆虫体内的作用机理奠定了基础。