toxR基因作为荧光定量PCR靶基因设计TaqMan探针快速检测副溶血弧菌

以toxR基因为靶基因,通过优化反应条件建立了快速检测副溶血弧茵的TaqMan实时荧光PCR方法.特异性试验表明,该方法能选择性检测副溶血弧茵,而与金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、单增李斯特杆菌等多种常见的食源性病原茵没有交叉反应:灵敏度试验表明,该方法最少可检测到25个拷贝的toxR基因重组质粒,对纯培养物和模拟食品样品直接检测的灵敏度分别为21 cfu/mL和210 cfu/g;重复性试验表明,同一样品于试验内及试验间的变异系数分别为0.9%和1.3%:所制作的标准曲线在2.5 × 101～2.5 × 106拷贝数之间有较好的线性关系,能对副溶血孤菌进行准确的定量分析.结果表明,本研究所建立的副溶血弧菌实时荧光PCR检测方法具有特异性好,灵敏度高、重复性好的特点,能进行定量检测,而且检测时间从核酸抽提到出实验结果仅需要3 h.是快速检测副溶血弧菌的有效手段.     

萌发绿豆种子中的一种大豆胰蛋白酶抑制剂钝化酶

通过 30 %～ 6 0 % (NH4 ) 2 SO4 分级沉淀、DEAE_SepharoseCL_6B离子交换层析、SephacrylS_2 0 0凝胶过滤层析和WatersAP_1离子交换层析 ,从萌发的绿豆 (Vignarabiata (L .)Wilczek)种子中分离纯化出一种可降解大豆胰蛋白酶抑制剂 (STI)的蛋白酶。SDS_PAGE测定该酶的分子量为 2 9.8kD。该酶催化降解STI的Km 值为 76 9.2BAEE/mL ,Vmax为 115 .3BAEE·mL-1·min-1。该酶在 5 0℃、pH 8.0、相对酶活力 5 0 0 0BAEE/mL和 4h的反应时间时可将脱脂大豆粉中的STI活性钝化 90 .91%。该酶在温度低于 5 0℃及pH 6 .5～ 8.5时能保持其活性。     

ETA基因作为荧光定量PCR靶基因设计TaqMan探针快速检测铜绿假单胞菌的研究

铜绿假单胞菌是临床上常见致病菌, 传统的检测方法有各种弊端。本研究对该细菌的ETA基因用生物信息学方法加以分析, 选取相对保守且高度特异的DNA序列, 设计一对特异性引物和一个TaqMan探针, 建立FQ-PCR (fluorescence quantitative PCR)检测PA的方法。通过对梯度浓度的铜绿假单胞菌基因组DNA样品进行FQ-PCR检测和对多种细菌的DNA进行扩增, 来检测其灵敏度和验证引物和探针的特异性。试验结果表明, 对比现有的检测方法, 以ETA基因为靶基因, 基于TaqMan探针的快速FQ-PCR检测技术有更高的灵敏度和更好的特异性等优点, 具有很好的研究价值和应用前景。     

花生种子耐脱水力的获得与热稳定蛋白的关系

花生（ＡｒａｃｈｉｓｈｙｐｏｇａｅａＬ．）种子的耐脱水能力在果针入土后４５ｄ以后的胚胎发育期逐渐增加,与一组９～１５．５ｋＤ低分子量热稳定蛋白的丰富表达有关。缓慢干燥可以诱导不耐脱水的果针入土后２５ｄ及３５ｄ花生胚获得耐脱水能力并同时诱导胚轴表达这组热稳定蛋白。成熟脱水促进花生胚耐脱水能力的获得,并增加了花生球蛋白的热稳定性。     

花生种子耐脱水力的形成与可溶性糖累积的关系

花生胚轴的耐脱水力在40－65DAP的发育后期逐渐增加,同时胚轴还原性糖／非还原性糖比值下降。缓慢干燥可同时诱导35DAP胚轴累积蔗糖与寡糖（水苏糖与棉籽糖）;外源ABA及高渗处理可诱导35DAP离体胚轴累积蔗糖,但不能累积寡糖（水苏糖）。耐脱水胚轴可溶性糖成分的模拟混合物可在水活度0．32及零上温度进入玻璃态;而不耐脱水胚轴的可溶性糖模拟混合物仅在零下温度进入玻璃态。模拟实验证明在干燥状态下可溶性糖与花生2S蛋白结合,并消除了2S蛋白的干燥结晶。     

内标多重荧光RT-PCR同时检测肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型

【目的】为对当前爆发的手足口病进行快速准确的检测, 【方法】本研究建立了含内标的同时检测EV71和CA16的多重荧光RT-PCR方法,对该方法的特异性、灵敏度等进行评估,并对400多份临床样品进行了检测。【结果】实验结果表明,该检测方法特异性强,对10株EV71病毒、8株CA16病毒和25株其他人类病毒进行了检测,特异性为100%;该检测方法对EV71和CA16的检测灵敏度分别达到0.1 TCID50和1 TCID50;将0.1-104TCID50/ml EV71和CA16样本进行重复性实验,其变异系数分别为0.9-2.0%和0.9-2.3%。对400多份临床样品分别进行荧光RT-PCR检测和传统方法检测,结果显示,荧光RT-PCR对EV71和CA16的阳性检出率平均为46.1%和14.2%,比传统方法（34.5%和12.8%）的阳性检测率高。另外,实验数据显示,在粪便、直肠拭子、咽喉拭子样本中,PCR抑制物存在的比例为1.8%-3.4%,表明内标对监控PCR抑制物的存在具有重要作用。【结论】本方法能同时对EV71和CA16进行快速检测,并且灵敏度高,特异性好,由于加入了内标,能有效地监控假阴性的出现,适合于手足口病的临床检测。     

脱水敏感的黄皮种子在发育中的可溶性蛋白变化

黄皮种子的子叶与胚轴,在发育前期蛋白质合成速率均高于后期。在发育过程中子叶的可溶性蛋白含量无明显变化,但在后期能新合成少数低分子量的热不稳定蛋白,可能是引起种子萌发的水解酶类。胚轴中可溶性蛋白单位干重含量高于子叶,而其成分不随发育而变化。ABA可促进发育后期黄皮种子胚轴中20kD蛋白的合成,但不能改变种子的脱水敏感性。     

花生种子耐脱水力的形成与可溶性糖累积的关系

花生胚轴的耐脱水力在４０－６５ＤＡＰ的发育后期逐渐增加,同时胚轴还原性糖／非还原性糖比值下降。缓慢干燥可同时诱导３５ＤＡＰ胚轴累积蔗糖与寡糖;外源ＡＢＡ及高渗处理可诱导３５ＤＡＰ离体胚轴累积蔗糖,但不能累积寡糖。耐脱水胚轴可溶性糖成分的模拟混合物可在水活度０．３２及零上温度进入玻璃太;而不耐脱水胚轴的可溶性糖模拟混合物仅在零下温度进入玻璃态。     

脱水敏感的黄皮种子在发育中的可溶性蛋白变化

黄皮种子的子叶与胚轴,在发育前期蛋白质合成速率均高于后期。在发育过程中子叶的可溶性蛋白含量无明显变化,但在后期能新合成少数低分子量的热不稳定蛋白,可能是引起民种子萌发的水解酶类。胚轴中可溶性蛋白单位干重含量高于子叶,而其成分不随发育而变化。ＡＢＡ可促进发育后期黄皮种了胚轴中２０ｋＤ蛋白的合成,但不能改变种子的脱水敏感性。     

巴西橡胶树未受精胚珠培养时愈伤组织与胚状体的起源(简报)

THEORIGINOFCALLUSANDEMBRYOIDINCULTUREDUNFERTILIZEDOVULESOFHEVEABRASILIENSISYangXiaoqua(DepartmentofFallScience,SouthChinaUniversityofTechnolop,Guangzhou510641)FuJiarui(DepartmentofBiology,ZhongshanUniversity,Guangzhou510275)迄今为止,利用未受精胚珠高体培养诱导木本植物形成单倍体植株的仅有杨树及巴西橡胶树两例[1-3],但均缺乏详细的胚胎学观察资料,胚状体的起源不甚清楚。在某些草本植物中,起源问题已有详细的研究。例如向日葵未受精胚珠离体培养时,胚状体起源于未受精的卵…