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1.
为研制肿瘤相关寡核苷酸芯片,并实现其在抗肿瘤反义核酸“癌泰得”作用机理研究方面的初步应用,制备了包含近450种肿瘤相关基因特异寡核苷酸探针的寡核苷酸芯片,建立了相应的质控标准.“癌泰得”用脂质体转染HepG2肿瘤细胞,提取细胞总RNA反转录并荧光标记cDNA,用制备的寡核苷酸芯片检测肝癌细胞HepG2的肿瘤相关基因表达水平,用软件分析获得其差异基因表达谱.0.4 μmol/L的反义核酸“癌泰得”作用于HepG2细胞15 h后,MDNCF、DHS等基因mRNA表达下调,MUC2、MPP11、LAT、HRIF-B、JNK3A1等mRNA基因表达上调,初步检测到了“癌泰得”的抗肿瘤作用可能的相关基因,为进一步的分子作用机理的探讨奠定基础.结果表明,制备的肿瘤相关芯片敏感度高、特异性高、重复性均较好,可用于检测肿瘤相关基因的表达谱,为临床诊断和基础研究提供了技术平台.  相似文献   
2.
降钙素(calcitonin,CT)是一种含有32个氨基酸残基的多肽激素,在体内参与钙磷的代谢,促进钙在骨中的沉淀,从而使血钙减少。CT广泛应用于治疗Paget氏疾病以及各种高血钙症,尤其在骨质疏松症的预防及治疗方面具有显著疗效。在不同种属来源的降钙素中,鲑鱼的活性最高,且降钙素的种属特异性很低,故可以用鲑鱼降钙素(sCT)来治疗人类的疾病。天然鲑鱼降钙素来源有限,化学合成成本昂贵,采用  相似文献   
3.
为了研究蛋白激酶C(PKC)在胰岛素样生长因子-1(IGF1)促糖代谢过程中所起的作用,分别检测PCK激动剂佛波醇酯(PMA)和抑制剂星形孢菌素(Staurosporine)对IGF1降糖作用的影响。结果表明PMA和星形孢菌素分别能抑和增强IGF1的降糖作用,建立了高表达PKCα的HepG2细胞株,IGF1对此细胞株的降糖作用与对照相比大大增强,PMA和星形孢菌素分别可大大抑制和增强IGF1对PC  相似文献   
4.
降钙素与降钙素基因相关肽(CT/CGRP)基因编码一组多肽,即降钙素(CT)、降钙素的N端肽和C端肽、降钙素基因相关肽(CGRP)及淀粉不溶素(Amylin)。CT/CGRP基因转录而成的mRNA前体,在不同组分中通过选择性加工形成CT mRNA或CGRPmRNA,再通过翻译及蛋白质加工,最后形成成熟的降钙素或降钙素基因相关肽。本简单介绍一下降钙素的基因结构及表达调控方面的研究进展。  相似文献   
5.
 为了探讨胰岛素样生长因子结合蛋白 3(IGFBP- 3)分子上的胰岛素样生长因子 1 (IGF- 1 )结合位点并找出其关键氨基酸残基组成 ,首先建立了研究 IGF- 1与 IGFBP- 3相互作用的酵母双杂交模型 ,可以定性和定量地分析两个蛋白质之间的相互作用大小 ;同时利用基因体外定点突变的方法 ,对推断出的 IGF- 1结合位点中的氨基酸突变 ,经 DNA序列分析 ,构建了 5种 IGFBP- 3突变体 .然后在酵母双杂交模型中通过对报告基因活性的定量分析 ,检测 IGF- 1与各种 IGFBP- 3突变体之间相互作用的大小 .结果表明 ,IGFBP- 3分子上的 Lys2 2 2 ,Gln2 2 3突变后 ,与 IGF- 1的结合力大大下降 ,而 Arg2 2 5,Pro2 2 6,Ser2 2 7突变后也导致与 IGF- 1结合力的部分下降 .从而初步确定了IGFBP- 3分子中第 2 2 2~ 2 2 7位的氨基酸区域为 IGF- 1的结合位点 ,并且 IGFBP- 3分子上 Lys2 2 2 ,Gln2 2 3在与 IGF- 1结合中起着重要作用 .  相似文献   
6.
为了探讨胰岛素样生长因子受体1(IGF-R1)分子上的胰岛素样生长因子1(IGF-1)结合位点,建立了研究IGF-1与IGF-R1相互作用的酵母双杂交模型;利用基因体外定点突变的方法,构建了7种IGF-R1突变体;然后通过报告基因活性的定量分析,在酵母双杂交模型中检测了IGF-1与各种IGF-R1突变体之间相互作用的大小,初步确定了IGF-R1分子中IGF-1的结合位点,并且IGF-R1分子上N237、T238在与IGF-1结合中起着重要作用.  相似文献   
7.
胰岛素样生长因子结合蛋白研究进展   总被引:8,自引:0,他引:8  
胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBPs)是一组能够和胰岛素样生长因子(IGF)以高亲和力结合的可溶性蛋白,它们不仅携带IGF,延长IGF的半衰期,而且还调控IGF的生物活性, 影响IGF的分布.在不同的实验条件下,IGFBPs能够增强或抑制IGF的活性.另外,又发现IGFBPs有独立于IGF之外的内在的生物活性.简单介绍一下近年来IGFBPs在分子结构、基因表达、翻译后的修饰及生物功能等方面的研究.  相似文献   
8.
以鲑鱼基因组DNA为模板,采用PCR获得sCT基因,并为DNA序列分析所证实.以pGEX-3X为表达载体,利用体外定点突变技术成功地构建了融合蛋白GST-sCT的重组表达质粒pGEX-3X-sCT,在大肠杆菌中得到高效表达,其表达量约为菌体总蛋白的30%;利用亲合层析法对融合蛋白GST-sCT进行纯化,再经Fac-torΧa酶切后获得了重组sCT,并对其进行活性检测.初步实验证明,重组sCT具有较强的生物活性  相似文献   
9.
为研究胰岛素样生长因子 1(IGF1)及其突变体与IGF结合蛋白 3(IGFBP3)的相互作用 ,针对IGF1的第 3、4、15、16位氨基酸残基 ,采用定点突变的方法构建了 [Y15L16 ]IGF1和 [Q3A4Y15L16 ]IGF1。然后分别将IGF1/IGF1突变体和IGFBP3cDNA克隆至酵母表达载体pGBT9和pACT2中 ,利用酵母双杂交技术检测IGF1/IGF1突变体和IGFBP3之间的相互作用。结果表明用酵母双杂交系统检测IGF1与其结合蛋白的结合力是可行的 ,构建的这两个IGF1突变体与IGFBP3的结合力 ,与天然IGF1相比 ,结合力大大减小  相似文献   
10.
鲑鱼降钙素基因在大肠杆菌中的克隆与表达   总被引:9,自引:0,他引:9  
以鲑鱼基因组DNA为模板,采用PCR获得sCT基因,并为DNA序列分析所证实。以pGEX-3X为表达载体,利用体外定点突变技术成功地构建了融合蛋白GST-sCT的重组表达质粒pGEX-3X-sCT,在大肠杆菌中得到高效表达,其表达量约为菌体总蛋白的30%;利用亲合层析法对融合蛋白GST-sCT进行纯化,再经Factor Xa酶切后获得了重组sCT,并对其进行活性检测。初步实验证明,重组sCT具有较  相似文献   
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