江苏省不明原因轻型呼吸道传染病暴发的病因学研究

自2004年4月18日起至6月末,江苏省东台市发生以发热、咽部充血、扁桃体肿大为临床表现的原因不明的疫情暴发,发病人群以中小学生、幼儿为主,地域以许河镇、新街镇以及临近乡镇为主。疫情涉及东台市9个镇,合计报告709例,分布在75个学校,240个班级。暴发的特点为传染性强,短期内出现大量的患者,发病有班级聚集性特点,未发现成人感染。临床表现以发烧（100％）、咽部充血（91．40％）、扁桃体肿大（60．22％）、咽痛（50．00％）为主;X线检查可发现肺纹理增强（90．3％）。用Hep-2细胞从患儿20份咽拭子标本中分离到12株病毒,经PCR扩增腺病毒L3部分基因及其PCR产物的序列测定和分析,证实这12株病毒为腺病毒3型;对28份咽拭子标本直接进行DNA提取和PCR扩增,有17份标本PCR扩增L3部分基因呈阳性,经序列测定和分析,也为腺病毒3型。这29个阳性标本L3基因的1446个核苷酸的序列与GenBank上所发表的腺病毒3型序列同源性高达99,5％。双份血IgG检测：对江苏省采集10份患儿急性期和恢复期双份血清,以从患儿咽拭子分离到的腺病毒3型作为抗原,进行病毒抗体测定,6份患儿的双份血清腺病毒总IgG滴度呈4倍以上增高。患儿急性期血IgA检测：对暴发疫情34例患儿急性期血清（发病时间为1～3天）进行腺病毒IgA抗体测定,结果有9份标本为阳性,1份标本为可疑阳性,阳性率为26．47％。IgA阳性率低可能与血清采集时间过早有关,机体还未全部产生IgA。另外,还对江苏省送检的从患儿血培养基培养的细菌毒株进行了鉴定,对其16S rRNA基因进行了基因扩增及序列分析,序列测定和分析提示为A组M3型化脓性链球菌。实验研究结果并结合此次疫情的流行病学和患儿的临床表现,证实腺病毒3型是引起此次儿童不明原因轻型呼吸道传染病暴发的病原体,部分病例伴有原发或继发化脓性链球菌感染。     

6—8周龄Wistar大白鼠血清尿素氮的抽样测试与统计分析

为提供大白鼠血清尿素氮正常值范围的参考，该文对６～８周龄Ｗｉｓｔａｒ大白鼠随机抽样，♀，♂各１３１只，眼底静脉丛取血，用二乙酰肟法测血清尿素氮，按统计学原理进行统计，并对总体正常值范围估计。结果，♂：ｘ±ｓ＝１２２３±３３０μ±Ｓｘ＝１２２３±０２９，μ的可信区间估计为１１６５～１２８１（９５％可信度）和１１５５～１２９１（９９％可信度），正常值范围估计为６４～１９３（含９５％总体）和５１～２１７（含９９％总体）；♀：ｘ±ｓ＝１３３５±３１０，μ±Ｓｘ＝１３３５±０２７，μ的可信区间估计１２８１～１３８９（９５％可信度）和１２７１～１３９９（９９％可信度），正常值范围估计为７４～１９２（含９５％总体）和５８～２１４（含９９％总体），单位均为ｍｍｏｌ／Ｌ，性别间有显著性差异。结果可作为科研，教学等的大白鼠血清尿素氮正常值的参考。     

407例老年肺癌下呼吸道感染患者病原菌分布及耐药分析

目的 分析老年肺癌下呼吸道感染患者痰培养物的病原菌分布及耐药状况.方法 回顾性分析407例老年肺癌下呼吸道感染患者痰标本细菌培养、鉴定及药敏结果.结果 共分离出病原菌238株,革兰阴性菌163株,占68.49％;革兰阳性菌33株,占13.87％;真菌42株,占17.65％.主要病原菌为肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球菌.其中,肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌ESBLs阳性菌株的比例分别为36.73％、28.85％.结论 老年肺癌患者因长期使用抗生素,呼吸道菌群失调,不同病原菌对抗菌药耐药率均较高,以革兰阴性菌感染为主,肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌产ESBLs的菌株有较高比例,二重感染比例较高;革兰阳性菌均对万古霉素敏感,未发现耐药菌株.因此临床医生根据药敏结果合理选用抗生素,对于改善患者肺部微生态失衡,延长生存时间具有重要指导意义.     

蒙古黄芪两种不同成分提取物对肠道微生态失调小鼠的调节作用

目的探讨蒙古黄芪2种不同成分提取物对肠道微生态失调小鼠的调节作用。方法从60只昆明种清洁级小鼠中随机取出10只作为正常对照组,其余50只每天灌胃0.3 g/ml的盐酸林可霉素,每日2次,每次0.3 ml,连续3 d,诱导小鼠肠道微生态失调,正常对照组以等量生理盐水处理。第4天除正常对照组外,所有小鼠均灌胃造成肠道微生态失调模型,将模型小鼠随机分为4组:黄芪多糖组、黄芪皂苷组、丽珠肠乐组和自然恢复组,并灌胃相应浓度药物进行调整治疗,自然恢复组以等量生理盐水处理,连续7 d。结果与自然恢复组相比,黄芪多糖、黄芪皂苷2种药物均能扶植模型小鼠肠道正常菌群生长,提高乙酸含量,降低内毒素水平,有效控制肠杆菌向肝脏的易位(P0.05);黄芪多糖的各项检测指标与其他组相比,差异有显著性,有统计学意义(P0.05)。结论蒙古黄芪不同成分提取物对肠道微生态失调小鼠均具有一定的调节作用,黄芪多糖的疗效可能优于黄芪皂苷。     

人肠道病毒D68型微复制子的建立

建立人肠道病毒D68型(EV-D68)微复制子体系。利用增强绿色荧光蛋白(EGFP)或萤火虫荧光素酶(FLuc)报告基因替换病毒编码区,通过酶切连接,构建EV-D68 T7和PolⅠ系统微复制子体系,获得重组质粒pT7-miniEGFP、pT7-miniFLuc、pHH21-miniEGFP、pHH21-miniFLuc和pHH21-miniFLuc_(ΔpolyC)。微复制子转染RD细胞,48h后荧光显微镜观察EGFP表达情况或用双报告系统检测荧光素酶表达水平。T7和PolⅠ系统微复制子均可表达报告基因,但PolⅠ系统荧光素酶表达水平是T7系统的5倍。并且病毒非编码区的PolyC区域对于病毒蛋白的表达起着重要的作用。本研究成功构建了EV-D68微复制子体系,为EV-D68非编码区功能研究提供工具。     

Wistar大白鼠血液白细胞总数的抽样测试与统计分析

本文对１０－２５周龄Ｗｉｓｔａｒ大白鼠随机抽样,各１４０只,眼底静脉丛取血,显微镜计数法测白细胞总数,按统计学原理进行统计分析,并对总体正常值范围估计。     

引致河蟹颤抖病的病毒的核酸定性

对河蟹(中华绒螯蟹)"颤抖病"病毒及其核酸进行了电镜观察.纯化病毒经负染后由电镜观察显示,病毒粒子呈球状,有囊膜和纤突,直径约为150nm.纯化病毒经核酸酶降解杂核酸后,加入8mol/L尿素释放病毒核酸,经水相法展开后,用覆有碳膜的铜网取样,再经染色和真空镀膜,于电镜下观察.病毒核酸呈单股线状,底片经光学精确放大后,测定了核酸分子的长度,根据经验公式计算出病毒核酸分子量为5.05×106.抽提的病毒核酸在0.8%琼脂糖凝胶电泳中呈单一条带,大小为15～16kb,经核酸酶酶切显示,核酸对DNase I不敏感,对RNase、Mung Bean Nuclease敏感,根据以上特性判断,该核酸为ssRNA.     

从海水毛蚶中分离出甲型肝炎病毒

1988年初上海发生甲肝暴发流行,流行病学分析与生食毛蚶有关,本文报道在引起甲肝暴发流行的毛蚶产地江苏启东海域采集毛蚶标本,取腮和消化系统制成40％悬液,用FRhk_4细胞分离甲肝病毒,每代培养21天,连续传二代后经过免疫荧光,ELISA,HAVeDNA斑点杂交试验,免疫电镜等鉴定,5份标本全部阳性,上述结果证实毛蚶中携带甲肝病毒,并为病原学研究提供依据。     

基于SRAP标记的紫溪山华山松种子园无性系遗传多样性分析

为明确云南楚雄市紫溪山华山松种子园内不同种源无性系间的遗传背景,该研究收集了园内6个种源的60个华山松无性系单株针叶,采用改良CTAB法提取其总DNA,并利用SRAP分子标记对其进行遗传多样性分析。结果表明:(1)从100对引物组合中共筛选出15对具有多态性的SRAP引物,经SRAP-PCR扩增后,共获得出194个位点,多态位点百分率(PPB)为85.05%,Nei's基因多样性指数(H)为0.233 7,Shannon's信息指数(I)为0.341 9,种源间的遗传分化系数(GST)为0.355 5。(2)华山松6个种源遗传多样性较高,且遗传变异主要存在于华山松种源内,种源地会泽(HZ)与巍山(WS)种源的遗传距离最近(D=0.050 1),会泽(HZ)与宜良(YL)种源的遗传距离最远(D=0.361 8)。(3)聚类分析显示将6个华山松种源一共聚为3类:会泽(HZ)和巍山(WS)种源聚为一类;楚雄(CX)、南华(NH)和宜良(YL)种源聚为一类;腾冲(TC)种源单独为一类。综合上述结果显示,紫溪山华山松种子园内无性系间的遗传分化处于较高水平,为华山松杂交育种时亲本的选配及种质资源的评价提供了分子水平的理论依据。     

引致河蟹颤抖病的病毒的核酸定性

对河蟹(中华绒螯蟹)“颤抖病”病毒及其核酸进行了电镜观察。纯化病毒经负染后由电镜观察显示,病毒粒子呈球状,有囊膜和纤突,直径约为150nm。纯化病毒经核酸酶降解杂核酸后,加入8mol/L尿素释放病毒核酸,经水相法展开后,用覆有碳膜的铜网取样,再经染色和真空镀膜,于电镜下观察。病毒核酸呈单股线状,底片经光学精确放大后,测定了核酸分子的长度,根据经验公式计算出病毒核酸分子量为5.05×106。抽提的病毒核酸在0.8%琼脂糖凝胶电泳中呈单一条带,大小为15~16kb,经核酸酶酶切显示,核酸对DNaseI不敏感,对RNase、MungBeanNuclease敏感,根据以上特性判断,该核酸为ssRNA。