miR-335靶向Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1对卵巢癌细胞增殖的影响

目的: 探讨miR-335 靶向Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1(rho associated coiled-coil forming protein kinase 1,ROCK1)对卵巢癌细胞系SKOV3增殖的调控作用。方法:(1)选取卵巢癌细胞系SKOV3及人正常卵巢上皮细胞系IOSE80,采用RT-PCR检测各组细胞中miR-335表达;采用Western blot检测各组细胞中ROCK1蛋白表达;(2)选取卵巢癌细胞系SKOV3,分别转染miR-335 mimic及mimic control,采用RT-PCR检测细胞中miR-335表达;(3)选取卵巢癌细胞系SKOV3,将SKOV3荧光素酶报告载体与miR-335 mimic共转染,采用荧光素酶活性实验验证miR-335对SKOV3的靶向作用;(4)选取卵巢癌细胞系SKOV3,分为3组,即SKOV3组(转染mimic control)、miR-335 mimic组(转染miR-335 mimic)及miR-335 mimic+ROCK1组(共转染miR-335 mimic+ROCK1),采用MTT法检测各组细胞增殖活性,采用Western blot检测各组细胞中ROCK1蛋白表达,采用RT-PCR检测细胞中Cyclin D1表达。结果: (1)RT-PCR结果显示,卵巢癌细胞SKOV3中miR-335表达显著低于人正常卵巢上皮细胞IOSE80(P < 0.05);Western blot结果显示,卵巢癌细胞SKOV3中ROCK1蛋白表达显著高于人正常卵巢上皮细胞IOSE80(P < 0.05);(2)RT-PCR结果显示,转染miR-335 mimic可使卵巢癌细胞SKOV3中miR-335表达上调,与转染mimic control相比较差异具有统计学意义(P < 0.05);(3)双荧光素酶活性检测结果显示,miR-335 mimic可显著抑制野生型ROCK1-Wt报告载体的荧光素酶活性,但对突变型ROCK1-Mut报告载体的荧光素酶活性并无显著抑制作用;(4)转染miR-335mimic后,卵巢癌细胞SKOV3增殖活性及Cyclin D1表达较阴性对照组显著降低(P < 0.05);而转染miR-335 mimic+ROCK1后,卵巢癌细胞SKOV3增殖活性及Cyclin D1表达较单纯转染miR-335 mimic组显著提高(P < 0.05),但仍显著低于阴性对照组(P < 0.05)。Western blot检测结果显示,转染miR-335mimic后,卵巢癌细胞SKOV3中ROCK1蛋白表达较阴性对照组显著降低(P < 0.05);而转染miR-335 mimic+ROCK1后,ROCK1蛋白表达较单纯转染miR-335mimic组显著增高(P < 0.05),且显著高于阴性对照组(P < 0.05)。结论: miR-335可通过靶向ROCK1抑制卵巢癌细胞系SKOV3增殖。     

不同温度效应杀虫剂诱导对绿盲蝽三种解毒酶活力的影响

【目的】为了明确解毒酶对绿盲蝽Apolygus lucorum防治药剂温度效应的影响机制。【方法】本文测定了绿盲蝽3龄若虫体内3种主要解毒酶活力随温度变化的"钟形"曲线,以及在不同温度效应杀虫剂诱导后对绿盲蝽体内解毒酶"钟形"曲线的影响。【结果】在供试温度10~40℃范围内,绿盲蝽体内3种主要解毒酶,在25℃时活力均最高,且显著高于其他温度处理。在不同温度下,4种不同温度效应杀虫剂诱导后对绿盲蝽体内解毒酶活力影响测定结果来看,谷胱甘肽-S-转移酶受杀虫剂诱导影响,可能参与了负温度效应杀虫剂溴虫腈的代谢,其在20~30℃的温度范围内,可能参与了吡虫啉和辛硫磷的部分代谢,而正温度效应杀虫剂氟铃脲在低温时毒力较低,可能与其诱导该酶在低温时活力升高相关。在15℃左右的低温时,绿盲蝽体内羧酸酯酶和多功能氧化酶易受氟铃脲和溴虫腈诱导而活力增加,而在20~35℃,这两种酶活力不易受杀虫剂诱导,且辛硫磷、溴虫腈和吡虫啉可对绿盲蝽体内两种酶活力产生一定的抑制作用。【结论】绿盲蝽体内解毒酶活力可明显受到温度影响,而在杀虫剂诱导条件下,其可对绿盲蝽防治药剂的温度效应产生显著影响。