全反式维甲酸对乙酰胆碱受体特异性淋巴细胞的免疫调控作用

目的:观察全反式维甲酸(ATRA)对乙酰胆碱受体(AChR)特异性淋巴细胞的体外调控作用,探讨其治疗重症肌无力(MG)的可能机制。方法:建立完全弗氏佐剂(CFA)对照组及实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)组大鼠,并获取淋巴结单个细胞悬液,以ACh R97-116多肽片段以及不同浓度的ATRA体外培养72 h,采用流式细胞仪法、CCK-8法、ELISA法分别检测活细胞比例、细胞凋亡和周期的改变以及Th亚群的格局和B细胞抗体分泌能力的变化。结果:ATRA显著降低活细胞比例(P0.001);不同浓度的ATRA均促进了特异性细胞群的凋亡(P0.001),且呈剂量依赖性,而ATRA未改变AChR特异性淋巴细胞的生长周期;ATRA处理后,CFA和EAMG组的淋巴细胞增殖均受到明显抑制,且ATRA对ACh R特异性的淋巴细胞的抑制明显(EAMG组,P0.01)于CFA组(P0.05);ATRA干预后,ACh R特异性CD4+T淋巴细胞的比例下降(P0.01),且ATRA促进了Th2、Treg细胞亚群百分比(P_(IL-4)0.001,P_(Foxp3)0.001),而抑制了促炎性的Th17、Th1细胞亚群百分比(P_(IL-17)0.05,P_(IFN-γ)0.001);ATRA能够降低ACh R特异性B细胞的抗体分泌能力(P0.01)。结论:ATRA不仅能抑制ACh R特异性T细胞功能,同时也能抑制ACh R特异性B细胞功能,其在MG的临床治疗中可能起治疗作用。     

抗环瓜氨酸化抗体分离及其对巨噬细胞功能影响

从类风湿性关节炎(RA)患者血清中分离抗环瓜氨酸化抗体(ACPAs),观察ACPAs对巨噬细胞功能的影响,探讨ACPAs影响RA病情发展的可能机制。利用亲和层析从RA患者血清中分离ACPAs,通过荧光定量PCR、蛋白印迹(Western blotting)及流式细胞术等实验方法观察ACPAs对巨噬细胞功能的影响。结果表明:亲和层析可很好地从血清中分离ACPA。ACPAs(40 000 IU/L)可促进巨噬细胞肿瘤坏死因子α(TNFα)、白细胞介素6(IL-6)、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)、人类白细胞DR抗原(HLA-DR)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)等炎性因子的表达。SiRNA转染实验证实:ACPAs通过促进AKT蛋白磷酸化,诱导TNFα、IL-6、iNOS的表达。     

鱼鳞胶原蛋白提取及对成纤维细胞功能的影响

通过水提法提取鱼鳞胶原蛋白,分离大鼠皮肤成纤维细胞,观察鱼鳞胶原蛋白对成纤维细胞增殖,细胞内血小板衍生因子(platelet derived growth factor,PDGF)、转化生长因子β(transforming growth factorβ,TGFβ)mRNA表达、蛋白合成及cGMP含量的影响。结果发现:鱼鳞胶原蛋白可促进成纤维细胞增殖,并呈一定的剂量依赖关系,当质量浓度达到40mg/L时,增值率可达42.75%;鱼鳞胶原蛋白能通过促进cGMP合成,明显促进成纤维细胞PDGF、TGFβmRNA表达及蛋白合成,当质量浓度为40mg/L时,PDGF、TGFβmRNA表达量分别为对照组的1.514±0.047和1.595±0.032倍。水提法提取的鱼鳞胶原蛋白具有良好的相容性,可促进成纤维细胞增殖及活化,具有潜在的临床应用价值。     

内含肽介导的蛋白连接技术及其应用

内含肽介导的蛋白质剪接是一种自发的翻译后事件,内含肽可介导其自身从前体蛋白上切除,同时将其两侧的外显肽连接起来.在过去10多年中,基于蛋白质剪接原理发展出的蛋白连接技术被广泛的用于蛋白质工程的研究中.这些技术打破了化学合成方法中对目标物大小的限制,有助于化学和生物学的研究.针对近年由蛋白质连接演化出来的新技术及其应用做简要的阐述.     

薏米黄酒的急性毒性研究

目的:研究薏米黄酒的急性毒性,评价该酒的食用安全性。方法:以ICR小鼠为受试对象,一次性给予最大剂量,观察薏米黄酒对小鼠的急性毒性反应,测定薏米黄酒的LD50和最大耐受剂量。结果:小鼠无一只死亡,无法测出LD50,最大耐受量大于20400 mg/kg。结论:实验检测表明,该黄酒无毒,为薏米黄酒的应用提供了毒理学依据。     

以技术为主线开设药学类专业微生物学综合实验

以技术为主线开设药学类专业微生物学综合实验,能够帮助药学专业的学生更好地掌握微生物最基本的操作技能,了解微生物实验的基本流程,加深对微生物知识的理解,增强学习兴趣和创新能力,培养出药学微生物生产实践、教学科研全面的人才。     

功能化自组装肽水凝胶在细胞培养中应用

自组装肽水凝胶是一类能够在特定的条件下利用疏水作用、静电作用、氢键、范德华力等非共价作用力来形成内部高度有序结构的多肽分子凝胶.自组装多肽凝胶具有易于设计合成、低免疫原性、低炎症反应、良好组织相容性、生物利用度高等特点,可为各种细胞提供近似于天然的细胞外基质,促进细胞增殖、分化、黏附等细胞生物学行为.因此,自组装肽水凝...     

Nogo-B与Clusterin结合对细胞凋亡的影响

神经轴突生长抑制因子Nogo—B在体分布广泛,提示其除了具有抑制中枢神经系统轴突再生作用外,可能还扮演其他重要的功能角色。该研究为探讨Nogo-B下游新的结合分子及其功能开展相应研究。通过设计诱饵蛋白筛选人脑cDNA文库、免疫共沉淀方法,寻找Nogo-B下游结合分子：通过流式细胞术,检测结合对于细胞凋亡的影响：通过绿色荧光蛋白标记和免疫组织化学方法,探讨Nogo-B诱导细胞凋亡的机制。结果提示,Clusterin除了与Nogo-66功能域在酵母双杂交系统中存在结合,与Nogo—B在哺乳细胞中也能发生结合。过表达Nogo-B可明显诱导HEK293细胞凋亡,与Clusterin共表达可下调早期细胞凋亡率,但后期Nogo—B可通过调节Clusterin由胞浆到胞核转位,进一步诱导细胞凋亡进程。该研究首次提出Nogo—B与Clusterin之间存在结合,且结合参与了Nogo-B诱导的细胞凋亡进程。     

EB病毒融合基因重组BCG穿梭质粒的构建及表达

分别以卡介苗(BCG)和EB病毒融合基因cDNA为模板,通过PCR扩增得到139bp的BCG-Ag85B信号肽序列和2291bp的Z2A基因序列。将BCG-Ag85B信号肽序列与大肠杆菌-卡介苗穿梭表达载体pMV261重组,得到重组质粒pMVS。再将EB病毒融合基因序列Z2A亚克隆至pMVS中,得到重组质粒pMVZ2A,电转化导入BCG。SDS-PAGE分析结果表明,构建的重组质粒pMVZ2A经双酶切、PCR扩增及测序鉴定证实,克隆基因BCG-Ag85B信号肽和Z2A正确插入载体pMV261,电转化导入BCG,能够在BCG中分泌表达。     

碎石覆盖对河流硬质护坡土壤抗侵蚀性及植物生长的影响

针对河流硬质护坡生态修复中的稳定性和水分平衡等技术难点，提出了一种碎石覆盖技术，并通过抗冲刷实验和盆栽实验分析了不同碎石覆盖对土壤抗冲刷能力、保水性能及植物生长的影响.结果表明：粒径为1.5～2 cm的碎石覆盖处理在增强土壤抗冲刷能力、提高土壤保水性能和植物生物量方面效果明显，但覆盖厚度为5 cm和8 cm的碎石覆盖处理在抗冲刷、保水和促进植物生长方面的作用均无明显差异.厚5 cm、粒径为1.5～2 cm的碎石覆盖技术是硬质护坡生态修复中一种经济有效的技术方法.