枯草芽孢杆菌渗透压调节基因proB的克隆和表达

用PCR扩增的方法从耐盐的枯草杆菌中克隆出一个13kb长的DNA片段,经功能检测,证明正向插入片段与大肠杆菌的脯氨酸营养缺陷特性(proB-)能够营养互补。含有该重组质粒的大肠杆菌DH5α在基本培养基上的耐盐能力从2%提高至4%。通过引物步行法测定了该插入片段的核苷酸序列。利用DNAsis软件进行序列分析发现,该片段第122～1235bp核苷酸编码一个由370个氨基酸组成的蛋白质分子,其上游存在非典型的-10区,典型的-35区和核糖体结合位点,起始密码子处有最佳翻译起始效率的侧翼核苷酸序列。将其与Genebank中的已知基因的序列和编码的氨基酸序列进行同源性比较,结果表明该片段与枯草杆菌168的核苷酸序列、氨基酸序列的同源性分别为81%和90%。证明该基因确实是一个proB基因。通过与三十个不同种属微芽生物proB基因的氨基酸序列比较,发现该蛋白存在有可能与形成酶的活性中心和三维结构有密切关系的几个绝对保守的区域。     

渗透压调节基因proBA的融合表达对大肠杆菌耐高渗胁迫能力的影响

枯草芽孢杆菌 9315 1的渗透压调节基因proB和proA以重叠基因的方式组织 ,但是表达两个单独的蛋白质ProB和ProA。通过引物设计 ,在抗脯氨酸反馈抑制耐盐突变菌株 9315 1 14的proBA基因重叠区引入一个限制性酶切位点 ,分别扩增出proB和proA基因 ,并构建融合的proBA基因。SDS PAGE分析显示有一条新的分子质量约为85kD的蛋白带出现。相对于表达未融合的proB和proA ,proBA融合基因的表达明显提高了宿主菌大肠杆菌JM83胞内游离脯氨酸含量和其耐高渗胁迫能力     

细菌视紫红质 E204Q 和 I119T/T121S/A126T突变体的构建及其功能研究

应用定点突变的方法获得了细菌视紫红质 (bacteriorhodopsin , BR) 的单突变体 BR_E204Q和三突变体 BR_{I119T/T121S/A126T}. 通过功能研究发现, BR 蛋白的单突变体 BR_E204Q的 M 态寿命为 7.10 ms ,三突变体 BR_{I119T/T121S/A126T}的 M 态寿命为 8.23 ms ,均较野生型 BR 蛋白 (6.23ms) 有所延长,三突变体表现得更为显著,其 M 态延长时间可超出野生型的 32％. 同时单突变体 BR_E204Q和三突变体 BR_{I119T/T121S/A126T}的质子泵功能也均有改变,都比野生型 BR 蛋白有所下降,其中三突变体 BR_{I119T/T121S/A126T}下降得更为明显.     

糖基转移酶和去糖基化酶

在糖基化工程中,通过酶法对蛋白质进行糖基化修饰和对天然糖蛋白去糖基化是研究糖蛋白结构与功能的重要手段。本文综述了近年来所纯化的主要的糖基化转移酶和去糖基化酶的性质和应用。     

生物技术专业建设的实践与探索

生物技术是一门涉及领域宽、涵盖范围广、基础性强的新兴生物学科,是现代生物学发展并与相关学科交叉融合的产物。生物技术包括基因工程、蛋白质工程、细胞工程、发酵工程等领域,其核心是以DNA重组技术为中心的基因工程。生物技术产业是世界各国在21世纪优先发展的支柱产业,它对不断提高人类的生活质量,与严     

枯草芽孢杆菌抗脯氨酸结构类似物突变株的筛选及突变株proBA基因的克隆和序列分析

利用亚硝基胍对枯草芽孢杆菌93151进行诱变处理,获得了耐NaCl浓度达14％的突变株,同时发现该突变株也是一个抗脯氨酸反馈抑制突变菌株,其胞内自由脯氨酸的含量随着盐浓度的提高显著增加,说明其对渗透压的耐受能力与胞内自由脯氨酸的含量紧密相关。利用PCR方法克隆突变株的proBA基因,得到一个约2.3kb的DNA片段,序列分析表明该片段含有一完整的proB基因和部分proA基因,与野生菌株的proB基因相比,突变株proB基因中有3个碱基发生了改变,其中一个碱基的变化（从起始密码子开始第781位由T→A）导致了一个氨基酸发生改变（Ser→Thr),另外两个碱基变化为沉默位点突变。将该proB基因转入大肠杆菌脯氨酸营养缺陷型菌株,能够与其功能互补。同时对部分proA基因序列分析发现,其与proB基因头尾重叠。在proA基因起始密码子上游第14个碱基处有一个类似于SD的序列,其所编码的氨基酸序列与枯草芽孢杆菌168的同源性为77％。     

DR-70~(TM)和CA50肺癌免疫测定的应用价值

目的 :评价DR 70 TM和CA5 0两种肿瘤标志物在肺癌检测中的价值。方法 :应用DR 70 TMELISA和CA5 0IRMA对77例肺癌患者 ,42例健康者及 48例其它肺癌者进行对照检测。结果 :各组DR 70 TMCA5 0测定值比例显示肺癌组平均值显著其它两组 (P <0 .0 1)。DR 70 TM检测的敏感性和有效性高于CA5 0检测 (83.1%比 6 6 .2 % ,85 .7%比 75 .6 % )。两项联合检测的敏感性 ,有效性分别为 96 .1% ,93.1% ,优于单项DR 70 TM 检测的 83.1% ,85 .7% ,及CA5 0的 6 6 .2 9%、75 .6 %。结论 :DR 70 TM在肺癌检测中有较大应用价值。DR 70 TM 和CA5 0两项联合检测是较理想的肺癌检测组合     

嗜碱细菌NTT36嗜碱基因的亚克隆及其在大肠杆菌和农杆菌中的 …

将大肠杆菌ＨＢ１０１嗜碱转化子中质粒ｐＧＣＡ所携带的嗜碱基因亚克隆至双元载体ｐＢＩ１２１质粒中,构建了植物表达载体ｐＬＧＣ重组质粒。用其转化大肠杆菌ＨＢ１０１获得了能在碱性和卡那霉素抗性平板上生长的转化子,再通过三亲交配法将亚克隆质粒ｐＬＧＣ转化进农杆菌ＬＢＡ４４０４,又获得能在碱性平板和卡那霉素及利福平双抗平板上生长的转化子,Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交结果表明ＨＢ１０１转化子亚克隆质粒ｐＬＧＣ是由来自     

嗜碱芽孢杆菌NTT33产碱性β-甘露聚糖酶发酵条件的研究及高产菌株选育

研究了嗜碱芽孢杆菌（ａｌｋａｌｏｐｈｉｌｉｃＢａｃｌｕｓｓｐ．）ＮＴＴ３３发酵产生胞外碱性β－甘露聚糖酶的条件,其最佳碳源为１％槐豆角,最佳氮源为１％蛋白胨＋０．２％酵母膏,发酵培养３６ｈ产酶量最高（达６１．３υ／ｍＬ）。甘油,葡萄糖,甘露糖等对产酶有强的阻遏作用。该菌株经紫外诱变处理后,采用透明圈法初步筛选出在含葡萄糖和不含葡萄糖的槐豆胶培养基上同时产生透明圈的菌株,进一步测定其产酶进程曲线,最后筛选到一株（ＮＴＴ３３－ｒ６）部分消除葡萄糖代谢阻遏高产β－甘露聚糖酶的菌株,其酶活力比出发菌株提高５０％,,达到９６．３Ｕ／ｍｌ;。