排序方式: 共有15条查询结果,搜索用时 15 毫秒
1.
小分子肽的Tricine-SDS-PAGE分离方法 总被引:15,自引:0,他引:15
在蛋白质的生化分析和基因表达产物的分离纯化中 ,经常要把某种或某些蛋白质成分分离开来。聚丙烯酰胺凝胶电泳 ( SDS- PAGE)是分离蛋白质的常用生化方法 ,样品的蛋白质分子热变性解聚后与 SDS结合形成带负电的蛋白质 - SDS复合物 ,复合物在电泳中的迁移率取决于蛋白质的分子大小 ,使用均匀浓度的 SDS-PAGE来分析分子量在 15~ 2 0 0 k D的蛋白质时 ,电泳迁移率与分子量的对数成线性关系。但常规定 Tris-甘氨酸 -盐酸系统中电泳分离分子量小于 10 k D的多肽效果差。作者在分离小分子肽的实验中改进了一套较简便的分离小分子肽的 T… 相似文献
2.
尿素改善SDS-PAGE分离小分子肽的效果 总被引:10,自引:1,他引:9
目的:探讨尿素对Tricine—SDS—PAGE系统分离小分子蛋白的影响。方法:利用常规SDS-PAGE和Tricine-SDS-PAGE分离小分子肽,比较不同组成的分离胶的分离效果。结果:调整聚丙烯酰胺凝胶的分子组成,使丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺的交联度为5.05%,能够改善小分子肽的分离效果。加入36%的尿素比加入甘油可以更有效分离1kD的小肽。但尿素胶聚合太快影响分离效果。结论:尿素改善SDS—PAGE分离小分子肽的效果,制作尿素胶时,宜采用低浓度的AP和TEMED使凝胶慢速聚合。 相似文献
3.
透明带的精子受体在ZP3的O—糖链上 总被引:1,自引:0,他引:1
哺乳动物的受精过程主要包括几个步骤 ,精子与卵子相遇后 ,精子结合到卵透明带上 ,引起精子的顶体反应 ,随后精子穿透透明带与卵细胞融合受精。精卵结合具有种属特异性 ,这种特异性结合是由精子表面的特异蛋白和卵透明带糖蛋白通过受体配体模式进行的。但是 ,卵透明带上的什么物质与精子识别和结合呢 ?近 30年来 ,这一领域的研究很活跃 ,也取得了很大的进展。1 .小鼠透明带糖蛋白ZP3作为精子受体透明带是卵细胞膜外的一层特殊的非细胞结构 ,是精子与卵细胞识别和结合的部位。小鼠和其它研究过的哺乳类的透明带都是由少数几种糖蛋白组成 ,… 相似文献
4.
有效分离1kDa小肽的Tricine-SDS-PAGE方法 总被引:35,自引:0,他引:35
曹佐武 《中国生物工程杂志》2004,24(1):74-76
为了建立能有效分离 1kDa的特小分子肽的Tricine SDS PAGE方法 ,调整分离胶中聚丙烯酰胺凝胶的分子组成 ,使致密胶中丙烯酰胺和双丙烯酰胺的交联度为 5 %,并加入 36 5 %的尿素 ,用于分离小至 1kDa的小分子肽 ,并与常规的SDS PAGE和先前报道的Tricine SDS PAGE相比较。结果改进的致密胶可以有效分离分子量小至 1kDa的小肽 ,明显优于常规的SDS PAGE和现有的Tricine SDS PAGE方法。 相似文献
5.
8型AAV重组病毒载体是新型的基因转移载体,能高效转染肌肉细胞和肝细胞.AAV转染细胞的效果与注射病毒的途径有很大关系.与门脉注射和肌肉注射相比,经腹腔注射的rAAV8病毒能经血液循环转运到全身其他组织器官,形成更加广泛和持久的基因转导.通过腹腔途径把5×1010gc的8型重组病毒载体注射到小鼠体内,2周后,小鼠血浆中有明显的基因表达,1个月至2个月期间多数小鼠表达量达到高峰,然后表达水平下降,直到4个月后血浆中尚维持明显的表达量.凝血实验显示,表达的人凝血因子Ⅸ具有生物活性.免疫组化实验显示,病毒载体已进入体内多组织器官中表达.说明8型AAV病毒载体经腹腔注射后已经血液循环运送到其他组织,并在肌肉、肝脏、肾脏和心脏等器官明显表达,表达产物具有凝血活性. 相似文献
6.
本实验比较了不同卵龄的小鼠卵母细胞受酒精人工刺激后的激活率和体外受精率,以探讨卵母细胞激活和受精的机制。向NIH雌鼠腹腔注射孕马血清促性腺激素(PMSG)7.5单位,48小时后注射人绒毛膜促性激素(HCG)7.5单位,于不同时间杀小鼠,取卵母细胞与卵丘细胞的复合体(OCC)。从注射HCG后到取OCC的时间视为卵母细胞的卵龄。将OCC置于含8%酒精的M2中7分钟,再在M16中培养5小时后,用0.3mg/mL的透明质酸酶去卵丘细胞。卵母细胞形成原核或速即卵裂为激活的标志。将OCC加入已获能的精子悬液中,5小时后将从卵丘细胞中释放出来的卵母细胞转移到M16中,次日发生卵裂为卵母细胞体外受精和激活的标志。小鼠卵母细胞卵龄为20h,其激活率为81.6%,速即卵裂率为48.0%;而卵龄进一步增加到24h,激活率和卵裂率转为下降(Table1)。而卵母细胞受精子激活和受精则不同,卵龄为15h,卵母细胞的体外受精率为45.4%;随着卵龄的进一步增加,体外受精率则下降(Table2)。Fig.1显示:新排出的卵母细胞容易被精子激活而受精;卵龄较大的卵母细胞较易被酒精的人工刺激而激活。可能是卵母细胞从成熟到老化过程中,细胞的结 相似文献
7.
8.
9.
曹佐武 《发育与生殖生物学报》2002,11(3):167-173
为研究乙醇激活对小鼠卵透明带的修饰,用SDS-PAGE和HPLC分析未受精卵和乙醇激活卵的透明带糖蛋白。SDS-PAGE结果显示,未受精卵和乙醇激活卵的透明带糖蛋白成分的电泳带型相似。只是在还原电泳时,乙醇激活卵透明带样品中分离出一条约20kD的特异条带。未受精卵和乙醇激活卵的ZP3成分没有明显差异。HPLC结果显示:乙醇激活卵透明带有3个O-连单糖的洗脱峰,与未受精卵透明带的3个O-连单糖洗脱峰很相似;但是,乙醇激活卵透明带有另外两个O-连寡糖洗脱峰,RT值分别为12.09和8.89,未受精卵样品只有一个RT值为9.14的洗脱峰,他们代表一些O-连寡糖或寡糖混合物。可见,乙醇激活对ZP3多肽链和O-连单糖没有明显的影响。主要的修饰作用在O-连寡糖上。 相似文献
10.
本实验比较了不同卵龄的小鼠卵母细胞受酒精人工刺激后的激活率和体外受精率,以探索卵母细胞激活和受精的机制。向NIH雌鼠腹腔注射孕马血清促性腺激素(PMSG)7.5单位,48小时后注射人绒毛膜促性激素(HCG)7.5单位,于不同时间杀小鼠,取卵母细胞与卵丘细胞的复合体(OCC)。从注射HCG后到取OCC的时间视为卵母细胞的卵龄。将OCC置于含8%酒精的M2中7分钟,再在16中培养5小时后,用0.3mg/mL的透明质酸酶去卵丘细胞。卵母细胞形成原核或速即卵裂为激活的标志,将OCC加入已获能的精子悬液中,5小时后将从卵丘细胞中释放出来的卵母细胞转移到M16中,将日发生卵裂为卵母细胞体外受精和激活的标志。小鼠卵母细胞卵龄为20h,其激活率为81.6%,速即卵裂率为48.0%;而卵龄进一步增加到24h,激活率和卵裂率转为下降(Table1)。而卵母细胞受精子激活和受精则不同,卵龄为15h ,卵母细胞的体外受精率为45.4%;随着卵龄的进一步增加,体外受精率则下降(Table2)。Fig.1显示:新排出的卵母细胞容易被精子激活而受精;卵龄较大的卵母细胞较易被酒精的人工刺激而激活。可能是卵母细胞从成熟到老化过程中,细胞的结构、功能及对外界刺激的敏感状态都在发生一些规律性的变化,而激活和受精的机制不完全,还不能精对卵龄的要求要严格。 相似文献