替代宿主增殖松毛虫质型多角体病毒的比较研究

银纹夜蛾幼虫 (Argyrogrammaagnata)对松毛虫CPV(DpCPV)十分敏感 ,本文对两种不同的宿主增殖松毛虫CPV作了比较 ,电镜证实用替代宿主增殖的DpCPV与原毒株多角体 (CPB)和病毒粒子的形态完全一致。 3 %PAGE分析二者的RNA图谱基本一致 ,有大小相同的 2 .98× 10 6- 0 .6 6× 10 6道尔顿的 10条带 ,用它增殖的DpCPV(Aa DpCPV)对松毛虫有相当的毒力 ,每头 3龄幼虫病毒产量平均为 2 .5× 10 8CPB。     

HCV NS5A基因表达及其在血清学检测中的应用评估

Full-length NS5A gene of the hepatitis C virus was amplified by PCR using plasmid pBAC25 containing HCV nonstructural gene as template. The amplified fragment (about 1.34 kb) was cloned into plasmid pQE32, and the recombinant plasmid pQENS5A was expressed in JM109 strain. The NS5A protein was purified by NiSO4 metal chelating resin, and characterized by Western-blot. Its antigenecity was determined by ELISA. The positive detection rate of anti-NS5A was 75% (69/92) in ninety-two clinic sera. The positive rate of anti-NS5A was 82.5% (33/40) in fourty positive standand sera, and the negative rate of anti-NS5A was 100% (40/40) in fourty negative standand sera. The results showed that the Full-length NS5A proteinn had the higher sensitivity and specificity in the detection of HCV antibody in sera, we suggested that NS5A protein was a useful antigen for blood screening.     

人巨细胞病毒立即早期基因功能的研究进展

人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）是一种重要的病毒,属于疱疹病毒科,在普通人群中的感染率为８０％以上,对于某些特殊地区和人群,其感染率可高达１００％。人群感染ＨＣＭＶ后,通常呈隐性感染,但对于孕妇和免疫能力低下者（如器官移植病人、艾滋病患者）,该病毒易导致严重...     

HCV全长NS3基因表达及在抗体检测中的应用

丙型肝炎病毒(HCV)是引起非甲非乙型肝炎的主要病原因子.被HCV感染的病例中,超过50%以上会引起持续性感染、慢性肝炎,最终可能引起肝硬化和肝细胞癌[1].HCV严重威胁人类健康,但目前对丙肝患者尚缺乏有效的治疗手段,因此,严格把好血源关,提高对丙肝患者检出的灵敏度,是阻止丙肝血源传播的有效手段.     

荧光定量PCR技术检测样品中SeMNPV有效含量

采用NCBI提供的BLAST软件在线检索SeMNPV特异性基因ORF22、ORF40,并将其构建到pMD18-T载体上.以纯化的pMD18-T-ORF22、pMD18-T-ORF40质粒为标准样品,已计数野生型SeMNPV的基因组作对照,用荧光定量PCR检测样品中SeMNPV多角体含量.荧光定量PCR检测得到标准曲线方程为con=10(-0.282CT+9.965) (相关系数R2=0.9997)和con=10(-0.296CT+9.945) (相关系数R2＝0.9995).测得一个SeMNPV多角体包含102核酸分子,检测到SeMNPV复合剂包含 633 PIBs/mg、691 PIBs/mg SeMNPV多角体,两者结果一致.与复合剂中SeMNPV实际含量相符.     

对虾白斑综合症病毒囊膜蛋白VP28的表达及其抗病毒感染作用

根据GenBank上WSSV囊膜蛋白基因vp28的序列,设计并合成引物,PCR扩增得到vp28基因,成功构建重组表达载体pET22b-vp28并转化大肠杆菌BL21(DE3).基因工程菌株37℃IPTG诱导,表达产物经Western-blot和SDS-PAGE检测显示有与预期大小32kDa相符合的目的蛋白.用Ni2+-柱纯化的目的蛋白分别直接注射螯虾和包被饲料投喂螯虾,实验结果表明vp28在大肠杆菌中的表达产物有显著提高虾体抗WSSV感染力的作用,而且注射效果更好.     

家蚕抗菌肽CD高效表达及其抗BmNPV感染作用

通过大肠杆菌JM109诱导家蚕,提取其脂肪体总mRNA后,通过RT-PCR 得到 cDNA,根据GenBank上家蚕抗菌肽 Cecropin D 的cDNA序列,设计并合成引物,然后PCR扩增得到 Cecropin D肽基因并克隆到pGEM-T载体中,经过EcoRΙ和 Xho I 酶切,连接并将Cecropin D肽基因插入pET32a表达载体中.用重组质粒pET32a- ecropin D 转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下,融合蛋白Trx-Cecropin D 以可溶形式得到高效表达,经SDS-PAGE检测显示分子量为23kDa与预期大小相符,表达量约为总蛋白的30%.融合蛋白经Ni2+ 柱纯化后通过肠激酶切割后释放为 Trx(18kDa)和 Cecropin D (5kDa),最后通过超滤管分离得到重组抗菌肽.通过抑菌实验测得重组CecropinD对于革兰氏阴性及阳性菌均有抑菌活性.并将重组Cecropin D 与家蚕病毒BmNPV作用混合4h后,一起投喂家蚕,发现病毒感染力有明显降低,说明其有抗病毒感染作用.     

Harpin的表达及其诱导抗烟草花叶病毒感染的活性

采用人工分段合成梨火疫病细菌(Erwinia amylovora)Harpin基因A、B、C、D片段,然后连接构建全长harpin基因,克隆到pET-23(+)表达载体中,在E.coli BL21中表达Harpin蛋白.通过His@Bind Resin Ni++ 层析柱纯化,获得Harpin蛋白.经SDS-PAGE和Western blot分析,该蛋白分子量为45 kDa.采用叶片穿刺法,5μL 30μg/mL Harpin能诱发烟草叶片的过敏反应.采用叶脉注射法,5μL 30μg/mL Harpin能诱发辣椒叶片的过敏反应.将烟草和辣椒用30μg/mL Harpin喷雾处理5d后,接种烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus, TMV),观察植株病症,并采用ELISA检测TMV含量.结果表明经Harpin处理的烟草和辣椒对TMV侵染有一定的抑制作用.     

丙型肝炎病毒E2基因DNA 免疫实验动物研究

将编码丙型肝炎病毒(HCV)E2蛋白417～750位氨基酸的DNA片段克隆到真核表达载体pcDNA 3.1(-)中的CMVIE启动子下游,构建成HCV E2重组真核表达质粒pcE2.ELISA法检测pcE2 DNA免疫兔血清中的E2抗体变化和维持规律,结果显示免疫20d已有抗体产生,30d后开始进入高峰,40d时达到最高值,至第90d抗体水平保持平稳,抗体滴度达到11600左右.流式细胞计数仪(FACS)检测pcE2 DNA免疫鼠CD4+、CD8+T淋巴细胞变化情况,与注射空载体pCDNA3.1(-)的阴性鼠相比,CD4+淋巴细胞水平略有上升,CD8+细胞水平有较大升高,增幅达35.46%.免疫组化检测结果显示注射pcE2的小鼠组织中有明显的阳性着色,而注射pcDNA3.1(-)的对照组小鼠免疫组化结果为阴性.以上结果表明pcE2在实验动物内表达出的HCV E2蛋白可以引起免疫动物的体液免疫应答和细胞免疫应答,尤其是MHC-1限制性杀伤性CD8+T淋巴细胞水平的提高对清除病毒是十分有利的,因此HCV E2 DNA免疫有可能成为预防和治疗HCV感染的一条新途径.