重组突变巴曲酶酶动力学及活性分析研究

目的对重组突变巴曲酶进行酶动力学初步研究,并建立一种蛇毒类凝血酶活性测定方法。方法使用可控温(37℃)紫外分光光度计,采用酶动力学测定法,测定重组突变巴曲酶的米氏常数,优化活性测定方法的反应时间和线性范围,验证此方法精密度,并用发色底物法与血浆凝集法同时测定不同蛇种来源的类凝血酶活性。结果重组突变巴曲酶的米氏常数(37℃)Km值为256.28μmol/L、Vm值为0.005 077μmol/min。该法呈现相应的剂量关系曲线,反应时间优选为0～20 min,线性范围优选为1～16.8 nmol/L,拟合度R~2≥0.99,方法精密度的变异系数≤5.0%。两种不同方法测定不同蛇种来源类凝血酶的活性单位比例范围为3.3～3.7(发色底物法/血浆凝集法),比例关系一致。结论建立的蛇毒类凝血酶活性测定方法拟合度优,精密度高,可测定不同来源的类凝血酶活性,并可替代传统血浆凝集活性测定法。     

啤酒酵母多糖的提纯、化学组成及抗氧化性质鉴定

以啤酒酵母为材料,通过化学抽提法得到水溶性提取物Mal;经薄层层析分析表明：Mal主要含有甘露糖;经检测分析,Mal含有蛋白成分,为蛋白多糖;氨基酸自动分析仪分析表明Mal含有多种氨基酸,包括7种必需氨基酸和9种非必需氨基酸;邻苯三酚自氧化法检测发现多糖能够抑制邻苯三酚自氧化,具有抗氧化能力。     

毕赤酵母表达Q8008发酵条件的优化研究

目的对表达巴斯德毕赤酵母的发酵条件进行优化,确定最佳的发酵控制条件,以获得重组textilinin-1(Q8008)最高表达量。方法通过多因素正交实验确定Q8008发酵培养的最适发酵条件。结果表达温度在22℃,pH值为7.0,加入甲醇量为5g/L时为最优发酵条件,诱导表达时间为84~108h。结论优化巴斯德毕赤酵母的发酵条件,可提高Q8008表达量,为开发抗纤溶酶止血药应用于临床具有重要意义。     

长白蝮蛇类凝血酶基因的克隆及分析

从长白蝮蛇（Agkistrodon halys Ussuriensis)毒腺中抽提总RNA,采用RT－PCR扩增其类凝血酶基因,经全序列测定,类凝血酶基因Ussurin全长为708个核苷酸,即编码236个氨基酸;根据同源性,推测它的活性中心为His^43,Asp^88和Ser^182;二硫键为Cys^7-Cys^141,Cys^28-Cys^44,Cys^76-Cys^234,Cys^120-Cys^188,Cys^152-Cys^167和Cys^178-Cys^203。该蛇毒类凝血酶cDNA序列及推导的氨基酸序列均为首次报道。     

土壤水分含量的理论分析及预测模型

本文应用物理学中的电介质和电磁理论,分析和研究土壤的组成成分,得到了反映土壤水分含量的理论表达式,并在自行研制的测试仪器上,对相关变量进行测量,由此建立了土壤水分含量的预测模型,统计检验和国代结果显示了理论模型和预测模型的合理性．     

设计形成特定构象单元的多肽

肽分子设计的命题,基本思想是以特定的构象单元与功能的关系为指导,设计具有特定功能的多肽,它不仅可以用于进一步揭示天然蛋白质的结构原则及卷曲机制,而且可以指导药物合成及工业产品的设计。本文旨在介绍一些设计形成特定构象单元的多肽的进展,并从中归纳出一些设计原则。     

太空环境改变生物工程细胞CHO(dhfr-

目的 :了解太空诱变对生物工程细胞CHO(dhfr^----     

墨天牛属昆虫COⅠ基因比较及系统学初步研究

【目的】对11种墨天牛线粒体DNA细胞色素氧化酶C亚基Ⅰ基因(COⅠ)进行比较并对墨天牛属系统发育关系进行初步探讨。【方法】本文测定分析了11种墨天牛线粒体DNA细胞色素氧化酶C亚基Ⅰ基因(COⅠ),并采用简约法和贝叶斯推论法构建了墨天牛属的分子进化树。【结果】序列比对分析得到470 bp大小的COⅠ基因片段,其中可变异位点169个(36.0%),保守位点301个(64.0%),转换/颠换的平均值(R值)为1.03,说明此段序列适合于分子进化树。利用不同系统发育重建方法得到的进化树具有相似的拓扑结构,同时结合形态学分类特征对墨天牛属昆虫的分子系统进化关系进行探讨。结果显示分子结果与形态分类结果相似。【结论】利用COⅠ基因构建的墨天牛属系统发育树是探讨墨天牛分类的有效方法。     

蚯蚓提取物对小鼠肿瘤动物模型的研究

目的 :研究蚯蚓提取物 (EFE)的免疫活性及抗肿瘤作用。方法 :采用小鼠移植性肿瘤S1 80 肉瘤及Heps肝癌的动物模型观察其肿瘤抑制作用。结果 :EFE对S1 80 肉瘤和Heps肝癌细胞的抑制率分别为 36 97%和 4 8 55% ;结论 :它对小鼠实体瘤细胞有明显的抑制作用 (P <0 0 1 )并提示对小鼠的细胞和体液免疫功能有显著增强作用。     

巴曲酶在毕赤酵母中的高效表达

目的研究巴曲酶在毕赤酵母菌中的表达。方法按Pichiapastoris偏好密码子人工合成巴曲酶全基因,克隆到酵母分泌型表达载体pPICZaA中,将重组载体酶切线性化后经电转化转入X-33。筛选鉴定转化子．经摇瓶发酵甲醇诱导,酵母菌分泌表达有凝血活性的巴曲酶。经SDS-PAGE电泳确定其分子量为33．0 kDa．免疫印迹证明重组巴曲酶具有天然巴曲酶的免疫活性。结果经发酵条件的优化．发酵罐的表达量达到25000Ku／L发酵液。从每升发酵液中可纯化出11．0mg重组巴曲酶。结论巴曲酶毕氏酵母菌成功的构建．为重组巴曲酶止血药的开发奠定了基础。