发根农杆菌介导几丁质酶基因和β-1,3-葡聚糖酶基因转化烟草的研究

用冻融法和三亲交配法将具有几丁质酶基因、β—1,3—葡聚糖酶基因和卡那霉素抗性标记基因的质牲pBLGC导入具有Ri质粒的发根农杆菌中。用叶盘法转化烟草的三个品种,经Kan抗性筛选获得126株再生植株,对119株再生植株分别以启动子CaMV35S、几丁质酶基因和β—1,3—葡聚糖酶基因的引物进行PCR检测,其中几丁质酶基因至阳性的植株有72株,β—1,3—葡聚糖酶基因至阳性的有47株,具有几丁质酶基因和β—1,3—葡聚糖酶基因的植株有36株。对转化的24株转基因经PCR-Southern杂交,结果均至阳性。实验结果表明,外源基因的转化频率与植物品种、外源基因片段的大小有关,几丁质酶基因和β—1,3—葡聚糖酶基因分别或共同整合到植物基因组中。     

复叶槭顶芽组织培养再生体系的建立

初步建立了复叶槭顶芽组培再生体系。N-苯基-N'-1,2,3-噻二唑-5-脲(TDZ)可诱导复叶槭顶芽分化。复叶槭顶芽的最佳增殖培养基为MS 0.1mg·L-16-BA 0.01mg·L-1NAA,最佳分化培养基为MS 0.01mg·L-1TDZ,最佳生根培养基为MS 0.1mg·L-1NAA。