一种含不同流感病毒血凝素抗原表位的核酸疫苗

流感病毒表面抗原血凝素( hemagglutinin,HA)是流感核酸疫苗重要的靶抗原,针对HA的保护性中和抗体主要由HA上的五个抗原表位诱导产生.在本文中,我们构建了一种以新甲型H1N1流感病毒HA1为骨架的含2个A/PR/8( H1N1)流感病毒HA抗原表位和3个新甲型H1N1流感病毒HA抗原表位的核酸疫苗,并在B...     

抗H9亚型流感病毒HA抗血清对小鼠的被动免疫预防和治疗研究

H9亚型流感病毒是引起大流感的潜在威胁.抗血清被动免疫是一种有效的应对流感的方法.采用H9N2禽流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)DNA重组质粒免疫BALB/c小鼠制备抗血清.在致死量同源病毒感染前或后通过尾静脉给小鼠注射不同剂量抗血清,观察小鼠14d内的体重丢失率和死亡率.结果显示,1280血凝抑制单位(hemagglutination Inhibition unit,HIU)抗血清可给小鼠提供至少长达11d的100%预防和1d的80%治疗保护.HA DNA疫苗免疫制备的抗血清可以有效地抵抗同源H9病毒的致死攻击,在H9病毒感染的预防和治疗中发挥作用.     

H9N2禽流感病毒M2 DNA疫苗初免-蛋白加强免疫的保护效果研究

流感病毒M2(基质蛋白2)是A型流感病毒的一个高度保守的蛋白。由于其免疫原性较弱,本研究采用M2 DNA疫苗初免-蛋白加强的策略来考察M2的免疫保护效果。制备A/Chicken/Jiangsu/07/2002(H9N2)流感病毒的M2 DNA疫苗以及经大肠杆菌表达的去除M2跨膜区的M2蛋白即sM2。以SPF级BALB/c小鼠为模型,电击法免疫M2 DNA疫苗,滴鼻法免疫sM2蛋白,免疫间隔三周,并于末次免疫后三周以致死量5LD50流感病毒H9N2攻击小鼠,通过检测小鼠存活率、体重丢失率、肺部病毒滴度及IgG抗体水平等指标来评价免疫的保护效果。实验结果表明,基于M2的疫苗采用DNA疫苗初免蛋白加强免疫二次的免疫程序能诱导较高的特异性抗体,明显减轻小鼠流感病症,提供完全的保护。     

IL-12对巨细胞病毒DNA疫苗免疫增强作用的研究

白介素12(interleukin 12,IL-12)主要和细胞免疫应答有关,是免疫过程中重要的调节因子。本研究探讨IL-12对编码巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)即刻早期基因IE1的DNA疫苗的免疫增强作用。将CMVIE1质粒DNA单独或与编码IL-12的质粒DNA共同免疫小鼠,然后用致死量病毒攻击小鼠。通过检测小鼠体内诱导的细胞免疫应答、小鼠的存活率、体重丢失率、器官中的病毒滴度等来评价IL-12对疫苗免疫的佐剂效果。结果显示,与单独疫苗免疫组相比,IE1 DNA联合IL-12 DNA免疫组能够在小鼠体内诱导更高的细胞免疫应答水平,同时能够降低器官中的病毒滴度,显著提高保护率,从而更好地抵抗病毒攻击。实验证明,IL-12能够作为巨细胞病毒IE1 DNA疫苗的佐剂,提高免疫保护效果。     

人参多糖对新甲型H1N1流感病毒灭活疫苗的免疫增强作用

在流感灭活疫苗中添加佐剂可以提高疫苗的免疫原性,节约抗原用量。一些天然中草药多糖具有潜在的佐剂效应。本文探讨了人参多糖（ginseng polysaccharide,GPS）在新甲型H1N1流感病毒裂解型灭活疫苗中的佐剂效应。将不同剂量GPS与新甲型H1N1流感病毒灭活疫苗混合,共同免疫小鼠一次,通过检测免疫后在小鼠体内诱导产生的疫苗特异性IgM、IgG、IgG1和IgG2a抗体情况来评价GPS作为流感病毒灭活疫苗佐剂的免疫增强效果,并与不添加佐剂的疫苗和加有铝佐剂的疫苗的免疫效果作比较。结果显示,GPS与铝佐剂一样能显著提高和维持疫苗特异性IgG抗体滴度,同时提高IgM抗体水平,其中800μgGPS的佐剂效果最好。因此我们认为GPS可以作为流感病毒灭活疫苗的一种候选佐剂。     

鼠巨细胞病毒 IE-1核酸疫苗和灭活疫苗联合免疫抗病毒感染的研究

巨细胞病毒（Cytomegalovirus,CMV）在人群中感染普遍,对婴幼儿及免疫低下人群中造成严重疾病,目前还没有针对该病毒的商品化疫苗。本研究以BALB/c小鼠为动物模型,探讨鼠巨细胞病毒（Murine cytomega-lovirus,MCMV）IE-1 DNA疫苗和MCMV灭活疫苗联合免疫抗MCMV感染的免疫保护效果。将编码IE-1基因的DNA疫苗（pIE-1）通过肌肉注射辅以电穿孔的方式对小鼠进行初免,再用全病毒灭活疫苗单独或者辅以MF59佐剂进行加强免疫,分别通过ELISA和ELISPOT方法检测到联合免疫策略在免疫组小鼠体内诱导了MC-MV特异性的抗体应答和CTL应答;免疫两周后用3＆#215;LD50致死剂量MCMV感染小鼠,疫苗对小鼠的免疫保护通过检测小鼠存活率、重要器官中的病毒滴度及体重丢失率来评价。结果显示,与单独免疫DNA疫苗或灭活疫苗相比,IE-1 DNA疫苗联合灭活疫苗组能同时在小鼠体内诱导体液免疫和细胞免疫应答,并提供小鼠完全保护;而且MF59辅以灭活疫苗免疫小鼠能增强疫苗的免疫效果。     

一次接种HA DNA保护小鼠抵抗B型流感病毒攻击

为详细探讨小鼠不同次数接种B型流感病毒HA DNA疫苗后免疫应答情况,以及CpG基序的免疫佐剂效果,采用不同剂量HA DNA,1次或2次(间隔3周)电击法免疫BALB/C小鼠。初免4周后(或二免加强免疫1周后)用致死量流感病毒(B/Ibaraki/2/85)攻击。研究发现:①100μg HA DNA一次接种的小鼠全部存活;②经含有CpG基序的DNA免疫的小鼠体内诱导产生的抗HAIgG抗体更高,小鼠体重丢失更少。这些结果说明,1次接种100μg HA DNA疫苗可以使小鼠抵抗致死量B型流感病毒攻击,CpG基序能够增强HA DNA疫苗的免疫保护作用。     

流感病毒NP表位序列增强H7N9 HA DNA疫苗免疫效果研究

为增强H7N9流感病毒HA DNA疫苗的免疫效果,本文构建了含有流感病毒NP的5个重复优势T表位或B表位(包括B_1线性表位和B_2构象表位)的表达质粒(简称NPT和NPB),以小鼠为动物模型,将NPT和NPB分别与H7N9流感病毒HA DNA混合免疫BALB/c小鼠1次,21 d后用致死剂量(20 LD_(50))的H7N9流感病毒攻击小鼠。通过检测免疫后小鼠血清特异性抗体滴度和攻毒后的免疫保护性指标-存活率、肺部残余病毒滴度及体重丢失率,评价表位质粒与HA DNA疫苗混合免疫对小鼠的保护效果。试验结果表明:用致死性H7N9流感病毒攻击小鼠后,HA DNA组小鼠全部死亡,HA+NPT免疫组小鼠存活率达到100%,HA+NPB1和HA+NPB2免疫组,小鼠存活率分别为30%和75%;混合免疫HA+NPT后小鼠抗体滴度升高明显,攻毒后小鼠体重丢失明显降低。综上表明,含有5个NP优势T表位或B表位的表达质粒能增强H7N9流感病毒HA DNA疫苗的免疫效果,混合免疫一次可以使小鼠得到较好的保护。HA DNA和表位疫苗的混合免疫,节约了疫苗用量,降低了免疫成本,为流感病毒核酸疫苗的临床开发提供了一定的试验基础。     

基于流感病毒HA柄部和M2e融合基因的DNA疫苗

由于流感病毒容易突变,流感通用疫苗的研究势在必行.流感病毒血凝素(HA)柄部和基质蛋白2的胞外域(M2e)都是流感病毒通用疫苗的重要候选靶点.通过重叠PCR的方法用A/PR/8/34(H1N1)(简称PR8)流感病毒的M2e或者4个甘氨酸取代HA的头部,分别获得HAM2e和HA4G,然后将两种重组基因插入真核表达载体pCAGGS-P7中,制得pHAM2e和pHA4G两种DNA疫苗.通过电击免疫的方法对小鼠分别免疫pHAM2e和pHA4G,免疫3次,每次免疫间隔2周.第3次免疫2周后用5LD50的同源流感病毒感染小鼠.结果表明HAM2e组和HA4G组的小鼠均产生了特异性抗体,HAM2e组比HA4G组具有更好的抗PR8流感病毒的能力,这提示可以用M2e替换HA头部用于疫苗研发.     

流感病毒基质蛋白DNA疫苗的免疫保护作用研究

流感病毒基质蛋白(matrix protein,M)在病毒复制和毒力方面有重要作用.编码基质蛋白的M1基因和M2基因胞外域序列是A型流感病毒的保守序列,是研究具有交叉保护能力流感疫苗的候选基因.我们构建了真核表达质粒pCAGGSP7/M1和pCAGGSP7/M2,用质粒DNA免疫小鼠以观察其免疫原性.分别在M1DNA免疫2、3、4、5、6次或M2 DNA免疫4、5、6次7 d后,用致死量同源流感病毒A/PR/8攻击小鼠,通过检测小鼠血清抗体滴度、肺部病毒量和小鼠存活率来观察质粒DNA的保护效果.结果表明,随着免疫次数增加,M1 DNA免疫组在病毒攻击后小鼠存活率增高,而M2 DNA免疫组小鼠攻毒后全部死亡.说明M1 DNA多次免疫后能提供抗流感病毒的部分保护,M2 DNA没有免疫保护作用.