伤寒沙门菌与甲、乙、丙副伤寒沙门菌质控血清的制备

应用免疫学原理,将伤寒沙门菌O901、H901和甲、乙、丙型副伤寒沙门菌分别制成全菌体抗原,免疫实验兔获取免疫血清。依据伤寒沙门菌和副伤寒沙门菌的抗原成分的异同性,选择适当的吸收菌除去免疫血清中的交叉反应抗体和类属凝集素,而保留其特异性的抗体。通过对诊断菌液的验证试验,证实吸收充分的免疫血清具有质控血清的特性。具备可靠性能的质控血清,适用于伤寒沙门菌与副伤寒沙门菌的菌种检定及其效价检测;亦有利于肥达氏诊断菌液的质量控制。     

人心肌型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体的制备及定量检测试剂盒的研制

目的：利用抗心肌型脂肪酸结合蛋白单抗,研制定量检测心肌型脂肪酸结合蛋白（ H-FABP ）的ELISA试剂盒。方法使用基因重组H-FABP免疫小鼠,以杂交瘤技术制备特异性抗H-FABP单抗,用这些单抗研制定量检测H-FABP的ELISA 试剂盒。结果筛选获得2株稳定分泌抗H-FABP单抗的杂交瘤细胞株,研制了定量检测H-FABP的ELISA试剂盒,灵敏度达到0．2 ng/mL,线性范围0．4～25 ng/mL,r2＝0．9967,回收率在97．2％～104．5％,精密度的变异系数（CV）≤6．72％;应用此试剂盒检测健康人血浆H-FABP,含量为1．87～8．50 ng/mL。结论所研制的ELISA试剂盒有较好的灵敏度及特异性,可用于人血浆中H-FABP含量的检测。     

丙型副伤寒沙门菌的灭活工艺

目的优化甲醛对灭活丙型副伤寒沙门菌原液的条件,确定灭活工艺参数。方法在37℃条件下,比较不同甲醛浓度、灭活时间对丙型副伤寒沙门菌原液的灭活效果,依据无菌检查、外观以及效价测定的结果,确定丙型副伤寒沙门菌原液的灭活工艺参数,并对该工艺进行细菌灭活验证。结果不同菌株制成的丙型副伤寒沙门菌液,当稀释至一定浓度(<1 000×108cfu/m L)后,采用终体积分数为1%的甲醛溶液,经37℃灭活48 h,可达到完全灭菌的效果,同时维持了抗原的稳定性。结论经过条件优化,确定了丙型副伤寒沙门菌灭活的工艺参数,完善了关键技术。     

金霉素单克隆抗体的制备及检测方法的建立

采用羰基二咪唑法,将半抗原金霉素(AM)分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联制备金霉素免疫抗原AM-BSA和检测抗原AM-OVA,通过紫外光谱扫描检测偶联产物。采用细胞杂交瘤技术,制备抗金霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株,建立了金霉素竞争ELISA检测方法,其灵敏度达到50ng/ml,且呈现良好的线性关系(r=0.9812),并且与其他抗生素无交叉反应。     

人心脏型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒的临床评价

目的评价人心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)检测试剂盒(胶体金法)在急性心肌梗死(AMI)诊断中的价值。方法采用平行、盲法、对照的对比试验设计,比较其试验产品和对比产品对诊断AMI的敏感性、特异性、准确性。结果共测定240份临床血液标本。试验产品和对比产品的阳性符合率为100%,阴性符合率为96.15%,总符合率为97.92%。对比产品和试验产品结果不一致的5例标本以临床诊断结果为标准进行验证后,试验产品与临床诊断结果的阳性符合率为100%,总符合率为100%。采用Kappa检验考核两种产品测定结果的一致性,Kappa指数为0.958。经McNamara's test分析,两产品之间无差异,χ2=3.20,P>0.05。结论试验产品显示出较好的诊断价值,可以作为AMI早期诊断标志物,试验产品与对比产品等效。     

庆大霉素单克隆抗体的制备及试剂盒的配制

目的建立庆大霉素直接竞争酶联免疫吸附分析方法。方法应用戊二醛法制备庆大霉素完全抗原,通过杂交瘤技术筛选分泌特异性庆大霉素抗体的杂交瘤细胞株,并建立庆大霉素竞争酶联免疫吸附分析检测方法。结果获得3株能稳定分泌庆大霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株,建立了庆大霉素竞争酶联免疫吸附分析检测方法,该方法操作简单具有良好的线性、特异性和精密度;庆大霉素质量浓度在1.5625～50.0000 ng/mL范围内,呈现良好的线性,r2=0.9913,50%抑制浓度为(IC50)为7.37 ng/mL,检测限(LOD)为1.54 ng/mL,该试剂盒与链霉素等8种药物无交叉反应。结论获得3株能稳定分泌庆大霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株,研制的庆大霉素竞争ELISA检测试剂盒具有良好的线性、特异性和精密度。     

职业献血员中人类T淋巴细胞白血病病毒感染状况的分析

了解陕西,甘肃,青海,宁夏四省区职业献血员中人类T淋巴细胞白血病病毒（HTLV）的感染状况,以便为在职业献血员中开展HTLV普检提供一定的参考依据。采用双抗原夹心ELISA法检测了四省区10个单采浆站的7416份血浆样本。结果 HTLV（1＋2）抗体阳性7例,总阳性率0．09％,其中男性4例,感染率0．09％,女性3例,感染率0．10％;18－25年龄组2例,感染率0．09％,25－35年龄组4例,感染率0．10％,35－45年龄组1例,感染率0．08％。经过分析比较发现,HTLV感染率在职业献血员中与所报道的正常人群的感染率无显著差异,同时发现,在职业献血员中,HTLV感染的阳性率无性别差异,无年龄差异。     

血型单克隆抗体试剂规模化生产工艺的建立

为了满足规模化生产的需要 ,对血型杂交瘤细胞的接种量、培养时间、培养条件等重要步骤进行了优化比较。结果表明 ,最佳血型细胞的接种量为 2 4× 10 8个 ,过长上清的凝集效价达到 1∶12 8,重复性好。建立了切实可行的血型试剂大规模生产工艺 ,成品试剂的质量稳定可靠     

心肌型脂肪酸结合蛋白胶体金检测试纸条的制备和初步应用

目的应用胶体金免疫层析法制备检测全血或血清样本中心肌型脂肪酸结合蛋白（H-FABP）的检测试纸条,用于急性心肌梗塞（AMI）的早期辅助诊断。方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,标记鼠抗心肌型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体,喷于玻璃纤维膜上制成胶体金结合物垫,将另一株鼠抗心肌型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体和抗鼠二抗分别包被检测线和质控线,组装成试纸条进行灵敏性、特异性、精密性、稳定性及临床样品检测。结果该试纸条的检测灵敏度为10ng／mL,15min内可判定结果;与肌钙蛋白I、C反应蛋白、肌酸激酶、人心肌肌红蛋白无交叉反应。检测240份临床标本,与临床诊断结果进行配对分析,阳性符合率95．83％、阴性符合率100％、总符合率97．92％。结论制备的H-FABP检测试纸条有良好的灵敏性、特异性,可用于早期AMI的辅助诊断。     

B型肉毒毒素单克隆抗体的制备及其检测试剂盒的研制

目的 建立B型肉毒毒素(botulinum toxin B, BoNT/B)快速检测方法,研制B型肉毒毒素酶联免疫吸附测定(ELISA)检测试剂盒。方法 以B型肉毒类毒素为抗原免疫小鼠,用杂交瘤技术获得鼠源单克隆抗体(单抗),体内法扩大制备单抗。间接ELISA测定杂交瘤细胞株分泌单抗的稳定性、腹水效价以及单抗的亚型、理化性质和抗原识别表位。过碘酸钠法对抗原表位差异较大的抗体进行HRP标记,筛选最佳包被抗体和标记抗体,并确定包被抗体包被浓度和标记抗体工作浓度。将其配制成试剂盒,对试剂盒的线性、定量限、准确度和重复性等进行研究。结果 筛选、鉴定8株能稳定分泌B型肉毒毒素特异性单抗的杂交瘤细胞株。8株单抗腹水效价1∶32 000～1∶512 000,重链为IgG类、轻链为κ型,均耐碱、耐热,不耐酸,其中4C11、4D7、7F9和8D2 4株单抗抗原表位差异较大。以4D7为包被抗体、8D2为标记抗体配制试剂盒,B型肉毒毒素滴度在2～32 LD₅₀/mL范围内呈现良好的线性(r=0.996),定量限为0.96 LD₅₀/mL,试剂盒2～8℃有效期为12...