基于CRISPR/Cas生物传感原理的病原菌检测技术研究进展*

病原菌的快速准确检测是实现疫情高效防控、疾病精准治疗、污染环境及时处置的关键。而现有的病原菌现场快速检测技术,主要以定性分析为主,假阳性/假阴性受到诟病,检测准确性仍有待提升,亟待发展基于新原理、新方法的病原菌快速检测技术。基于CRISPR(clustered regularly interspaced short palindromic repeats)的生物传感技术因具有高灵活性(对不同的基因靶点只需改变crRNA序列)、高特异性(单碱基分辨)、高灵敏(优于10^-18 mol/L浓度)、可编程、可模块化、低成本、可在各种体外介质中高效稳定运行等独特优势,打破了传统分子诊断与检测技术的局限性,正在成为下一代病原菌检测技术的引领者。在该技术中,Cas效应蛋白被用作高特异性的序列识别元件,结合不同的生物传感机制,即可用于病原菌的高特异性快速灵敏检测。在总结CRISPR/Cas生物传感技术原理的基础上,综述了用于病原菌检测的CRISPR/Cas12和CRISPR/Cas13生物传感技术研究进展。通过阐述CRISPR/Cas生物传感技术在实际应用中面临的挑战,展望其未来的发展前景。     

Aurora B表达水平与宫颈癌发生的相关性

探究Aurora B在宫颈癌组织中的表达水平以及抑制Aurora B对宫颈癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响,采集未经放疗和化疗的宫颈癌组织和子宫肌瘤组织(对照),提取总RNA,实时荧光定量PCR (RFQ-PCR)检测Aurora B在宫颈癌组织中的表达水平,分析Aurora B与宫颈癌发生的相关性。以不同量的Aurora B抑制剂AZD1152-HQPA处理SiHa、HeLa和293FT (对照)细胞,CCK-8细胞增殖检测法检测对细胞增殖的抑制率,Transwell小室侵袭和Transwell迁移实验检测细胞侵袭和迁移能力。Aurora B mRNA在宫颈癌中的表达(0.003 88±0.000 560)极显著高于(p0.01)在子宫肌瘤中的表达量(0.001 03±0.000 161),表达上调3.76倍。AZD1152-HQPA抑制Aurora B激酶活性时,宫颈癌细胞系实验组的侵袭细胞数和迁移细胞数均极显著低于对照组(p0.01);且AZD1152-HQPA浓度从50 nmoL升高至100 nmoL时,侵袭细胞数和迁移细胞数极显著降低(p0.01)。Aurora B在宫颈癌组织中表达水平显著提高,其可能通过促进癌细胞增殖、侵袭和迁移来促进肿瘤的发生,是宫颈癌诊断和治疗的潜在靶标之一。     

领春木体细胞胚胎发生及植株再生

以领春木（Eupteleapleiospermum Hook．f.etThoms．）种子幼胚为试验材料,对领春木体细胞胚胎发生进行了研究。结果表明：在附加1．0mg·L-1 2,4．D＋0．5mg·L-1 6-BA＋3％蔗糖＋0．8％琼脂的Ms培养基上可诱导出愈伤组织。愈伤组织在附加0．5mg·L-1 NAA＋0．5mg·L-1 6．BA的培养基上可形成体细胞胚;体胚在附加0．5mg·L-1 6-BA＋0．05mg·L-1 NAA＋0．1％PVP的1／2MS培养基上能大量增殖;将成熟体胚转移到不添加任何植物生长调节剂的MS培养基上,培养60d,形成正常植株。     

DNA甲基化/去甲基化的相关药物治疗研究现状与展望

DNA甲基转移酶抑制剂能够改变癌细胞的表观修饰,降低增殖能力,促进免疫系统对癌细胞的识别,最终促进癌细胞的死亡。因此,其在各种癌症的治疗中发挥重要作用。此外,为了有更好的疗效,第二代DNA甲基转移酶抑制剂也在开发之中。最后,DNA甲基转移酶抑制剂和其他不同的疗法(如其他表观修饰药物、化疗、免疫疗法等)的联用可增强癌症治疗效果,并有待进一步的临床研究。     

韭菜上五种有机磷农药的残留监测与安全性评价

【目的】2013—2016年,在北京、天津、河北和山东采集韭菜样品,采用超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱法检测甲胺磷、甲拌磷、甲基对硫磷、对硫磷和毒死蜱的残留量,并对其残留安全性进行评价。【方法】韭菜样品用乙腈提取,石墨碳固相萃取小柱净化,超高效反相液相色谱分离,三重四级杆质谱检测,基质匹配标准溶液的外标法定量,在添加浓度为0.01~5.0 mg/kg时,方法的准确度、灵敏度和精密度满足农药残留检测的要求。【结果】甲胺磷的最高检出浓度由70.51 mg/kg降低到0.03 mg/kg,超标率由38.10%降到2.03%;甲拌磷的最高检出浓度由6.45 mg/kg降低到0.04 mg/kg,超标率由23.81%降到1.35%;甲基对硫磷的最高检出浓度由6.62 mg/kg降低到0.13 mg/kg,超标率由25.40%降到2.70%;毒死蜱的最高检出浓度由3.95 mg/kg降低到0.47 mg/kg,超标率由15.87%降到4.73%;对硫磷的最高检出浓度由22.69mg/kg降低到0.03 mg/kg,超标率由15.08%降到1.35%。【结论】上述农药的最高残留检出浓度和超标率大幅降低,但是韭菜中仍能检出少量残留。应加强安全综合防治技术的研发,加强安全用药的宣传和指导,保障韭菜产品安全。     

丁酸钠通过调节SIRT1/AMPK信号通路对慢性肾衰竭大鼠肾功能的影响

摘要 目的：探讨丁酸钠（NaB）通过调节沉默信息调节因子1（SIRT1）/单磷酸腺苷活化蛋白激酶（AMPK）信号通路对慢性肾衰竭（CRF）大鼠肾功能的影响。方法：选用SD大鼠72只,随机分为6组（12只/组）：control组、Model组、NaB低剂量组（100 mg/kg）、NaB中剂量组（200 mg/kg）、NaB高剂量组（400 mg/kg）、抑制剂组（400 mg/kg NaB+2 mg/kg SIRT1/AMPK通路抑制剂EX527）;采用饲喂0.5%腺嘌呤饲料以建立CRF大鼠模型,建模成功后,灌胃和腹腔注射相应药物。使用试剂盒检测大鼠24 h尿蛋白（24 h U-pro）、血清肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）水平;采用苏木精-伊红（HE）及Masson染色法观察肾脏病理改变,并计算胶原容积分数（CVF）;采用茜素红染色法与主动脉钙含量测定评估主动脉钙化情况;采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测各组大鼠肾脏组织白细胞介素（IL）-6、IL-β、肿瘤坏死因子（TNF）-α水平;采用过氧化氢酶（CAT）、丙二醛（MDA）、活性氧（ROS）检测试剂盒检测大鼠肾脏组织中CAT、MDA、ROS水平;采用蛋白免疫印迹法（WB）检测各组大鼠SIRT1/AMPK信号通路及骨形态发生蛋白2（BMP2）、Runt相关转录因子2（Runx2）蛋白的表达。结果：与control组比较,Model组大鼠肾脏组织损伤严重、胶原纤维沉积显著、主动脉钙化严重,CAT活性、SIRT1、p-AMPK/AMPK表达水平显著降低（P<0.05）,CVF、主动脉钙含量和SCr、BUN、24 h U-pro、IL-6、IL-β、TNF-α、MDA、ROS水平及BMP2、Runx2蛋白表达水平显著升高（P<0.05）;与Model组比较,NaB低、中、高剂量组大鼠肾脏组织损伤减轻、胶原纤维沉积面积明显减少、主动脉钙化程度减轻,CVF、主动脉钙含量和SCr、BUN、24 h U-pro、IL-6、IL-β、TNF-α、MDA、ROS水平及BMP2、Runx2蛋白表达水平显著降低（P<0.05）,CAT活性、SIRT1、p-AMPK/AMPK表达水平显著升高（P<0.05）;SIRT1/AMPK通路抑制剂EX527可降低高剂量NaB对CRF大鼠主动脉钙化和肾功能的改善作用（P<0.05）。结论：NaB可能通过激活SIRT1/AMPK信号通路,减轻肾脏组织炎症、氧化应激损伤、主动脉钙化和肾纤维化,从而起到改善CRF大鼠肾功能的作用。     

基于产业链视角的京津冀区域碳排放影响因素研究

随着京津冀一体化程度不断加深,产业交叉现象严重,深入研究京津冀区域各产业链路径碳排放的影响因素,对区域协同减排具有重要意义。使用环境扩展投入产出分析对2002—2017年京津冀区域消费端碳排放进行核算;利用结构分解分析识别京津冀区域碳排放的驱动因素;通过结构路径分解进一步从微观产业链层面追溯引起京津冀区域碳排放变动的关键路径及其关键因素。研究结果表明：资本形成是构成京津冀区域消费端碳排放的主要需求类别;经济规模和人口是促进碳排放增加的重要因素,碳排放强度对碳排放起到显著抑制作用,区域内产业结构、消费结构对北京市、天津市和河北省的碳排放影响存在差异;从产业链路径来看,不同碳排放驱动因素对京津冀区域不同产业链路径的影响大小和方向不同,应聚焦具体路径,实施上下游综合治理。     

土壤放线菌分离方法的初步研究

本文对土壤放线菌的一种新分离技术进行了研究。结果表明,用加有氟哌酸、青霉素、制霉菌素的培养基,可以选择性地从土壤中分离放线菌,０．０５％ＳＤＳ（十二烷基碘酸钠）在４０℃自理土壤样品,可以促进放线菌的孢子萌发而获得更多的放线菌株,进一步提高放线菌的分离效果。     

新生小鼠卵巢组织的玻璃化冻存、移植及分离卵泡的体外成熟培养初步研究

目的:系统地探索新生小鼠卵巢组织的玻璃化冻存建立卵巢库,移植和分离卵泡以及体外成熟培养的实验方法。方法:对1日龄小鼠卵巢组织进行冻存,解冻复苏和同种肾包膜下移植,从卵巢移植物种中进行卵泡分离和体外成熟培养。结果:①采用平衡液(ES)处理25min,玻璃化液(VS)处理3min方案冻存的卵巢组织具有更高比例的形态完整卵泡,其完整原始卵泡率均值达96.6%,显著性高于实验中其它四组方案(P0.05);②在分别移植2周和4周后回收卵巢移植物,发现二者的卵巢回收率无显著差异(P0.05),但移植4周组的卵泡回收数目要明显高于2周组(P0.05);③在培养基中添加适量的自体血清(10%,V/V)能显著提高卵子的体外成熟率,培养12h后对照组中生发泡破裂(GVBD)发生率为(34.74±4.26)%,添加血清后提高至(54.60±3.37)%,成熟的MⅡ期卵子获得率从(43.17±1.31)%升高至(57.75±5.31)%,有显著性差异(P0.05)。结论:通过该实验较好地建立了卵巢组织的玻璃化冻存、移植和卵泡分离以及体外成熟培养的实验方法。