重楼属植物的免疫血清学研究

以海南重楼(Paris dunniana),花叶重楼(P.marmorata),多叶重楼(P.polyphylla),凌云重楼(P.cronquistii),五指莲(P.axialis),滇重楼(Paris polyphylla var.yunnanensis)等六种重楼属植物的根茎为材料,提取分离其球蛋白组份作为抗原,免疫家兔得到相应的抗血清。通过免疫双扩散,聚丙烯酰胺凝胶电泳、免疫电泳、免疫吸收试验以及酶标免疫等方法,研究了重楼属上述六个种和变种的血清学行为以及他们之间的相互关系。在此基础上,用不加权算术平均对群法(UPGMA)经成聚运算,得到基于平均吸收相似系数(Sabs.mean.)和Jaccard's结合系数的两种表相图,这两种表相图的结果是一致的。花叶重楼与多叶重楼有较大的血清反应相似性,五指莲与滇重楼有最大的血清反应相似性。多型种P.polyphylla在形态上的较大变异与血清反应分析的结果是一致的,而且血清反应相似性分析支持了从形态分析得出的假设:Paris dunniana在重楼属的系统发生中是一比较原始的种。     

玉米素核苷的酶标免疫测定法

牛血清白蛋白-玉米素核苷(BSA-ZR)的兔抗血清对玉米素核苷具有很高的亲和性,而且专一性强,除了玉米素外,对其它一些细胞分裂素如激动素(KT)的交叉反应甚微。用辣根过氧化物酶(HRP)作为标记物的酶标免疫法,由于它的灵敏度高,相当于几十毫克量的样品就可以测出细胞分裂素的含量。测定范围在0.25—50pmol之间,测定范围较广。由于该方法专一性高,植物组织的粗提取物可以直接用于测定。避免了提取分离的繁琐程序,使得测定方法较简便、快速,可成批进行,适用于一般实验室。用该方法测得风信子(Hyacinthus orientalis L.)各部分的细胞分裂含量(以玉米素核苷计)在10—60×10~(-9)克/克鲜重,即10—60ng/g F.W.。     

番木瓜蛋白酶的免疫荧光定位

番木瓜在我国广东、广西、云南等地栽种,它的乳汁富含番木瓜蛋白酶,该酶主要应用于食品工业、酿造业及化妆品等。目前我们已完成精酶生产工艺的研究并投入了批量生产,然而该酶在果实里的分布特征及组织定位尚不清楚。我们通过幼果切片的组织学染色,观察到番木瓜的乳汁管结构,并用间接免疫荧光法初步确定了番木瓜凝乳蛋白酶的存在部位。     

番木瓜乳管结构及木瓜蛋白酶的免疫电镜研究

采用免疫细胞化学方法, 以透射电镜观察, 对番木瓜（Ｃａｒｉｃａ ｐａｐａｙａ Ｌ．）乳管分化及木瓜蛋白酶生成的超微结构环境进行了研究。实验结果表明：１．正在分化的乳管细胞内质网分泌旺盛, 线粒体和聚核糖体非常丰富; 之后细胞器逐渐解体, 内质网断裂、膨胀, 细胞壁多处穿孔; 经过内膜系统的重新组合, 成熟乳管被小泡充满, 小泡内有无定形物质凝聚, 已经没有任何细胞器残留, 但原生质膜一直存在。２．经过纯化的兔抗ｃｈｙｍ ｏｐａｐａｉｎ ＩｇＧ 为第一抗体, 羊抗兔ＩｇＧ－金复合物（１０ ｎｍ 直径）为间接抗体, 进行适当的免疫标记反应, 发现金颗粒主要在乳管细胞内, 附近的薄壁细胞及导管只是偶尔出现金标, 说明免疫标记的特异性较强, 通过各种对照试验, 证明了非特异性吸附相当微弱。显示木瓜蛋白酶的原初生成部位是正在分化的乳管细胞的内质网, 它暂时贮存于分泌泡, 随乳管的发育和乳汁其它成分一起被“组装”为乳汁小泡而充满成熟乳管     

海芋胰蛋白酶抑制剂的分离纯化及性质研究

利用亲和层析和分子筛凝胶过滤等技术,从海芋根茎中分离纯化到一种胰蛋白酶抑制剂,简称ＡＭＴＩ。经ＰＡＧＥ、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ鉴定均显示单一条带,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定,其分子量为２２０００,经等电聚焦（ＩＥＦ）测定,其等电点为６．２。根据对胰蛋白酶的抑制比可知该抑制剂为单头抑制剂,其抑制活性在６０℃和ｐＨ５￣１１范围内保持稳定。     

云南山楂中吲哚乙酸、脱落酸、玉米素和玉米素核苷的内源水平及其生根率

以云南山楂(Crataegus scabrifolia (Franch.)Rchd.)几个株系的成年树和实生苗的离体培养芽条为材料,用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定了它们的叶片中吲哚乙酸(IAA),脱落酸(ABA),玉米素和玉米素核苷(Z+ZR)的内源水平,探讨了这三种激素及其之间的平衡与生根率的相关性。结果发现:1.IAA内源水平之差异存在于株系间。2.内源(Z+ZR)在株系间无显著差异,而幼树发育至成年树的过程中,与IAA的平衡是多样的,同成年树的生根率似有以下相关性,当IAA水平降低,同时(Z+ZR)水平升高,有利于生根,反之则抑制生根。3.ABA内源水平无论成年或幼年树都呈低水平且无显著差异。     

抗玉米素核苷的单克隆抗体制备及内源玉米素核苷的酶联免疫吸附测定

通过二次成功的细胞融合,共获得三株分泌抗玉米素核苷(ZR)单克隆抗体的稳定杂交瘤系F_2E_6、F_3G_6和F_1B_9。其中F_2E_6分泌的单抗属IgG_1、F_3G_6、F_1B_9分泌的单抗均属IgM。以F_2E_6、F_3G_6单抗为基础的ELISA对ZR的检测灵敏度为0.05pmol(—18pg),线性检测范围为0.05—50pmol。除玉米素(Z)外,F_2E_6、F_3G_6单抗与IPA、6-BA、KT和腺苷几种ZR类似物的交叉反应值都小于0.18％。用ELISA测定F_2E_6单抗与ZR反应的亲和常数为2.36±0.99×10~(-8)M。本文还报道了包埋抗原的ELISA在植物内源细胞分裂素测定中的应用,并用此方法测定了黄化玉米(Zea mays L.)幼苗中ZR的含量。     

脱落酸的酶标免疫测定

使用国产辣根过氧化物酶(HRP)合成酶标记物,用竞争法进行了植物内源激素脱落酸(ABA)的酶标免疫测定研究。测定范围为0.0125ng—100ng,在此范围内logitB/B。与ABA浓度的对数之间呈较好的线性关系。检测的灵敏度达到5×10~(-14)克分子。比较了两种酶标记方法对于测定的影响,结果发现直接使ABA共价结合到HRP上形成ABA-HRP酶标记物比先将ABA与牛血清白蛋白(BSA)结合后,然后进一步再与HRP反应形成ABA—BSA—HRP复合物灵敏度高,非特异性吸附小,而且合成步骤较少。酶标记物的稀释度直接影响测定的灵敏度和浓度对数与logit B/B。之间的线性关系好坏;在以每毫升3—6微克免疫球蛋白包埋免疫吸附板进行测定时,用每毫升5微克酶标记物的浓度获得了最佳结果。     

云南可食的革菌属真菌的分类研究

“干巴菌”因别具清香的佳美食味而与竹荪、虫草、鸡、松茸等同属于云南珍贵的野生食用菌。每年夏秋，鲜干巴菌类在市场上深受欢迎。干巴菌分布于滇中的昆明、安宁、富民、禄丰等，滇西的丽江、保山、昌宁等地。常生于松林、油杉林等针叶松林下。