猪胸膜肺炎放线杆菌flic蛋白二级结构与B细胞表位预测

目的:预测和分析猪胸膜肺炎放线杆菌(Actionobacillus pleuropneumoniae,APP)鞭毛蛋白(flic)的二级结构和B细胞表位.方法:利用生物信息学方法对flic基因推导的氨基酸序列进行结构特征和B细胞表位预测分析.结果:flic蛋白为非稳定型脂蛋白,含有2个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点(39-42 SirD,164-167 SvkD)和3个蛋白质激酶C磷酸化位点(39-41 SiR,161-163 TsR、164-166 SvK).该蛋白无信号肽,在21Ala～38Ala处存在跨膜区的可能性最大.fljc蛋白的二级结构主要由无规卷曲区域、α-螺旋和β-折叠组成,而形成较少的转角结构.该蛋白的B细胞表位可能位于55～61和152～158区段内或其附近区域.结论:预测结果将有助于确定file蛋白的B细胞表位,为进一步研究flic基因功能及研制APP基因工程疫苗提供参考.     

高亲和力莱克多巴胺单克隆抗体的研制及ciELISA检测方法的建立

  用混合酸酐法（MA）将莱克多巴胺（RAC）偶联于牛血清白蛋白（BSA）,合成人工抗原BSA-RAC,用UV和SDS-PAGE鉴定;用BSARAC免疫Balb/c小鼠,细胞融合技术建立高亲和力RAC单克隆抗体（mAb）杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备RAC mAb;应用RAC mAb研制RAC残留快速检测ciELISA试剂盒（RAC-Kit）,并测定其性能。结果表明,BSA-RAC偶联成功,分子结合比为24.5∶1;筛选出3株杂交瘤细胞,其中最好的4D8株亲和常数（Ka）为1.65×1010L/mol; RAC-Kit的检测限为0.5ng/ml,检测范围为0.5～151ng/ml,饲料样、猪尿样的平均添加回收率为87.2%,89.4%,平均批内和批间变异系数小于15%,与多巴酚丁胺的交叉反应率（CR%）为9.7%,与其它化合物无CR,RAC-Kit在4 ℃保存期为180d。     

19-去甲类固醇激素检测方法研究进展

综述了19-去甲类固醇激素检测的筛选法、定量法和确证法,探讨了多残留同时检测试纸条和蛋白质芯片等最新技术。     

19-去甲睾酮异源性ciELISA试剂盒的研制及应用

筛选抗19-去甲睾酮（NT）单克隆抗体,建立异源性ciELISA试剂盒。用人工抗原NT-17-BSA免疫Balb/C小鼠,细胞融合技术建立1株抗NT单克隆杂交留细胞NT1-B7,同种型为IgG1 /k,腹水效价达0.64×105,亲和常数（Ka）为4.31×109 L/mol,半数抑制浓度（IC50）为0.55 ng/mL,与群勃龙和雌二醇的交叉反应率（CR）分别为2.2%和1.6%,与其它化合物无CR。异源性ciELISA试剂盒在猪肉、猪尿、牛肉和牛尿四种基质中的检测限分别为0.24、0.23、0.22和0.17 ng/mL,批内和批间相对标准差（RSD）在4.4％～21.8％,添加回收率在85％～110％,4 ℃下保存期至少6个月。NT-Kit的基质pH值适用范围为6.5～7.5,温育过程优化后可节约检测时间30～90 min。试剂盒灵敏度高、特异性强,可应用于样品基质中NT残留检测。     

19-去甲睾酮免疫学检测方法的筛选和优化

目的:19-去甲睾酮列为运动员和动物竞技比赛中的违禁药品,也禁止其以促进生长为目的在食源性动物生产中使用,该文研究其免疫学快速检测方法的筛选.方法:间接ELISA检测不同免疫时间对效价的影响,间接竞争ELISA研究阿源和异源性检测对抗体灵敏度的影响,不同孵育时间选择最佳检测方案.结果:NT-17-BSA为完全抗原制备兔多克隆抗体,以NT-3-OVA为包被原进行异源性ELISA检测,结果表明五免后可制备出高效价的NT pAb(1:25600),并获得最灵敏的IC50值(18ng/mL).同时,37℃条件下,2h包板和1h封闭的孵育方案获得最理想的吸光度值.结论:该研究所建立的检测方法可应用于19-去甲睾酮免疫学快速检测试剂盒的研制.