广西红壤土壤微生物溶磷基因的克隆与表达

本研究对广西红壤土壤微生物溶磷基因进行克隆,并在大肠杆菌中诱导表达。从广西红壤中提取宏基因组DNA,克隆了GabY基因,构建大肠杆菌原核表达载体p ETDuet-1,转化大肠杆菌DH5α得到重组工程菌。通过酶切验证重组体。重组体在诱导条件下24 h对难溶矿物质磷Ca_3(PO_4)_2的溶磷量为(40.73±1.32)μg/mL,而对照组仅为(5.11±0.08)μg/mL。重组体和对照随着诱导时间的增加,培养基pH值均有下降趋势,但重组体培养基pH值变化显著大于对照组,产酸能力显著优于对照组。证明成功克隆得到土壤微生物溶磷基因,并在大肠杆菌中得到表达。     

一种展示SARS冠状病毒受体结合区的重组枯草杆菌芽孢的制备及免疫原性分析

目的：利用枯草杆菌芽孢呈递技术制备表达SARS冠状病毒S蛋白受体结合区（RBD）的重组芽孢。方法：将枯草杆菌 CotB 基因构建到基因组整合质粒pDG1664中,再将 RBD 基因连接到 CotB 基因的下游,构建成重组质粒pDG1664-CotB-RBD,通过同源重组整合到PY-79枯草杆菌基因组中;利用红霉素抗性筛选重组菌并进行PCR和DNA测序鉴定,Western印迹鉴定重组菌芽孢表面RBD蛋白的表达情况;用表达RBD的重组芽孢以口服方式免疫小鼠,通过ELISA和流式细胞术检测重组芽孢的免疫原性。结果：制备出枯草杆菌基因组整合了RBD抗原基因的重组菌株RS1931,形成的重组芽孢表达相对分子质量约62×103的CotB-RBD融合蛋白;重组芽孢免疫的小鼠血清RBD抗原特异性IgG抗体滴度在末次免疫后2周可达1∶10880,重组芽孢初免后18周的小鼠脾细胞中IFN-γ＋CD4^＋、IL-4＋CD4^＋和IFN-γ＋CD8^＋T细胞比例上调,表明重组芽孢经口服免疫产生良好的体液免疫和细胞免疫应答。结论：针对SARS冠状病毒S蛋白RBD建立了枯草杆菌芽孢呈递技术方法,制备出在枯草杆菌芽孢表面稳定表达外源RBD蛋白的重组株,获得的重组芽孢具有良好的免疫原性,为开发芽孢呈递型SARS疫苗奠定了基础。     

中东呼吸综合征冠状病毒假病毒系统的建立及其在中和抗体检测中的应用

目的:为了避免中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)感染与中和试验中操作活病毒带来的生物安全隐患,构建只具有一次感染能力而无复制能力的MERS假病毒,建立MERS假病毒系统,并应用于中和抗体检测。方法:构建含有MERS-CoV S基因的重组质粒pcDNA3.1-MERS-S,与缺失Env基因、含有萤光素酶报告基因的HIV-1骨架质粒pNL4-3.Luc.RE共转染293T细胞,收获含有假病毒的上清;通过Western印迹、细胞感染实验和血清中和试验,确定是否包装出MERS假病毒,及是否能有效应用于细胞感染与中和试验。结果:MERS假病毒pMERS-S培养上清经Western印迹鉴定出相对分子质量为25×103的HIV-1 P24蛋白和相对分子质量为180×103的MERS-CoV S蛋白;与阴性对照假病毒pEnv-相比,pMERS-S能有效感染MERS-CoV敏感细胞系Huh-7,在感染细胞中产生荧光信号,感染细胞的假病毒量与产生的荧光信号呈明显的量效关系;在MERS假病毒中和试验中,pMERS-S能被MERS-CoV中和抗体中和而失去感染力,反映抗体对MERS-CoV的中和活性。结论:建立了不依赖于BSL-3高等级生物安全条件的MERS假病毒系统,并有效应用于中和抗体检测,为MERS-CoV疫苗、药物评价及病毒致病机制研究提供了良好的技术支撑手段。     

桉树幼苗对难溶性磷的吸收及其根系对低磷胁迫的响应

以‘广林9号’桉树幼苗为试验材料,采用水培和土培试验方法研究了桉树幼苗对难溶性磷酸盐的吸收及其在低磷胁迫下的根构型和根系的生理反应,以揭示桉树高效吸收磷素的机制。结果显示:(1)桉树幼苗在含磷酸铝的缺磷培养液中吸收的磷达4.24mg/株,与供应水溶性磷和磷酸钙处理的相当。(2)土壤缺磷或仅在上土层(0~20cm)施磷肥处理均有利于桉树幼苗浅层根的分布,使根表面积及根数在上土层与下层(20~40cm)比值明显增高。(3)桉树幼苗根尖的H+-ATPase活性在缺磷处理15d后显著提高,其根尖周围的溴甲酚紫指示剂变黄,根基环境明显酸化;根尖分泌的酸性磷酸酶活性在低磷胁迫也显著提升,且随着处理时间(10、15、20d)的延长而进一步提高;铝和低磷胁迫能明显诱导桉树根系分泌草酸,其分泌量显著高于对照和缺磷处理。研究结果表明,桉树幼苗具有较强的难溶性磷吸收能力,而在缺磷及磷铝胁迫下根系的浅层化、根尖酸化及根分泌的酸性磷酸酶及草酸量增加可能是桉树幼苗适应酸性土壤铝毒和缺磷环境的重要机制。     

水稻品种对白背飞虱的产卵效应测定

<正> fera(Horv(?)th)的产卵效应。结果见表。 从表中看出,1987年测定结果,白背飞虱产卵量与TNl无差异的品种有川米一号、8604、0374等,与TNl差异显著的有Ptb33、IR64、6267、单42-1、浙丽一号等。 1986年我们对50个品种测定结果,不同     

生物种群动态微分方程模型参数估计方法

本文以数值分析和最优化技术的有机结合为基础,提出了一种新的对动态微分方程模型直接进行数据拟合和参数估计方法,并以Logistic微分方程、生物种间竞争关系微分方程以及一种复合形态的Logistic微分方程为例进行了数据拟合试验．结果表明,该方法对各种动态微分方程模型均能进行最优拟合分析并求解其参数．同时发现,以前有的作者〔1,2,3,4,5〕提出的方法所得到的参数估计值存在系统误差且误差较大．     

离子束注入对细胞有丝分裂微管骨架影响的研究

经能量为２０～３０Ｋｅｖ注入剂量为６×１０１５Ｎ＋／ｃｍ２和１０×１０１５Ｎ＋／ｃｍ２的Ｎ＋离子注入及免疫荧光抗体标记显微观察和统计,结果表明,在绿豆根尖细胞有丝分裂中,分裂细胞的形体、中后期细胞数目、细胞微管骨架以及纺缍体的排布方式均发生了异常变化。１２－１３％的分裂细胞个体增大,８－１０％有丝分裂中后期细胞数目高于对照组,间期细胞微管骨架荧光强度明显弱于对照组,且有２－４％的较强荧光小体和无荧光小体（微孔洞,ｍｉｃｒｏｏｐｅｎｉｎｇ）。３－１２％的中后期细胞中出现不对称和极向不同步移动排布的纺缍体。研究结果表明：２０～３０Ｋｅｖ的能量和剂量为６～１０×１０１５Ｎ＋／ｃｍ２的Ｎ＋离子束注入,对绿豆根尖细胞有丝分裂微管骨架可诱发产生异常变化,同时也可以初步认为这种变化结果与Ｎ＋离子束注入产生的染色体异常分配和运动功能活动有密切的相关性。     

根系输液改善妃子笑荔枝钙营养的研究

在妃子笑果实膨大期,用CaCl2进行根系输液、果实蘸果及树冠喷施三种不同的补钙处理,研究不同补钙方式对改善妃子笑荔枝钙营养的作用。结果表明,用CaCl2根系输液,能够显著改善树体钙素营养,果皮和叶片的钙含量比对照分别提高了85.19%和50.28%,效果显著好于树冠喷施和果实浸蘸。与对照相比,果实浸蘸、树冠喷施也有显著改善钙营养的作用,果皮和叶片的钙含量比对照分别提高了33.48%、8.85%和28.43%、51.54%。综合比较三种补钙方式的效果,根系输液好于蘸果,蘸果处理好于树冠喷施。     

4种生态类型稻区节肢动物群落的基本组成与结构特征分析

根据在浙江富阳、河南郑州、江苏句容和湖南长沙的连续田间调查,稻田节肢动物群落的组成依生态学上的营养关系分为植食类（害虫）、捕食类和寄生类（天敌）、以及腐生类和水生类（与水稻关系不甚密切,但可作为天敌的猎物）等。进一步分析显示,不同稻区的节肢动物群落的种－丰盛度关系适于用对数正态分布（Ｌｏｇｎｏｒｍａｌｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ）模型描述,单一作物生长季节中取样总计少于１０个个体的物种所占比例为４３．７６％－７１．９１％。不同类群的相对丰盛度因地而异,且可是水生类的摇蚊（富阳早稻田）、白背飞虱和褐飞虱（富阳晚稻、句容、长沙）、黑尾叶蝉（郑州）或腐生类的弹尾虫（句容）。多样性（以Ｎ＿１表示）的高低顺序为郑州（２８．５６）＞富阳晚稻（２２．４３）＞句容９１（１１．０８）＞富阳早稻（６．４３）,句容９２（６．８０）,和长沙（６．７２）。极丰盛种所包括的个体数占总个体数量的比例在６９％－８０％之间,具有普遍性的丰盛种有猎物类的褐飞虱、白背飞虱、蚊类、弹尾虫以及捕食类的狼蛛、黑肩绿盲蝽和尖钩宽蝽等,构成了稻田节肢动物群落组成及功能作用的主体。     

同型半胱氨酸、子宫动脉血流参数与反复妊娠丢失患者胰岛素抵抗和妊娠结局的关系

摘要 目的：探讨同型半胱氨酸（Hcy）、子宫动脉血流参数与反复妊娠丢失（RPL）患者胰岛素抵抗和妊娠结局的关系。方法：选择2020年6月至2022年10月昆明市妇幼保健院收治的162例RPL患者作为RPL组和同期82例规律产检的健康孕妇作为对照组。按照妊娠结局将RPL患者分为活产组（85例）和流产组（77例）。检测血清Hcy水平,胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）,超声检查子宫动脉血流参数,包括子宫动脉收缩期峰值/舒张末期流速（S/D）、搏动指数（PI）、血流阻力指数（RI）。Pearson相关性分析Hcy、子宫动脉血流参数与HOMA-IR的相关性。采用多因素Logistic回归分析RPL 患者妊娠结局的影响因素。采用受试者工作特征（ROC）曲线分析Hcy、子宫动脉血流参数对RPL 患者妊娠结局的预测价值。结果：RPL组血清Hcy水平,S/D、PI、RI以及HOMA-IR均高于对照组（P＜0.05）。RPL组血清Hcy,S/D、PI、RI与HOMA-IR均呈正相关（P＜0.05）。流产组血清Hcy水平,S/D、PI、RI以及HOMA-IR均高于活产组（P＜0.05）,多因素Logistic回归分析显示高HOMA-IR、高Hcy、高S/D、高RI、染色体异常是RPL患者流产的危险因素（P＜0.05）。ROC曲线分析显示联合Hcy、S/D、RI预测RPL患者流产的曲线下面积（AUC）为0.849,高于单独预测。结论：RPL患者子宫动脉血流参数S/D、RI、PI和血清Hcy水平均增高,高S/D、RI和Hcy与RPL患者胰岛素抵抗以及流产风险增加有关。联合S/D、RI和Hcy可提高RPL流产风险评估效能。