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地黄SCoT分子标记体系的建立和指纹图谱的构建 总被引:1,自引:0,他引:1
该研究采用L_(25)(5~6)正交设计和单因素两种方法,对影响地黄SCoT-PCR反应的5个因素(模板DNA浓度,引物浓度,ddH_2O和Mix的用量以及退火温度)进行了优化。结果表明:优化后的反应体系总体积为25μL,含有8μL ddH_2O,1μL模板DNA(80 ng·μL~(-1)),1μL引物(8μmol·L~(-1))和15μL Mix,退火温度为45℃。运用30份地黄种质材料,对优化的SCoT-PCR正交体系进行多次重复验证,获得了多态性丰富、条带清晰的扩增图谱,证明该反应体系稳定可靠。利用该体系对32条SCoT引物进行两次筛选,得到14个扩增产物清晰、重复性好且多态性条带相对较高的引物。利用SCoT_4等5条引物构建了上述地黄2个种共30份种质的SCoT指纹图谱。利用这5个SCoT引物指纹图谱可将7个地黄常用栽培品种区分开。这表明SCoT分子标记体系适用于地黄主要品种亲缘关系及遗传多样性的研究,所构建的指纹图谱也为地黄常见的7个栽培品种的区分提供参考依据。 相似文献
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怀地黄ISSR扩增条件优化的研究 总被引:27,自引:2,他引:25
用CTAB法提取怀地黄嫩叶DNA,进行简单重复间序列标记(ISSR)分析.通过单因子实验分别研究了退火温度、Taq酶单位、Mg2+浓度、dNTP浓度、引物浓度和模板DNA浓度对ISSR-PCR反应的影响,找出各自的合适条件,而且每一个合适条件确定以后都被作为后续研究的一个条件.通过各个因子的组合研究建立了适宜于怀地黄ISSR分析的扩增体系25
μL PCR反应体积,1×Taq DNA酶缓冲液(10 mmol/L Tris-HCl,50 mmol/L KCl,0.1% Trion
X-100,pH9.0 ),2.5 mmol/L MgCl2,1.5~1.0 U Taq酶,60 ng模板DNA,0.4 μmmol/L引物,各0.4
mmol/L的dATP、dGTP、dCTP和dTTP.合适的退火温度为53~55℃.为用ISSR技术分析鉴定怀地黄种质资源奠定了良好的基础. 相似文献
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影响决明无菌苗子叶原生质体分离和培养因素的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
以决明(Cassia obtusi folia)无菌苗子叶为材料,对酶组合、无菌苗日龄,植物激素组合和培养方法对其原生质体的分离和培养的影响进行了研究。结果表明:用3%的纤维素酶和0.2%Pectinase Y-23的酶组合处理决明无菌苗子叶块8小时可以高效分离出有活力的原生质体;约14日龄的决明无菌苗子叶比较适合于原生质体的分离;适当浓度的2,4-D 有利于原生质体的分离。促进原生质体分裂的理想的植物激素组合为0.4 mg/L 2,4-D,1.0 mg/L NAA and 0.1 mg/L KT;漂浮培养法最有利于原生质体的分裂和发育。找出了适合于决明无菌苗子叶原生质体的分离和培养的酶组合、植物激索组合、有效培养方法和决明无菌苗子叶日龄。这为有效地从决明无菌苗子叶原生质体再生植株奠定了基础。 相似文献
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多基因表达系统研究进展 总被引:2,自引:0,他引:2
细胞中大多数蛋白质以亚基形式与其他蛋白装配成蛋白复合体而发挥功能.大分子蛋白复合物的结构研究和功能分析在后基因组时代成为热点,如何高效地获得多蛋白复合物是研究其功能和结构的前提.利用基因工程技术实现多个蛋白亚基在同一宿主细胞内共表达并装配成复合体是获得多蛋白复合物的有效手段.多基因表达系统在基础和应用研究中正起到越来越... 相似文献
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芫荽花再生植株及离体快速繁殖 总被引:1,自引:1,他引:0
1植物名称芜萎(Coriandrumsativum),又名胡美,俗称香菜。2材料类别幼嫩花蕾和幼芽。花蕾取自新乡郊区菜园内,刚出现一个花蕾的芜萎苗。幼芽取自本校菜市场的芜萎幼苗。3培养条件花蕾诱导愈伤组织培养基:门)MS+2,4~D2.omg·t-‘(单位下同)+6-BAO.3+NAAO.2;(2)MS+2,4--D0.2+6-BA0.2+NAA2.0;(3)MS+2,4--DI.0+6-BA0.5+KT0.2;(4)MS+6-BA0.7+NAAI.5+KT0.1;(5)MS+2,4--DI,5十6-BA0.7+NAA0.2;(6)MS+2,4--D0.4十NAAI.0+KT0.工。芽分化培养基:… 相似文献
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