蛋白质核心设计的序列组合文库筛选方法

本文提出一种新的蛋白质序列组合文库筛选方法,异型自系统最优法,用于从头设计蛋白质核心。经λ－阻遏蛋白、噬菌体４３４ＣＲＯ蛋白、白介素－４、硫氧还蛋白、泛肽等的检验,表明此方法用于从头设计蛋白质的核心是可行的。     

不同基因组组合的鱼类抗原基因剂量效应的研究(英文)

本文采用经典免疫遗传学方法研究了鲤鱼不同基因组组合的基因剂量与抗原表达的关系。分别从红鲤（RC）、红鲫（RA）、镜鲤（MC）和鲤鲫二倍体杂种（CA）采血样,制备红细胞悬液。常规方法免疫兔子,使效价高于64,制备抗RC、RA、MC、CA血清。Tab．1为2N、3N、4N鲤鱼来源的红细胞与四种抗血清的凝集实验结果,表明：亲缘关系越近,滴度越高;不过,不同倍性鲤鱼之间,差异不显著。Tab．2为2N、3N、4N鲤鱼来源的红细胞与四种抗血清吸附反应后,与各自靶细胞RC、RA、MC、CA的吸收实验结果,表明：抗血清被吸附后的残留活性与受试者的亲缘关系呈反比,即：亲缘关系越近,残留活性越低。以CA／antiCA组为例,CCA为16,MC为32,表明：两者均含有镜鲤基因组,而后者多一套镜鲤基因组,吸收效价亦有随之增高的趋势。基于Tab．2可以推演出鲤鱼不同基因组组合的系（种）血清学检索表（Tab．3）。     

蛋白质骨架库的构建及其在功能蛋白质设计中的应用

利用活性位点嫁接设计新的功能蛋白质的方法需要功能模体和蛋白质骨架两种构件。出于活性位点嫁接的需要,我们构建了一个蛋白质骨架库,且提供搜索与功能模体相配骨架的工具及其评估方法。并用两个活性位点的嫁接进行了检验。     

鳙人工单倍体育种研究初报

应用生物技术方法能大大缩短鱼类育种期限 ,降低生产成本 ,快速培育纯系或近交系 ,进而选育出遗传性状优良的品系。同时 ,它也可以按照人们的需求培育新品种。鱼类单倍体育种虽然已有许多研究[1— 6] ,但关于鳙人工雌核发育单倍体的研究至今未见报道。近年来 ,本实验室开展了鳙人工雌核发育单倍体育种研究 ,现报道如下。1　材料与方法1 1　试验材料　鳙 [Ａｒｉｓｔｉｃｈｔｈｙｓｎｏｂｉｌｉｓ(Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ) ]成熟卵和兴国红鲤 (ＣｙｐｒｉｎｕｓｃａｒｐｉｏＶａｒ.Ｘｉｎｇｇｕｏ)精液取自水生所试验基地。1 2　精子遗传失活与…     

人工四倍体鲤鲫后代遗传同一性的FCM及RAPD证明

人工四倍体鲤鲫是本实验室采用人工染色体组叠加构建的一个以雌核发育为生殖模式的鲫克隆系,现已繁殖至第五代.它生长快、体型好、抗病力强、易捕捞,比普通二倍体鲫和三倍体鲫经济性状更优良,将具有广阔的生产应用前景.从表型看,子代是由四倍体鲤鲫原代母本拷贝而成,与母本极其相似,表明异源精子启动发育的后代无分离现象.我们曾对原代四倍体雌核发育生殖方式的遗传进行过基因组、形态学和同工酶分析研究[1-4],为了获得更进一步的证据,本文应用FCM和RAPD分子遗传标记方法进行验证.     

Furin／kexin蛋白质前体加工酶抑制剂的理性再设计

许多重的生物过程,如酶原激活、肽激素合成、病毒蛋白加工和受体成熟,均须蛋白质前体加工酶的剪切处理。因此,蛋白质前体加工酶可能是一种新药开发的对象,综合利用同源模建技术和序列的进化踪迹分析手段,研究了蛋白质前体加工酶furin/kexin与水蛭抑制剂(eglinC）突变体的相互作用模式,阐释furin/kexin各个亚类的底物/抑制剂特异性的共性和差异性的序列结构基础。在此基础上,利用界面再设计策略（核心算法为异型自洽系综最优化）进行了furin/kexin抑制剂的理性再设计,分别以模建的水蛭抑制剂-furin,水蛭 素-kex2复合物结构为模板,对水蛭 抑制剂P1,P2和P4位置进行设计,计算结果显示这三个位置均是偏好碱性残基,与已有的实验结论一致,另外针对furin/kexin各亚类在S′端有较多的特异性残基位置这一特点,对抑制剂P′端的残基位置实施改造,设计furin和kex2的特异性更高的抑制剂,对于furin,设计得到的最好突变体是P2′Glu-P3′Asp-P4′Arg;而对于kex2,最好的突变体是P2′Arg-P3′Arg-P4′Glu。结构分析显示furin和kex2与相应的水蛭 抑制剂突变体形成石油同的相互作用模式,这里我们给出了综合利用同源模建技术,序列的进化踪迹分析和理性再设计进行酶-抑制剂相互作用研究及抑制剂改造的方案;同时提供了合理的理论设计方案。为进一步的实验设计提供理性的指导。     

鲤鱼染色体组人工调控的核型证明

以囊胚细胞制备鲤鱼单倍体染色体永久片并分析了单倍体染色体的核型。用囊胚细胞及白细胞培养法制取雌核二倍体及人工三倍体的永久片。以单倍体的核型为根据对人工二倍体及三倍体的染色体配对证明,人工诱发雌核二倍体的染色体是来自两个完整的染色体组,而人工三倍体的染色体则依不同个体而有差异。有部分个体的染色体来自三套完整的染色体组,但大部分个体是非整倍体,前者的雌性个体性腺发育正常,后者是不育的。     

鲤鱼杂种优势多代利用的探讨

作者根据自己的工作和当前国内外有关研究工作的进展情况,提出了通过人工诱发杂种三倍体,并用雌核发育的方式繁衍后代的途径,以防止鲤鱼品种间杂交后代分离,从而达到杂种优势多代利用的设想。     

定点突变提高青霉素G酰化酶的稳定性

以大肠杆菌青霉素G酰化酶的晶体结构为模板 ,用软件PMODELING同源模建巨大芽孢杆菌青霉素G酰化酶的三维结构。在此基础上 ,将 β亚基 4 2 7位 (突变A)和 4 3 0位 (突变B)赖氨酸残基突变为丙氨酸 ,降低了该酶的等电点 ,增加了疏水性 ,从而提高其在酸性和有机溶剂环境中的稳定性。两个突变体与亲本相比 ,比活力和Km相近 ,最适pH减少了 0 .5个单位 ,突变B在 pH 5 .2的溶液中的稳定性明显提高。突变A和B在 15 %DMF中的半衰期分别比亲本酶提高了 60 %和 166%     

人工复合三倍体鲤卵的受精生物学研究

本文对人工复合三倍体鲤成熟卵的受精生物学进行了研究。结果表明,三倍体卵外壳具有凸凹不平的表面,与正常二倍体卵比较有明显差异。受精生物学观察发现有些卵为多精受精,进入卵的所有精子都能形成雄性原核,排出一个极体,但绝大部分受精卵在发育期间分裂不齐、畸形、直至死亡,只有具有三套完整染色体的卵子的雌核才能发育成为三倍体个体。三倍体鲤的成熟分裂不是完全的均等分裂,有些不等分裂的卵母胞核中只有两套染色体,或一套染色体,甚至是一套半染色体。