稳定表达RFP-GFP-LC3的大鼠胰岛β细胞株的构建

为了简便自噬相关机理药物在胰岛β细胞上的高通量筛选,实验通过慢病毒转染技术,将RFP-GFP-LC3质粒转入大鼠胰岛β细胞株(RIN-m5f),用G418对感染细胞进行筛选,激光共聚焦进行活细胞拍摄验证,得到100%表达RFP-GFP-LC3质粒的细胞株。无血清饥饿处理细胞,结果显示:饥饿组GFP/RFP荧光点比值较对照组下降, P62蛋白表达量以及S6K磷酸化水平降低,加入10μmol/L氯喹部分抑制自噬后, GFP/RFP荧光点比值回升。以上结果表明稳定表达RFP-GFP-LC3的RIN-m5f构建成功,并能够以简单的检测方式准确表达自噬全过程,为自噬在糖尿病药物机理方面的研究奠定了基础。     

药用植物富贵菜的研究现状与展望

富贵菜(Gynura divaricata DC.)是中国民间传统的药食兼用型多年生草本植物资源,具有清热、凉血、止痛、调节免疫、降血糖和抗肿瘤的功效。对富贵菜国内外研究进展进行了综述,内容涉及植物学特性、生态学特性、营养与保健、采后保鲜、栽培繁殖病虫害防治、功能化学成分及药理作用研究等方面。并在对其所存在的问题进行初步讨论的基础上,提出在加强种植资源遗传多样性研究与保护的同时,开展现在育种技术和栽培技术的研究,结合新兴生物技术和药理研究,开展富贵菜资源的综合运用。     

1株聚乳酸降解细菌的筛选、鉴定及产酶研究

从污泥中筛选出1株对聚乳酸（poly—L—lacticacid,PLA）具有降解活力的细菌DSL09,该菌株对PLA的乳化液、粉末及薄膜都具有降解作用。通过形态学、16SrDNA比对及生理生化特性的分析,鉴定该菌株属于芽胞杆菌属（Bacillus sp．）。为提高该菌株对PLA的降解活力,对其进行了紫外诱变,获得了稳定遗传的突变株DSL09-60b,该突变株的PLA降解活性提高至原始菌株的1．5倍。对该突变株产PLA降解酶的发酵条件进行了优化,经测定DSL09-60b在初始培养基pH为8．0、0．5％酪蛋白为诱导物、接种量6％（体积比）的条件下37℃培养54h时发酵液酶活性最高。     

聚3-羟基丁酸酯（PHB）生物降解过程的研究

利用DS9701菌株对聚3-羟基丁酸酯(PHB)膜进行降解,对降解到不同程度的PHB膜采用扫描电子显微镜观察其表面形态结构的变化,并对其降解产物进行分析测定.结果表明,PHB的生物降解首先发生在PHB表面的非晶部分,随后结晶部分开始降解,并且降解首先发生在球晶的中心部分.DS9701菌株所产生的PHB解聚酶主要降解PHB的第二个酯键,降解产物为二聚体.     

HPLC法检测蛇足石杉内生真菌胶胞炭疽发酵液中石杉碱甲和石杉碱乙的含量

建立了高效液相色谱(HPLC)测定蛇足石杉(Huperzia serrate)内生真菌胶胞炭疽发酵液中石杉碱甲(Huperzina A)和石杉碱乙(Huperzine B)含量的方法,并以此方法检测胶胞炭疽发酵液中石杉碱甲和石杉碱乙含量的积累。内生真菌发酵液经氯仿萃取、甲醇溶解、过滤后进行高效液相检测分析,选用Agilent Eclipse plus-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以0.015 mol/L乙酸铵(p H 6.8)和甲醇溶液(70∶30)为流动相进行等度洗脱,流速1 mL/min,检测波长为308 nm,连续检测内生真菌胶胞炭疽发酵液中第6–15天石杉碱甲和石杉碱乙的含量积累。结果表明,发酵提取液中的石杉碱甲和石杉碱乙可在25 min内进行很好的分离和分析,石杉碱甲在1.50-48.00μg/mL范围内线性关系良好(相关系数r为0.999 5),石杉碱乙在0.25-7.50μg/mL范围内线性关系良好(相关系数r为0.999 7),石杉碱甲和石杉碱乙的平均加标回收率分别为106.83%、108.06%,相对标准偏差(RSD)分别为3.34%、3.60%。该方法简便、快速、精密度高、结果准确,适用于内生真菌发酵液中石杉碱甲和石杉碱乙含量检测。在发酵过程中,内生真菌发酵液中石杉碱甲和石杉碱乙的含量呈现先增后减,随后有所增加继而又减少的趋势。石杉碱甲和石杉碱乙的含量分别在内生真菌发酵第14天、第8天达到最高,分别为12.417 0μg/mL、4.660 3μg/mL。该方法学的建立为内生真菌胶胞炭疽合成石杉碱甲与石杉碱乙的机制研究提供了检测手段,从而有利于药物新资源的开发。     

东北羊草草原土壤微生物生物量的季节变化及其与土壤生境的关系

本文研究东北羊草草原土壤微生物生物量的季节变化规律。根据实测数据,利用ＭＶ／６０００电子计算机构造了趋势方程,并作了Ｆ检验,Ｆ０．２５＝２．６８,Ｆ０＝１９３．９９,效果良好。以此为基础可以进行预测预报。同时利用ＭＶ／６０００电子计算机绘制三维空间趋势面图形,直观地反映了东北草草原土壤分解微生物生物量的季节变化规律。实验结果证明,土壤温度、水分对土壤微生物的生物量影响同等重要。     

石榴籽油的提取及成分分析

采用正交试验方法研究了超临界CO_2萃取石榴(Punica granatum L)籽油的技术体系,并用气相色谱-质谱联用仪对石榴籽油的化学成分进行了分析。结果表明,超临界CO_2萃取石榴籽油的最佳工艺条件为:萃取压力25 MPa,萃取温度30℃,分离温度55℃,萃取时间70min,在此条件下油脂产率为20.4%。GC-MS分析的结果显示,石榴籽油的主要成分是脂肪酸。饱和脂肪酸以棕榈酸为主,不饱和脂肪酸主要是亚麻酸和亚油酸,占脂肪酸总量的86.86%。     

生孢噬纤维菌的一个新菌株*

以滤纸纤维素为唯一碳源,从土壤中分离筛选出一株好氧性纤维素降解细菌,通过对其形态学及生理生化特性的研究,该菌株被鉴定为生孢噬纤维菌(Sporocytophaga)的一个新菌株。     

超临界CO2萃取刺葡萄籽原花青素的工艺研究

刺葡萄(Vitis davidii Foex．)是属于葡萄属东亚种群的一个种,在湖南西部和南部的山区分布广泛,资源丰富,其果实酸甜、风味浓,但其果粒小,种子多,从种子中提取天然活性物质——原花青素的前景可能更为广阔。目前关于刺葡萄的研究报道少,为此本文以“紫秋”刺葡萄种子为原料,采用单因素试验和正交试验,探讨了超临界CO2萃取刺葡萄籽原花青素的工艺。研究结果表明,超临界CO2萃取刺葡萄籽原花青素的适宜工艺条件为:萃取压力30MPa,萃取温度55℃,料液比1:0．8,60％的乙醇为夹带剂,在此条件下,原花青素的产率为17．58 mg/100g,纯度可达89．7％。     

光学活性拟除虫菊酯对棉铃虫神经细胞钠通道电流的影响

用全细胞膜片钳技术对比分析了alpha体氯氰菊酯与theta体氯氰菊酯对棉铃虫Helicoverpa armigera幼虫离体培养中枢神经细胞Na⁺通道门控过程的影响。结果表明,alpha体氯氰菊酯作用后,神经细胞Na⁺通道电流（I_Na）先增大,同时通道的激活电压向负电位方向移动约10 mV,提示alpha体氯氰菊酯使通道激活电位降低,通道更容易被激活。药剂作用约10 min后,I_Na又迅速降低,表明alpha体氯氰菊酯对开放状态的Na⁺通道有抑制作用。另外,alpha体氯氰菊酯使I_Na到达峰值的时间缩短,但对失活时间无明显影响。Theta体氯氰菊酯也使I_Na激活电位左移,幅值降低,但降低速率较慢。总的结果表明alpha体氯氰菊酯与theta体氯氰菊酯对棉铃虫中枢神经细胞处于关闭和开放状态的钠通道均有作用,且alpha体氯氰菊酯对钠通道电流的抑制作用强于theta体氯氰菊酯。