体内致敏的树突状细胞诱导特异性抗肿瘤免疫的基础研究

目的证实树突状细胞（dendritic cells,DC）可在体内通过吞噬凋亡肿瘤细胞获取抗原物质,探讨其在肿瘤免疫治疗中的意义.方法以615小鼠的前胃癌细胞株造模,在体外用rmGM-CSF和rmIL-4从荷瘤小鼠骨髓细胞分化、诱导未成熟树突状细胞.分为4组：小剂量化疗组、树突状细胞组、小剂量化疗＋树突状细胞组和对照组,以BAX试剂盒检测肿瘤细胞凋亡.在瘤体内注射树突状细胞,观察给药侧瘤体及对侧瘤体体积,生存期,和特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTLs）对肿瘤细胞的特异性杀伤作用.结果小剂量化疗能诱导肿瘤细胞凋亡.小剂量化疗后瘤内应用树突状细胞,给药侧瘤体及对侧瘤体体积明显缩小（P＜0.05）,小鼠的生存率提高,体内凋亡肿瘤细胞致敏的DC诱导的CTL对MFC有显著的杀伤作用,在效靶比为40：1、20：1、10：1和5：1时72 h的杀伤率分别为87.64%、70.32%、34.63%和13.87%.并能特异性杀伤小鼠前胃癌细胞MFC（P＜0.01）.结论体外诱导分化的未成熟DC,能于体内捕获小剂量化疗诱导的凋亡肿瘤细胞所携带的肿瘤抗原,诱导机体特异性抗肿瘤免疫反应.     

树突状细胞对小剂量化疗疗效影响的基础研究

目的 研究树突状细胞对小剂量化疗疗效的影响,探讨小剂量化疗的可能机制.方法 以615小鼠的前胃癌细胞株(MFC)造模,在体外用rmGM-CSF和rmIL-4从荷瘤小鼠骨髓细胞分化、诱导未成熟树突状细胞.分为4组:小剂量化疗组、树突状细胞组、小剂量化疗+树突状细胞组、对照组,以BAX试剂盒检测肿瘤凋亡情况.在瘤体内注射树突状细胞,计算抑瘤率、特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的增殖及其对肿瘤细胞的特异性杀伤作用.结果 小剂量化疗能诱导肿瘤细胞凋亡,BAX 基因产物表达增多.注射侧抑瘤率小剂量化疗+DC组、小剂量化疗组、DC组分别为100%、67.22%和57.98%.对侧抑瘤率小剂量化疗+DC组、小剂量化疗组、DC组分别为87.58%、59.69%和48.24%.体内凋亡肿瘤细胞致敏的DC能显著刺激T淋巴细胞增殖,其诱导的CTL对MFC有显著的杀伤作用,在效靶比为40∶ 1、20∶ 1、10∶ 1和5∶ 1时72 h杀伤率分别为87.64%、70.32%、34.63%和13.87%.并能特异性杀伤小鼠前胃癌细胞MFC(P<0.01).结论 小剂量化疗的机制与肿瘤细胞凋亡及免疫促进有一定的相关.     

双歧杆菌及其发酵液的抗肿瘤机制的研究

目的 通过比较双歧杆菌及其发酵液的抗肿瘤作用,对其抑瘤作用和相关机制进行初步探讨。方法 取BALB／c小鼠,分别予H22细胞和S180细胞腹腔荷瘤,荷瘤后给予不同的治疗。分别观察2种肿瘤细胞荷瘤小鼠的生存期。右腋下荷瘤后,进行病理切片观察。MTT法计算给予不同方法后的抑瘤率。并计算淋巴细胞转化率。制备电镜标本。观察其超微结构。结果 双歧杆菌死菌液、活菌液能够延长荷瘤小鼠的生存期,而双歧杆菌发酵液不能延长其生存期,病理切片可见作用后的肿瘤组织内部和间质有大量炎性细胞浸润。双歧杆菌死菌液、活菌液对肿瘤细胞株有抑杀作用。电镜观察死菌液作用后的H22细胞可见典型的凋亡表现。结论 双歧杆菌死菌液、活菌液在体内外均有较好的抑瘤作用,其发酵液并未显示出抑瘤作用。说明双歧杆菌的抗肿瘤作用主要来源于菌体的作用。     

靶向survivin的siRNA对胃癌BGC-823细胞增殖和转移能力的影响

目的探讨沉默生存素（survivin）基因表达的干扰RNA对人胃癌BGC-823细胞增殖和成瘤能力的影响。方法应用已经在细胞上验证能够有效沉默survivin的小分子干扰RNA（shRNA-survivin-1）,并在体外实验的基础上,建立稳定表达干扰RNA细胞系,进一步探讨干扰RNA稳定表达对胃癌BGC-823细胞生长和裸鼠移植成瘤的影响。结果 shRNA-survivin-1有效沉默人胃癌BGC-823细胞survivin mRNA的表达,成功筛选shRNA-sur-vivin-1稳定表达细胞株BGC/siRNA-1细胞,实验表明,BGC/siRNA-1细胞的生长曲线缓慢上升,细胞增殖能力下降;BGC/siRNA-1细胞裸鼠移植成瘤体积与对照组相比,明显减小（P〈0.05）。结论 shRNA-survivin-1可以沉默survivin基因的表达,可以显著抑制胃癌BGC-823细胞的增殖,并降低胃癌BGC-823细胞的成瘤能力,本研究为靶向survivin的RNA干扰在胃癌的基因治疗提供了有力的理论依据和技术储备。 更多还原     

靶向survivin的siRNA对胃癌BGC-823细胞增殖的影响

目的探讨干扰RNA沉默生存素（survivin）基因表达对人胃癌BGC-823细胞增殖和凋亡的影响。方法设计并合成3条靶向survivin的小分子干扰RNA（siRNA）,构建表达性干扰RNA质粒（shRNA）——shRNA-survivin-1、shRNA-survivin-2和shRNA-survivin-3,分别转染胃癌BGC-823细胞,实时定量PCR检测干扰RNA沉默survivin mRNA表达效果,Westernblot观察对胃癌BGC-823细胞survivin蛋白质表达的抑制,MTT（四甲基偶氮唑盐）比色法分析检测细胞生长抑制率,流式细胞计数检测各组细胞周期和凋亡率,探讨干扰RNA对胃癌BGC-823细胞生长的影响。结果在体外,shRNA-survivin-1有效沉默人胃癌BGC-823细胞survivin mRNA的表达,使sur-vivin mRNA相对水平明显降低（P〈0.05）,survivin蛋白质表达抑制,72h细胞生长抑制率达74.92%（P〈0.05）,shRNA-survivin-1使G2/M期细胞百分比明显增加,凋亡率显著增加（P〈0.05）。结论 shRNA-survivin-1可以沉默survivin基因的表达,可以显著抑制胃癌BGC-823细胞的增殖,在一定程度上诱导其自发凋亡。本研究为靶向sur-vivin的RNA干扰在胃癌的基因治疗提供了有力的理论依据和技术储备。