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16S~23S rDNA间隔区序列在分枝杆菌分类鉴定中的应用研究 总被引:1,自引:0,他引:1
采用聚合酶链反应(PCR)技术对分枝杆菌16S ̄23S rDNA间隔区序列进行扩增,其产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE),并通过计算机聚类分析,在基因水平上评价其对分枝杆菌分类与鉴定的意义。退火温度45℃时,PCR扩增的敏感性为500fg/μL,而50℃时的敏感性为5pg/μL。已通过对22种分枝杆菌和9种非分枝杆菌的特异性实验,结果表明:扩增条带多集中在300 ̄600bp之间,多数受试快速生长 相似文献
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【目的】探讨异烟肼(isoniazid,INH)、链霉素(streptomycin,SM)单耐药结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)与INH/SM多耐药MTB蛋白质组差异。【方法】应用i TRAQ结合Nano LC-MS/MS定量蛋白质组学技术,分析临床分离INH、SM或INH/SM耐药MTB与H37Rv标准株间均表达差异蛋白;并以INH/SM耐药MTB与H37Rv比值为对照,相对定量分析单耐药与多耐药MTB蛋白表达差异倍数;运用DAVID 6.7分析差异蛋白生物功能;STITCH 5.0分析差异蛋白与INH和SM相互作用。【结果】与H37Rv标准株比较,58个蛋白在INH、SM耐药与INH/SM耐药MTB间均有表达差异,共同差异蛋白生物功能主要为氧化还原酶活性和转移酶活性;主要参与丙酸代谢信号通路。共同差异蛋白中,与INH/SM耐药MTB比较,Rv2986c和Rv1908c在INH、SM耐药MTB均表达上调1.25倍;Rv3133c和Rv0577则均表达下调0.7倍;生物信息学预测发现以上4种蛋白可直接或间接与INH、SM进行相互作用。【结论】INH、SM单耐药和INH/SM多耐药MTB蛋白表达谱有较大差异,蛋白Rv2986c、Rv1908c、Rv3133c和Rv0577表达水平及相互作用可能与INH和SM耐药有关。 相似文献
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目的探讨脐带间充质干细胞的外泌体的获取与鉴定方法。方法通过组织块贴壁法从胎儿脐带分离和培养脐带间充质干细胞并通过RiboTMExosome Isolation Kit收集外泌体,采用电镜和流式细胞仪鉴定外泌体。结果第二代脐带间充质干细胞表面CD45、CD34和HLA-DR呈阴性表达,CD29、CD44和CD105呈阳性表达;在透射电镜下观察到脐带间充质干细胞外泌体呈圆形或椭圆形,大小不均匀,直径30~100 nm,有完整的膜结构,内含低密度物质;流式细胞检测外泌体CD9、CD63、CD81和CD83呈阳性表达。结论在培养脐带间充质干细胞的培养基中可以收集到外泌体,可以通过电镜和流式细胞仪对脐带间充质干细胞的外泌体进行鉴定。 相似文献
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结核分枝杆菌培养物不同组份蛋白质组研究 总被引:6,自引:0,他引:6
将结核分枝杆菌H37RV株在苏通培养基内,37℃培养21d,然后将培养物分成上清液(A)、细胞浆(B)和细胞膜?蛋白质样品。以pH3.0~10.0的IPG预制胶条等电聚焦电泳为第一向,SDSPAGE为第二向进行双向电泳(2DE)、银染。经扫描、计算机处理。A组份的部分蛋白质斑点采用质谱仪进行蛋白质鉴定。A、B和C 3个组份蛋白质斑点总数分别为907、884和681;3个组份蛋白质分子量分布基本相似,约70.5%~74.4%在10~49kD之间;蛋白质等电点(pH)A、B两组份分布基本相似,约80.9%~83.5%在pH3.0~6.4之间,而C组份pH7.6~10.0之间的蛋白质斑点数比A和B两组分略多;A、B和C 3个组份表达丰度较高的蛋白质斑点数占各组蛋白质斑点总数的比例分别为7.8%、27.4%和2.8%,蛋白质等电点90.0%均分布在pH3.0~6.4范围内。B组份蛋白质分子质量73.1%分布在10~49kD之间,比A、B两组份略高。A组份14个蛋白质斑点经肽质量指纹谱分析,其中,9个点有同源性的或推测的蛋白质功能,5个蛋白质功能不清楚。总之,初步获得了结核分枝杆菌H37RV株在上述体外培养条件下收获的培养物的上清液、细胞浆、细胞膜蛋白质组2DE图谱及其特点,为该菌功能基因组研究提供蛋白质组信息。 相似文献
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HLA-G参与骨髓间充质干细胞的抑制作用机制探讨 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:探讨人骨髓间充质干细胞(MSC)在活体肾移植供受者间的混合淋巴细胞培养(MLR)中的作用机制,证明人白细胞抗原(HLA)-Ⅰ类分子HLA-G参与了MSC的免疫调节作用。方法:从人骨髓中分离培养MSC,采用形态学观察及流式细胞术分析鉴定后,加入活体肾移植供受者间的MLR,观察MSC的HLA-G表达及对T细胞增殖的影响,淋巴细胞增殖实验采用MTT法。结果:MSC细胞表面和胞浆内均表达HLA-G,流式细胞术分析细胞表面HLA-G平均表达率为37.3%,胞浆内HLA-G平均表达率为65.1%,ELISA法检测细胞培养上清中可溶性HLA-G含量为18.9ng/mL。将MSC和培养上清液加入活体肾移植供受者间的MLR体系中,均使得T细胞抑制率增高;而加入HLA-G特异性抗体,MSC的抑制率降低。结论:MSC表面和胞浆内均有HLA-G表达,在其培养上清中检测到由MSC分泌的可溶性HLA-G5;MSC表达和分泌的HLA-G是其发挥抑制功能的关键因素之一。为MSC在预防器官移植术后排斥反应的临床应用提供了理论依据。 相似文献
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[目的]发现结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)链霉素耐药相关的潜在菌体蛋白.[方法]以结核分枝杆菌临床分离链霉素敏感株01105和结核分枝杆菌H37Rv为对照,采用iTRAQ技术和生物信息学鉴定并相对定量结核分枝杆菌临床分离链霉素耐药株01108菌体蛋白,并通过WEGO功能注释聚类分析01108菌株差异表达蛋白的细胞组分、分子功能和生物进程.[结果]01108菌株分别与01105菌株和H37Rv菌株比较差异表达蛋白为194个和146个,01108菌株与01105菌株和H37Rv比较均差异表达蛋白121个(共同差异表达蛋白).差异表达蛋白理论相对分子量和等电点分布广泛,其生物进程主要参与中间代谢、呼吸作用和脂质代谢,分子功能主要为催化活性功能和结合功能.共同差异表达蛋白:7个核糖体蛋白(Rv2785c,Rv0056,Rv0641,Rv0652,Rv0701,Rv1630和Rv2442c)在01108菌株中表达下调;7个蛋白在01108菌株中显著差异表达(上调大于1.20倍或下调小于0.55倍),分别为巯基过氧化物酶(Rv1932)、酰基载体蛋白脱氢酶(Rv0824c)、30S核糖体蛋白S15 (Rv2785c)、丙酮酸脱氢酶E2部分(Rv2215)、双组份转录调控蛋白(Rv3133c)以及假定未知蛋白(Rv2466c和Rv2626c).[结论]iTRAQ发现了链霉素耐药结核分枝杆菌相对于链霉素敏感结核分枝杆菌和H37Rv共同差异表达蛋白,为进一步探讨结核分枝杆菌链霉素耐药机制奠定了基础. 相似文献
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