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1.
葡萄糖异构酶(glucoseisomerase,GI)是使用量最大的工业酶之一,可用于高果糖浆的生产,也可以用含木聚糖物质及废料为底物发酵生产乙醇,具有重要的经济价值.本文选择了表达载体pBV220[1],利用PCR方法删除了原表达质粒pTKDGI1中GI结构基因5′端多余的核苷酸,并添加了合适的酶切位点,重新构建了能在大肠杆菌DH5α中高效表达GIG138P的表达质粒pBZGI1.传代实验表明,新表达体系的稳定性明显优于原表达体系.粗酶液经热处理、DEAESepharoseFF和分子筛Se…  相似文献   
2.
7号淀粉酶链霉菌M1033菌株木糖异构酶晶体结构研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
7号淀粉酶链霉菌M1033菌株木糖异构酶(SDXyI).19nm分辨率晶体结构已经解出.晶体空间群为I222,晶胞参数为a=9.884nm,b=9.393nm,c=8.798nm.参考锈赤链霉菌木糖异构酶(SRXyI)的晶体结构模型,通过分析晶体密堆积关系和晶体学R因子搜索,获得了SDXyI晶体结构的初始模型.采用PROLSQ软件包使用0.60~0.19nm分辨率衍射数据对模型进行了修正.最终模型的晶体学R因子为0.177,键长键角均方根偏差分别为0.0019nm和2.1°.与SRXyI相比较,SDXyI整体构象未发生明显变化,活性中心构象有显著差异.  相似文献   
3.
以双引物法对葡萄糖异构酶(GI)基因进行定点突变,将突变体基因于大肠杆菌中表达,获得了GI双点突变体GIK253RA198C.研究K253R和A198C双点突变对GI的结构和性质的作用,结果表明GIK253RA198C的热稳定性明显下降,最适反应温度降低5℃.文章从结构和机制上解释了为何同是K253R突变,对SM33 GI和密苏里游动放线菌GI的热稳定性产生不同的影响,认为这是由于Lys253在两种GI结构的位置上存在微小差异,从而使引入的Arg对亚基间的相互作用产生了相反效应所引起.  相似文献   
4.
The crystal structures of Streptomyces diastaticus No. 7 strain M1033 xylose isomerase (SDXyI) have been analysed and refined at 0.19nm. The crystal space group is I222, with unit cell dimensions of a=9.884 ran, b=9.393nm and c=8.798nm. Based on the coordinates of the Streptomyces rubiginosus xylose isomerase (SRXyI), the initial model of SDXyl was built up by the dose packing analysing and R-factor searching and refined by PROLSQ to a final R-factor of 0.177 with the rms deviations of bond lengths and bond angles of 0.001 9nm and 2.1°, respectively. No significant global conformation change existed between SRXyI and SDXyI except the local conformation in the active site.  相似文献   
5.
木糖异构酶的结构及蛋白质工程   总被引:2,自引:0,他引:2  
  相似文献   
6.
K253R和N184V点突变对葡萄糖异构酶热稳定性的影响   总被引:3,自引:1,他引:2  
用人工合成的寡核苷酸突变引物,以双引物法于重组M13mp19载体上进行定点突变,分别得到了葡萄糖异构酶的突变体GIK253R和GIN184V。测定它们的热稳定性,并将之与野生型酶比较,结果表明:(1)GIK253R于70℃、80℃下的热稳定性小于野生型,但在70℃、1mol/LL-鼠李糖中,两者的失活速度相近。另外;GIK253R的比活是野生型的1.5倍。(2)GIN184V的比活和热稳定性都远低于野生型,Asn184为酶活性中心构象的维持所必需.本文还根据动力学数据和分子结构模型对以上结果作了初步分析.  相似文献   
7.
高效表达葡萄糖异构酶的大肠杆菌工程菌K38/pGPI-2,pTKD-GI菌株,在玉米浆培养基中能高效合成葡萄糖异构酶,观察了细菌生长的细胞浓度(OD)、pH和酶产生的动态变化。玉米浆培养基成本低、制备工艺简单,在50L发酵罐中酶活力为143u/mL,比在LB培养基中高约10倍。用超声波破碎细胞液作酶源吸附于大孔阴离子交换树脂制成固定化葡萄糖异构酶、其酶活力达到10200u/g(干)。  相似文献   
8.
从已克隆的含7号淀粉酶链霉菌M1033菌株产葡萄糖异构酶基因的质粒pUB中,用DdeI和Kpnl酶解,分离出酶结构基因,以平端方式与大肠杆菌质粒pT7-7连接,构建了重组表达质粒pTKD-GI。将pTKD-GI转化到特异大肠杆菌寄主K38,经42℃热诱导,所产葡萄糖异构酶占菌体可溶性蛋白35%。通过DEAE-A50柱和G-150柱层析,发酵液可获电泳纯蛋白34mg/L。  相似文献   
9.
用蛋白质工程方法改变葡萄糖异构酶最适pH和最适温度   总被引:5,自引:2,他引:3  
用寡核苷酸诱导的定点突变方法构建了葡萄糖异构酶基因的突变体(N184D和A198C)。含突变体的重组质粒pTKD-GI1(N184D)和pTKD-GI2(A198c)在E.coliK38菌株中表达,用DEAE-Sepharose FF和Sephacryl S-300HR柱层析分离纯化突变酶。与野生型葡萄糖异构酶比较实验表明:(1)突变酶N184D的最适pH值下降了1个单位;等电点下降了0.6个单位  相似文献   
10.
木糖异构酶的结构及蛋白质工程肖亚中,伍传金,崔涛(中国科学技术大学生物系合肥230026)关键词木糖异构酶,结构与功能,蛋白质工程木糖异构梅(D-XyloseIsomerase,EC5。3。1。5,下简称XI)催化五碳D-木糖转化为D-木酮糖,在体外亦能催化六碳D-葡萄糖至D-果糖的异构化反应[1,2]。该反应是工业上大规模以淀粉制备高果糖浆的关键步骤[3],故习惯上将木糖异构酶称为葡萄糖异构酶 。  相似文献   
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