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葡萄糖异构酶(glucoseisomerase,GI)是使用量最大的工业酶之一,可用于高果糖浆的生产,也可以用含木聚糖物质及废料为底物发酵生产乙醇,具有重要的经济价值.本文选择了表达载体pBV220[1],利用PCR方法删除了原表达质粒pTKDGI1中GI结构基因5′端多余的核苷酸,并添加了合适的酶切位点,重新构建了能在大肠杆菌DH5α中高效表达GIG138P的表达质粒pBZGI1.传代实验表明,新表达体系的稳定性明显优于原表达体系.粗酶液经热处理、DEAESepharoseFF和分子筛Se… 相似文献
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7号淀粉酶链霉菌M1033菌株木糖异构酶晶体结构研究 总被引:1,自引:0,他引:1
7号淀粉酶链霉菌M1033菌株木糖异构酶(SDXyI).19nm分辨率晶体结构已经解出.晶体空间群为I222,晶胞参数为a=9.884nm,b=9.393nm,c=8.798nm.参考锈赤链霉菌木糖异构酶(SRXyI)的晶体结构模型,通过分析晶体密堆积关系和晶体学R因子搜索,获得了SDXyI晶体结构的初始模型.采用PROLSQ软件包使用0.60~0.19nm分辨率衍射数据对模型进行了修正.最终模型的晶体学R因子为0.177,键长键角均方根偏差分别为0.0019nm和2.1°.与SRXyI相比较,SDXyI整体构象未发生明显变化,活性中心构象有显著差异. 相似文献
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以双引物法对葡萄糖异构酶(GI)基因进行定点突变,将突变体基因于大肠杆菌中表达,获得了GI双点突变体GIK253RA198C.研究K253R和A198C双点突变对GI的结构和性质的作用,结果表明GIK253RA198C的热稳定性明显下降,最适反应温度降低5℃.文章从结构和机制上解释了为何同是K253R突变,对SM33 GI和密苏里游动放线菌GI的热稳定性产生不同的影响,认为这是由于Lys253在两种GI结构的位置上存在微小差异,从而使引入的Arg对亚基间的相互作用产生了相反效应所引起. 相似文献
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The crystal structures of Streptomyces diastaticus No. 7 strain M1033 xylose isomerase (SDXyI) have been analysed and refined at 0.19nm. The crystal space group is I222, with unit cell dimensions of a=9.884 ran, b=9.393nm and c=8.798nm. Based on the coordinates of the Streptomyces rubiginosus xylose isomerase (SRXyI), the initial model of SDXyl was built up by the dose packing analysing and R-factor searching and refined by PROLSQ to a final R-factor of 0.177 with the rms deviations of bond lengths and bond angles of 0.001 9nm and 2.1°, respectively. No significant global conformation change existed between SRXyI and SDXyI except the local conformation in the active site. 相似文献
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K253R和N184V点突变对葡萄糖异构酶热稳定性的影响 总被引:3,自引:1,他引:2
用人工合成的寡核苷酸突变引物,以双引物法于重组M13mp19载体上进行定点突变,分别得到了葡萄糖异构酶的突变体GIK253R和GIN184V。测定它们的热稳定性,并将之与野生型酶比较,结果表明:(1)GIK253R于70℃、80℃下的热稳定性小于野生型,但在70℃、1mol/LL-鼠李糖中,两者的失活速度相近。另外;GIK253R的比活是野生型的1.5倍。(2)GIN184V的比活和热稳定性都远低于野生型,Asn184为酶活性中心构象的维持所必需.本文还根据动力学数据和分子结构模型对以上结果作了初步分析. 相似文献
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用蛋白质工程方法改变葡萄糖异构酶最适pH和最适温度 总被引:5,自引:2,他引:3
用寡核苷酸诱导的定点突变方法构建了葡萄糖异构酶基因的突变体(N184D和A198C)。含突变体的重组质粒pTKD-GI1(N184D)和pTKD-GI2(A198c)在E.coliK38菌株中表达,用DEAE-Sepharose FF和Sephacryl S-300HR柱层析分离纯化突变酶。与野生型葡萄糖异构酶比较实验表明:(1)突变酶N184D的最适pH值下降了1个单位;等电点下降了0.6个单位 相似文献
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木糖异构酶的结构及蛋白质工程肖亚中,伍传金,崔涛(中国科学技术大学生物系合肥230026)关键词木糖异构酶,结构与功能,蛋白质工程木糖异构梅(D-XyloseIsomerase,EC5。3。1。5,下简称XI)催化五碳D-木糖转化为D-木酮糖,在体外亦能催化六碳D-葡萄糖至D-果糖的异构化反应[1,2]。该反应是工业上大规模以淀粉制备高果糖浆的关键步骤[3],故习惯上将木糖异构酶称为葡萄糖异构酶 。 相似文献
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