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1.
抗菌肽AD与haFGF融合基因的合成及其表达   总被引:9,自引:2,他引:7       下载免费PDF全文
通过PCR技术和体外DNA重组技术将CecropinAD连接在haFGF改构体的5′端,构建成融合基因CADAF。将其克隆到表达载体pET3c上,然后转化到BL21(DE3)中经IPTG诱导表达。经DNA序列分析,合成的CADAF基因序列与设计序列一致。构建的CADAF基因在BL21(DE3)中获得了表达 。  相似文献
2.
《基因工程制药》教学改进的探索与实践   总被引:5,自引:3,他引:2       下载免费PDF全文
袁辉  李校堃  刘洁生   《微生物学通报》2004,31(4):125-127
基因工程制药在现代制药业中越来越重要 ,为了教好这门课 ,笔者从整编教材开始 ,带领学生参观工厂 ,应用多种讲义形式 ,采用多种教学方法 ,借助多媒体教学手段 ,取得了令学生满意的教学效果。  相似文献
3.
植物生物反应器的研究进展   总被引:5,自引:0,他引:5       下载免费PDF全文
利用植物生物反应器生产外源蛋白是一个有吸引力的廉价生产系统,以下介绍了植物生物反应器的不同表达系统,及其各个系统的发展进程和研究现状等。重点论述了应用植物各大表达系统生产疫苗、抗体和医用蛋白等方面的情况以及本实验室在这一领域的研究情况。随着该领域研究的进展,植物生物反应器用于生产低成本药用蛋白的产业化将显示出越来越良好的发展前景。  相似文献
4.
SUMO蛋白酶活性片段的表达、纯化及活性测定   总被引:5,自引:2,他引:3       下载免费PDF全文
利用PCR技术人工合成编码酿酒酵母泛素样特异性蛋白酶1 (Ubiquitin-like specific protease 1,Ulp1)第403到621个氨基酸残基之间的DNA片段Ulp1p,并连接到大肠杆菌表达载体pET-3c中,构建出重组表达质粒pET-Ulp1p。将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,氨苄青霉素抗性筛选转化子。经IPTG诱导4h后, SDS-PAGE结果显示,Ulp1p为可溶性表达,表达量占菌体总蛋白的50.8%。通过Ni-NTA凝胶亲和层析和G-25凝胶层析联用可以获得纯度大于95%的Ulp1p。Western-blotting分析表明,Ulp1p能与6xHis抗体产生免疫反应。以重组蛋白SUMO-hEGF(人表皮生长因子)和GST-SUMO-MT(金属硫蛋白)为底物进行酶切分析,结果显示,Ulp1p能特异性水解这两种SUMO融合蛋白,其比活为1.386 x104U/mg。  相似文献
5.
鸡传染性支气管炎病毒(IBV)河南分离株H,经SPF鸡胚增殖,差速离心纯化病毒,SDS-蛋白酶K法抽提病毒RNA。参照IBV Bcaudette株纤突蛋白S1基因序列设计并合成引物,以其进行RT—PCR,成功地扩增出IBV H株S1基因。扩增产物经Bst YⅠ Hae Ⅲ和Pst Ⅰ酶切分析,结果表明,IBV H株S1基因的RFLP图谱与M41株S1基因的完全一致,初步断定IBV H株为Mass血清型。将IBVH株S1基因克隆于pGEM—T载体中进行序列分析,结果表明该基因全长为1611bp(从ATG到S前体蛋白裂解位点),与标准株M41和Beaudette的S1基因序列相比较,同源率分别达到97.39%和97、27%。将IBV H株S1基因亚克隆到pPICZ—A表达载体,转化毕赤酵母中,SDS—PAGE实验证实了IBV H株S1基因在毕赤酵母中得以表达,进一步用鸡抗IBV血清做Westernblot检测.证实了表达产物的抗原特异性。  相似文献
6.
外源性核酸对机体作用的研究进展   总被引:3,自引:0,他引:3  
刘洁生  李校堃  姚成灿 《生命科学》2002,14(4):226-228,241
人们曾一度认为核酸不是人体的必需营养成分,但近些年来大量研究资料表明,核酸(包括DNA、RNA、核苷酸和核苷)对维持机体的正常功能有重要作用,是特定生理条件下不可缺少的营养成分。作者主要对外源性核酸在机体营养、免疫调节和疾病防治等方面的功能做一简要综述。  相似文献
7.
FGF-1改构体对小鼠脾细胞增殖与凋亡的影响   总被引:3,自引:1,他引:2       下载免费PDF全文
目的:主要探讨非促分裂改构人酸性成纤维细胞生长因子(MrhFGF-1)对balb/c小鼠脾细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用3H-TdR掺入的方法检测MrhFGF-1同野生型hFGF-1相比对脾细胞增殖的影响,实验组分为(1)对照组;(2)FGF-1处理组;(3)ConA处理组;(4)FGF-1+ConA处理组。用流式细胞仪定量分析MrhFGF-1对脾细胞的凋亡保护作用,(1)对照组;(2)DEX处理组;(3)DEX+FGF-1(hFGF-1、rhFGF-1、MrhFGF-1)处理组。结果表明,利用DNA重组技术构建的一种非促分裂FGF-1突变体MrhFGF-1和野生型FGF-1相比,对脾细胞的促细胞增殖能力明显降低,但其对细胞凋亡保护作用的影响并无显著性变化,说明FGF-1的促细胞增殖能力和细胞凋亡保护信号通路并非由同一信号通路来实现的。  相似文献
8.
利用PCR引物延伸的方法合成了分子伴侣Sumo和抗真菌肽Drosomycin的融合基因,将其插入到表达载体pET-3c中,构建出重组表达质粒pET-3c-SD,并转化至大肠杆茵BL21(DE3)中。筛选重组转化子,进行表达条件的优化和表达产物的可溶性分析。结果表明在30℃条件下,用0.5mM IPTG诱导3h 后,目的蛋白表达量最高,约占菌体总蛋白的22%,其中可溶性蛋白超过了目的蛋白的80%。经过Ni-NTA纯化后,融合蛋白的纯度可达95%以上。抑菌实验表明,该融合蛋白对白僵菌(Beauveria bassiana)具有一定的抑真菌活性。本研究证实了使用分子伴侣Sumo融合表达对具有多个二硫键的小分子多肽的表达是非常有效的。  相似文献
9.
IBV广东分离株GD05 S1基因的克隆、鉴定及其表达   总被引:2,自引:0,他引:2  
鸡传染性支气管炎病毒(Infectious Brochitis virus,IBV)属于冠状病毒科冠状 病毒属,可引起鸡呼吸道、输卵管、肾脏、肠道及腺胃等多部位病变.近年来,由于新的I BV变异毒株不断出现,从而导致鸡传染性支气管炎病的不断爆发,造成严重的经济损失 [1, 2]}.IBV的基因组为单股RNA,主要编码3种主要结构蛋白:纤突蛋白(S)、膜蛋白(M) 和 核衣壳蛋白(N),其中S蛋白成熟裂解为S1和S2两个蛋白亚基.S1蛋白是IBV的主要免疫原 基因,可刺激机体产生中和抗体,决定病毒的组织亲嗜性,在病毒血清学分类中起主要作用 [1,3].  相似文献
10.
一种抗菌肽和aFGF融合蛋白的构建和表达   总被引:2,自引:2,他引:0       下载免费PDF全文
利用PCR技术扩增出带有凝血酶Xa因子切割位点的天蚕素蜂毒素杂合肽和aFGF的融合基因,插入大肠杆菌表达载体pET-3c中,构建出表达质粒pET-aF-CM,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,氨苄青霉素抗性筛选重组转化子。IPTG诱导4h后,以包涵体形式表达的融合蛋白约占菌体总蛋白的17%。将包涵体溶解后透析复性,并利用肝素亲和层析纯化,得到电泳纯的融合蛋白。Western blot分析表明,该蛋白能与aFGF抗体产生免疫反应。MTT法检测显示,融合蛋白具有促3T3Bal/b细胞分裂活性,其比活为1.471×106IU/mg。利用凝血酶Xa因子裂解融合蛋白,可以获得抗菌肽和含凝血酶Xa因子裂解序列的aFGF蛋白。分子筛回收含杂合抗菌肽,抑菌活性检测表明其对大肠杆菌K12D31具有明显抑菌活性。微量稀释法检测结果表明,回收的抗菌肽对大肠杆菌DH5α、大肠杆菌K12D31、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和绿脓杆菌的MIC分别达6.25μg/ml、10μg/ml、2.5μg/ml、1.25μg/ml、0.625μg/ml和5μg/ml。  相似文献
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