微波法快速提取放线菌基因组DNA

原有的放线菌基因组DNA提取方法费时、费力、费用高，且对极端环境放线菌成功率较低。利用微波热振惊提取固体培养基表面放线菌菌落基因组DNA，具有快速、简便、费用低廉等优点。所得的基因组DNA可作为PCR反应的模板进行16S rRNA基因有效扩增。这为大量放线菌菌株的快速鉴别和系统分类创造了条件。  

放线菌分离方法的研究Ⅰ．抑制剂的选择

抑制剂的选择是放线菌分离工作必须解决的一个重要问题。研究了重铬酸钾对放线菌、细菌、真菌的作用。结果表明，它对土壤真菌、细菌有明显的抑制作用，而对放线菌无抑制作用，可作为选择性分离放线菌的一种高效、便宜的抑制剂。本文还对ＨＶ培养基进行了改良。  

嗜盐放线菌生物学特性初步研究*

通过对从新疆，青海等地采集的盐碱土样中分离获得的43株嗜盐或耐盐放线菌以及4株典型菌株的NaCl耐受实验，对不同浓度的Na^ ，K^ ，Mg^2 ，Ca^2 的选择性实验及pH耐受实验进行了研究。发现耐盐放线菌对Na^ ，K^ ，Mg^2 有广泛的适应性，只有少数耐盐放线菌能在较低浓度的CaCl2条件下生长；嗜盐放线菌对Na^ 有广泛的适应性，多数嗜盐放线菌生长所需的Na^ 可被K^ ，Mg^2 所替代，而不能被Ca^ 所替代，少数嗜盐放线菌的生长离不开Na^ ，对Na^ 有高度的专一性，是专嗜Na^ 的嗜盐放线菌，说明不同嗜盐放线菌对Na^ ，K^ ，Mg^2 ，Ca^2 的适应有选择性。因此，提出自然环境中是否也存在类似的专嗜K^ 或专嗜Mg^2 的嗜盐放线菌的推测。无论是嗜盐还是耐盐放线菌其pH生长范围都在6．0～10之间，生长最适pH7．0～8．0。另外，嗜盐放线菌的分布与分离地点也有一定的相关性。  

云南土壤放线菌生态分布的研究

云南具有极为复杂的地理气候。根据云南省不同的地质、地理、土壤、气候、植被特点选择样区,采集土壤样品,研究了云南不同地区、不同生态环境放线菌的生态分布与植被的关系。将云南土壤放线菌区系划分为热带区系、亚热带高原区系、滇西北高山区系和雪山区系四种类型。对云南土壤放线菌区系的特点进行了讨论。  

嗜盐放线菌的研究进展

嗜盐放线菌是极端微生物的重要组成部分 ,也是一类极具应用前景的微生物资源。就嗜盐菌的分类标准、嗜盐放线菌的分离、分布及系统学研究的历史、现状及其发展趋势、应用前景进行了概述。同时还讨论了嗜盐放线菌的分离及其生理学、分类学研究中存在的问题及困难  

具抗肿瘤活性放线菌菌株YIM 90022的分离和系统发育分析

从青海盐碱土壤样品中分离到一株兼性嗜碱放线菌YIM 90022,该菌株的发酵产物具有很强的体外抗胃癌、肺癌、乳腺癌、皮肤癌、肾癌和子宫癌肿瘤细胞株活性。基于16S rRNA基因序列的系统发育分析表明,菌株YIM90022属于拟诺卡氏属(Nocardiopsis)的成员,与该属的4个有效发表种N.exhalansDSM 44407T,N.prasinaDSM43845T,N.metallicusDSM 44598T和N.listeriDSM 40297T系统发育关系最密切,与其分别以98.8%,98.5%,98.4%和97.8%的16S rRNA基因核苷酸序列相似性聚为一簇。但菌株YIM 90022不与这4个有效种中任何一个单独相聚,形成了一个独立亚分枝。结合形态特征、生理生化特性、细胞化学分类特征,以及rep-PCR基因指纹分析等方面的研究结果,菌株YIM 90022可能为拟诺卡氏菌属的一个潜在新种。菌株YIM 90022在大多数培养基上生长良好,气生菌丝和基内菌丝丰富,在酵母膏麦芽膏琼脂、燕麦片琼脂等培养基中产生可溶性色素。生长pH范围6.0~12.0,最适pH 8.5;能在含0~15%NaCl(W/V)的培养基上生长。  

青海两盐湖细菌多样性研究

用DGGE法和纯培养法，对青海柯柯盐湖、茶卡盐湖底泥及周边土壤样品的细菌多样性进行了研究。结果显示，两个盐湖存在大量的未知细菌, 分离到的纯培养仅占实有细菌的小部分。采用多相分类方法，鉴定了12株纯培养细菌，属5个可能的新种，另有一株菌可能成立一个新属。认为提出新思路、设计新程序，从自然极端环境取样，分离未知菌，是微生物资源开发利用的关键之一。  

免培养法对一热泉细菌多样性的初步研究

应用免培养法（Cultureindependent）对云南腾冲热海大滚锅高温热泉中细菌的多样性进行初步的分析。经过克隆筛选，测定了5个克隆的16S rDNA插入片段的近全序列，系统发育分析的结果表明，它们分属于Bacillus、Hydrogenobacter和Pseudomonas，有一个克隆尚难确定其分类地位，它属于Thermodesulfobacteriaceae科，介于Geothermbacterium属和Thermodesulfobacteria属之间。经PCR扩增出上述5个克隆16S rDNA插入序列中及环境样品总DNA中的16S rDNA V8高变区约600bp片段，进行变性梯度电泳（DGGE）。所得电泳图谱和5个序列的系统发育树不仅表明该高温热泉存在着丰富的细菌多样性，还显示了它们是该高温热泉中细菌的优势物种。  

应用DGGE法对青海相邻两盐湖中细菌多样性的快速检测

分别对青海相邻两盐湖柯柯盐湖、茶卡盐湖土样、泥样进行富集培养后，从中提取的DNA用两套不同的细菌通用引物进行扩增，分别得到包含V8和V9高变区的16SrDNA片断。经变性梯度凝胶电泳(DGGE)分析，结果显示这两个盐湖富集样品中细菌多样性具有较大的差异，而且同一盐湖不同性质样品中的细菌多样性差异也较大，两湖的泥样富集样品中均表现出了稍丰富的多样性。  

微生物多样性及其保育

大量实验证明因原始环境的改变使放线菌多样性急剧减少。在对微生物资源的特点及保护微生物资源的必要性进行分析的基础上，提出了保护微生物资源及其多样性的若干措施。