苹果果肉中抗氰氧化酶(AOX)的分离鉴定

水果果肉的组织特征决定了从果肉中抽提线粒体的方法与其它组织有所不同。采用平面细孔瓜果刨破碎果肉、差速离心、密度梯度纯化等方法能够得到活性较高的线粒体。Brother氧电极能够判断线粒体膜是否完整。利用PAGE凝胶电泳、WesternBlot(AOX单克隆抗体 )等分析手段 ,对‘RoyalGala’苹果中AOX进行了分离和鉴定。结果表明 :‘RoyalGala’苹果果肉线粒体中AOX单体的分子量约在 35～ 37kD之间 ,二聚体约为 90kD左右。这与其它已分离鉴定的产热植物或烟草等线粒体中AOX蛋白的分子量基本一致。     

不同时间采集的小牛血清对CHO-C28细胞培养及表达的影响

通过研究小牛血清对CHO-C28细胞培养及HBsAg表达的影响,探讨小牛血清的不同采集时间对血清质量的影响。采集出生后4、8、12h(未进食)小牛的血清,对CHO-C28细胞进行传代、换液培养,并检测乙肝表面抗原(HBsAg)表达量。结果可见:①在细胞传代4次时,4h采集的血清细胞生长状态良好,8h采集的血清细胞出现明显的衰老,12h采集的血清细胞大面积死亡;②在细胞维持换液方面,4h采集的血清可维持细胞换液25次以上,8h采集的血清可勉强维持20次,12h采集的血清维持细胞换液10次时已大部分死亡;③乙肝表面抗原(HBsAg)表达量的检测结果,同批培养上清,4h采集的血清培养细胞表达量最高。可见,小牛出生后采集血清时间越早越好。     

人APRIL105-250基因的克隆与表达

目的 :克隆并表达人可溶性增殖诱导配体 (sAPRIL ,即人APRIL_105-250) ,为探索其在多种肿瘤细胞的增殖和存活以及促肿瘤形成中的作用奠定基础。方法 :从GENBANK中查找人APRIL蛋白 (编号:07588)序列 ,取其部分胞外 (APRIL_105-250)序列设计引物 ,用RT PCR从扁桃体总RNA中扩增出人APRIL_105-250基因 ,测序后将克隆载体经酶切并构建表达载体 ,在大肠杆菌中表达 ,并纯化蛋白。结果 :经克隆测序后进行同源比较 ,证实所克隆的基因即为人APRIL_105-250 基因。在大肠杆菌中表达量达 43.6% ,获得纯化蛋白。结论 :成功克隆与表达、纯化了人APRIL_105-250基因 ,为深入研究其功能奠定了基础 。     

家蚕近交系遗传纯度的RAPD检测

目的分析家蚕近交系IS-c108A的遗传纯度,为家蚕实验动物化的培育工作提供指导。方法应用经过筛选的20条随机引物对家蚕近交系IS-c108A(F10)的3个蛾区各30个个体和该近交系的亲本系统c108、对照实用化品种871各30个个体的基因组DNA进行RAPD扩增,计算个体间和蛾区间的相似系数及遗传距离。结果家蚕近交系IS-c108A(F10)的3个蛾区内的多态性带频率分别为1.807%、1.841%、1.841%,平均为1.830%;起点亲本c108个体间多态性带频率为7.207%,对照品种871个体间的多态性带频率为7.08%;而近交系IS-c108A与c108之间的多态性带频率为49.20%,c108和871品种之间的多态性带频率为58.33%。家蚕近交系IS-c108A10的3个蛾区内个体之间遗传相似系数的平均值分别为0.99581、0.99555、0.99551,总平均为0.99562。结论家蚕近交系IS-c108A(F10)已具有较高的遗传纯合度,家蚕具有易于获得高纯的有利条件。     

扩增片段长度多态性( AFLP) ——一种新的分子标记技术

AFLP(扩增性片段长度多态性)是一种新的DNA分子标记。与RFLP、RAPD相比,AFLP具有在一次试验中可同时观察到大量的限制性片段的优点。本文阐述了AFLP的原理和方法,综述了AFLP目前在植物遗传育种研究中的应用进展,并对AFLP技术在植物遗传育种中的应用前景提出了初步设想。     

聚焦超声联合抗病毒凝胶对低级别鳞状上皮内病变伴高危型人乳头瘤病毒感染患者的疗效及对阴道微生态的影响

探究聚焦超声联合重组人干扰素α-2b凝胶对低级别鳞状上皮内病变（LSIL）伴高危型人乳头瘤病毒（HPV）感染患者的治疗效果及对患者阴道微生态的影响,为该类患者的治疗提供参考。

前瞻性选取2021年10月至2023年1月我院收治的LSIL伴高危型HPV感染患者共423例,根据治疗方案分为联合组（141例）、对照1组（138例）、对照2组（144例）,其中联合组失访6例,对照1组失访3例,对照2组失访9例,故最终每组各135例患者。对照1组患者给予重组人干扰素α-2b凝胶进行治疗,对照2组患者给予聚焦超声治疗,联合组同时采取对照1组和对照2组的治疗方法进行联合治疗。治疗后1个月对三组患者进行随访,观察比较三组患者阴道流液、阴道排液、腰骶部胀痛、腹痛、阴道分泌物情况;比较三组患者治疗3个月后的临床疗效及HPV感染转阴情况;比较三组患者治疗前后HPV DNA载量水平、症状体征评分、阴道灌洗液炎症因子水平变化以及阴道微环境因子的阳性率。

治疗后1个月,联合组患者阴道流液、阴道排液、腰骶部胀痛、腹痛、阴道分泌物的总发生率均低于对照1组和对照2组（均P＜0.05）。联合组患者治疗后3个月、6个月的有效率高于对照1组和对照2组（均P＜0.05）。联合组患者治疗3个月后HPV感染转阴率（82.22%）、治疗6个月后HPV感染转阴率（94.81%）、末次随访HPV感染转阴率（99.36%）均高于对照1组患者（57.78%、77.03%、84.44%）和对照2组患者（62.96%、85.18%、95.56%）（均P＜0.05）。三组患者治疗3个月、治疗6个月、末次随访时的HPV DNA载量较治疗前均显著降低（均P＜0.05）。三组患者治疗3个月、6个月、末次随访时症状体征评分较治疗前均显著降低（均P＜0.05）,其中联合组治疗后症状体征评分较对照1组、对照2组显著更低（均P＜0.05）。联合组患者治疗3个月、6个月后血清IL-17水平显著低于对照1组、对照2组,IFN-α水平显著高于对照1组、对照2组（均P＜0.05）。三组患者治疗3个月后以及末次随访时过氧化氢（H₂O₂）、白细胞酯酶（LE）、N-乙酰基氨基半乳糖苷酶（NAG）以及唾液酸苷酶（SNA）阳性率较治疗前均显著降低（均P＜0.05）,其中联合组治疗3个月后LE、SNA阳性率较对照1组、对照2组更低（均P＜0.05）。三组患者均未发生严重不良事件。三组患者均出现轻度不良反应（皮疹、皮肤红斑、宫颈管黏连）,停药和对症治疗后好转。不良反应组间对比差异无统计学意义（χ²=2.035,P＞0.05）。

聚焦超声与重组人干扰素α-2b凝胶联合治疗LSIL伴高危型HPV感染患者的疗效显著,提升了HPV转阴率,改善了临床症状及阴道微环境,并增强了患者免疫功能。

     

CO2浓度倍增影响转Bt水稻非靶标害虫褐飞虱的生长发育及取食行为

近年来,大气CO₂浓度升高等全球气候变化和转Bt作物非靶标害虫抗虫性等问题备受关注.大气CO₂浓度升高直接或间接地影响植食性昆虫,而迄今为止有关大气CO₂浓度升高对刺吸式昆虫(同时也是转Bt作物的非靶标害虫)的影响结论不一,且对其刺吸取食行为的影响研究少有报道.本研究利用智能人工气候箱设置CO₂浓度,研究大气CO₂浓度倍增(800 μL·L^-1)对转Bt水稻的非靶标害虫褐飞虱取食行为及其生长发育和繁殖等的影响.结果表明: 大气CO₂浓度倍增对褐飞虱卵和若虫历期、成虫体质量和寿命,以及4龄和5龄若虫的刺吸取食行为等都具有显著影响,但对其繁殖力影响不显著.与对照CO₂浓度(400 μL·L^-1)相比,倍增CO₂浓度处理下褐飞虱的卵和若虫历期及雌成虫寿命分别显著缩短了4.0%、4.2%和6.6%;长翅型成虫比例显著增加了11.6%;初羽化成虫体质量降低,且雌成虫体质量显著降低了2.2%;此外,倍增CO₂浓度处理下褐飞虱4龄和5龄若虫口针的刺探效率都显著增加;其中,N4b波的持续时间分别显著延长了60.0%和50.1%,频次分别显著增加了230.0%和155.9%.可见,CO₂浓度倍增可通过提高褐飞虱的刺吸取食而促进其生长发育,并缩短其世代历期、提高长翅成虫比例,最终导致大气CO₂浓度升高下转Bt水稻的非靶标害虫褐飞虱发生危害严重,并面临其迁飞扩散为害加重的风险.     

氧调节蛋白150在人肝细胞癌中的过度表达及其对凋亡的作用

在前期研究中发现,氧调节蛋白150(ORP150)是与肝细胞癌相关的糖蛋白．进一步研究了ORP150的表达水平与肝细胞癌的相关性．免疫印迹、细胞免疫化学和定量PCR分别在蛋白质水平和mRNA水平检测了ORP150的表达．运用RNA干扰技术检测了其对凋亡和肝细胞癌侵袭性的影响．发现：无论是蛋白质水平还是mRNA水平,与正常肝细胞相比,ORP150在肝细胞癌中表达明显上调;经RNA干扰后,肝细胞癌的凋亡明显增加,但肿瘤细胞的侵袭性无改变．肝细胞癌中,ORP150表达上调,它可能抑制肿瘤细胞的凋亡而促进其生长．ORP150有可能成为肝细胞癌的治疗靶点．