Cleavage of the Carboxyl-Terminus of LEACS2, a Tomato 1-Aminocyclopropane-1-Carboxylic Acid Synthase Isomer, by a 64-kDa Tomato Metalloprotease Produces a Truncated but Active Enzyme

1-Aminocyclopropane-1-carboxylic acid （ACC） synthase （ACS） is the principal enzyme in phytohormone ethylene biosynthesis. Previous studies have shown that the hypervariable C-terminus of ACS is proteolytically processed in vivo. However, the protease responsible for this has not yet been identified. In the present study, we investigated the processing of the 55-kDa full-length tomato ACS （LeACS2） into 52-, 50- and 49-kDa truncated isoforms in ripening tomato （Lycopersicon esculentum Mill. cv. Cooperation 903） fruit using the sodium dodecyl sulfate-boiling method. Meanwhile, an LeACS2-processing protease was purified via multi-step column chromatography from tomato fruit. Subsequent biochemical analysis of the 64-kDa purified protease revealed that it is a metalloprotease active at multiple cleavage sites within the hypervariable C-terminus of LeACS2. N-terminal sequencing and matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight analysis indicated that the LeACS2-processing metalloprotease cleaves at the C-terminal sites Lys^438, Glu^447, Lys^448, Asn^456, Ser^460, Ser^462, Lys^463, and Leu^474, but does not cleave the N- terminus of LeACS2. Four C-terminus-deleted （26-50 amino acids） LeACS2 fusion proteins were overproduced and subjected to proteolysis by this metalloprotease to identify the multiple cleavage sites located on the N-terminal side of the phosphorylation site Ser^460. The results indisputably confirmed the presence of cleavage sites within the region between the α-helix domain （H14） and Ser^460 for this metalloprotease. Furthermore, the resulting C-terminally truncated LeACS2 isoforms were active enzymatically. Because this protease could produce LeACS2 isoforms in vitro similar to those detected in vivo, it is proposed that this metalloprotease may be involved in the proteolysis of LeACS2 in vivo.     

荠菜LOS2基因的克隆与分析

利用RACE-PCR方法从荠菜(Capsella bursa-pastoris)中克隆到了新的LOS2全长基因(Cblos2)。序列分析表明,该基因的全长cDNA为1694bp,拥有一个由444个氨基酸组成的开放读码框,预测的CbLOS2蛋白包括一个烯醇酶N-端结构域、烯醇酶结构域以及与拟南芥的LOS2高度保守的DNA结合域和基因功能抑制域。生物信息学分析表明,Cblos2与LOS2极为相似。冷胁迫适应实验表明,Cblos2基因在荠菜中组成性表达,且其表达与胁迫适应过程密切相关。该研究表明Cblos2是具双重功能的植物烯醇酶基因家族的新成员。     

传染性法氏囊病不同代次细胞毒免疫效果的研究

将从山东省东营分离到的1株传染性法氏囊病病毒(IBDV)野毒(暂命名IBDV SDDY株,经鉴定该株与IBDV STC株具有较高的同源性)经SPF鸡胚传代,然后转为细胞培养,取第20代、21代、25代毒,以1倍剂量(3000TCID50/0.2mL)和5倍剂量不同的免疫剂量,分别在7日龄、14日龄对商品代海蓝褐蛋鸡进行免疫,并于免疫前用IBD-ELISA试剂盒检测IBDV母源抗体水平,于35日龄用传染性法氏囊病病毒超强毒(very virulent Infectious Bursal Disease Virus,vvIBDV)GX 8/99攻毒,在攻毒前再次检测IBDV的抗体水平,攻毒后观察记录各分组鸡的致病率和死亡率,并计算免疫器官体重指数,观察免疫器官的组织损伤情况.试验结果表明3代毒都具有较高免疫原性,但是20代毒仍具有较大的毒性,7日龄接种会引起法氏囊的萎缩,造成持续的组织损伤;21代毒、25代毒保护率高,无免疫抑制,是比较理想的疫苗来源;7日龄免疫较14日龄免疫更易造成组织损伤和免疫抑制,14日龄免疫较为合适.     

扣囊复膜孢酵母β-葡萄糖苷酶基因在毕赤酵母中的克隆与表达

利用PCR技术,从扣囊复膜孢酵母的总DNA中扩增得到β-葡萄糖苷酶（β-Glucosidase）基因 (BGL1),长度为2596 bp,连接到pGEMT载体上,用限制性内切酶切下目的基因,插入到巴斯德毕赤酵母表达载体pPIC9K中,使之位于α-因子信号肽下游,且与之同框, 构建成重组质粒pSHL9K。 通过电转化将重组质粒pSHL9K插入到Pichia pastoris GS115菌株染色体中,获得高效表达BGL1基因的毕赤酵母重组工程菌株。重组酶的最适温度为50℃,最适pH为5.4。培养基中β-葡萄糖苷酶活性最高可达47U/mL。     

使用多态异型酶标记物估计野鲮的遗传变异性

本文首次分析了野鲮鱼 (Labeodyocheilus)等位酶的变异情况。通过对 17个酶系统的研究 ,发现 2 8个可以稳定检测的位点 ,其中 8个位点具有多态性。使用这 8个等位酶位点 ,分析了取自不同河流 ,即Satluj、Yamuna和Tons河的样本的遗传多样性情况。结果显示 ,不同样本间存在显著的遗传异质性 ,各位点的表观杂合度介于 0 0 392 (Yamuna河 )与 0 0 4 87(Tons河 )之间。因此 ,本研究所筛选出的多态性等位酶位点为研究该野鲮鱼的种群遗传结构奠定了基础     

黄原胶寡糖生物活性的研究

利用黄原胶降解菌Cellulom onassp.XT11生产的黄原胶降解酶,对黄原胶进行生物降解,生产具有不同粘度/还原末端比的黄原胶寡糖,并研究了黄原胶寡糖在清除羟基自由基、植物防卫反应中激活因子活性和对植物病原菌抑制能力等方面的生物活性,结果表明黄原胶寡糖具有清除羟基自由基能力,并能激活植物防卫系统以抵御病原菌的侵染,同时对野油菜黄单孢菌也具有抑菌活性。     

不同加工处理条件下香荚兰荚果中二种内源酶的活性变化

香荚兰(VanillaplanifoliaAndr.)成熟荚果经过不同的杀青与烘烤条件处理后,分析其内部的β-葡萄糖甙酶与过氧化物酶的活性的变化,结果表明:经不同的杀青温度与时间处理后,β-葡萄糖甙酶活性都比对照高,而过氧化物酶的活性较对照低;经过不同的烘烤时间与温度处理后,β-葡萄糖甙酶活性与过氧化物酶的活性都比未经任何处理的有显著性地增高。     

植物萜类合酶研究进展

随着植物中许多有价值的萜类化合物被发现和应用于人类生活 ,萜类生物合成途径的研究倍受重视。萜类合酶催化单萜、倍半萜和二萜生物合成 ,即分别催化GPP、FPP和GGPP形成单萜、倍半萜和二萜。本文叙述了近年来在植物萜类合酶催化机理、克隆策略和萜类生物工程的研究进展     

高致病性H5亚型禽流行性感冒病毒血凝素单克隆抗体的制备与初步应用

以禽流感病毒株Ck/HK/Yu22/02（H5N1）作为免疫原,利用常规杂交瘤技术和血凝抑制试验法成功地筛选出6株稳定分泌抗高致病性H5亚型禽流感病毒血凝素的单克隆抗体（单抗）,分别命名为2F2、3C8、3FC1、7C6、10HD4和13G4.经血凝抑制试验法分析,结果发现这6株单抗具有特异性高、反应性强、识别谱宽且互补等特点.基于单抗2F2,初步建立了三种H5N1病毒诊断方法,经评估证实均具有很好的特异性.由此说明,研究制备的抗H5亚型禽流感病毒血凝素单抗可适用于H5N1病毒的诊断.     

从噬菌体展示抗体文库筛选对虾白斑综合征病毒的单链抗体

对虾白斑综合征是一种严重危害对虾养殖业的病毒性疾病.由于目前对其病原体对虾白斑综合征病毒（WSSV）的研究不够深入,所以对WSSV的有效防治仍然是一大难题.为此,用完整的对虾白斑综合征病毒粒子作为靶抗原固相包被,淘选噬菌体展示单链抗体文库,得到两个能够与WSSV结合的单链抗体：E2和H4.单链抗体H4能够结合病毒并抑制病毒对原代培养的对虾淋巴细胞的感染,这些结果表明此单链抗体具有开发为诊断试剂盒和抗病毒药物的潜力.