细胞自噬研究技术进展及其应用

在生理状态下,细胞通过自噬清除衰老细胞器和异常长寿蛋白质,维持自身结构和功能的衡定,参与胚胎发育、免疫调节和延长寿命。病理状态下细胞自噬水平显著升高,以耐受饥饿、缺血和凋亡。自噬功能障碍与某些慢性感染疾病、神经变性疾病、溶酶体贮积症和肿瘤等密切相关。掌握和合理应用自噬研究技术对于提高细胞自噬研究水平有着重要意义。该文对哺乳类细胞自噬研究技术进展及其应用作了概述。     

蓝桉凋落叶分解对菠菜生长及光合特性的影响

通过盆栽试验,模拟蓝桉(Eucalyptus globulus)凋落叶在土壤中分解对受体植物菠菜(Spinacia oleracea)生长及光合特性的影响,设置L30(30 g/盆)、L60(60 g/盆)、L90(90 g/盆)和L120(120 g/盆)4个凋落叶施用水平,对照(CK)不加凋落叶。结果表明:(1)在分解30 d时,低量的凋落叶(L30)未抑制菠菜生物量的积累,而中量和高量处理(L60、L90和L120)下其生物量显著降低(P0.05);在凋落叶分解50 d后,蓝桉凋落叶的化感抑制效应已经减弱,仅L120仍然抑制菠菜生物量的积累;(2)一定量的凋落叶(L30和L60)对菠菜叶绿素的合成有促进作用,而凋落叶超过一定量时(L120)转为抑制作用,在凋落叶分解28 d时相对不明显,40 d后逐渐显现;(3)经凋落叶处理的菠菜叶片胞间CO2浓度(Ci)、气孔导度(Gs)及蒸腾速率(Tr)均显著高于对照(CK)(P0.05),而净光合速率(Pn)在L30处理下最高,L60和L90处理与CK差异不显著,仅L120处理显著低于CK(P0.05);(4)光响应与CO2响应曲线的特征参数表观量子效率(AQY)、最大净光合速率(Pmax)、光饱和点(Lsp)、光补偿点(Lcp)、暗呼吸速率(Rd)、Ru BP表观羧化效率(CE)和光呼吸速率(Rp)在L30处理下高于CK,其余凋落叶处理均低于CK,而CO2饱和点(Csp)、CO2补偿点(Ccp)随凋落叶量的增加而升高。综合各指标可见,少量的蓝桉凋落叶分解(L30)可通过增加叶绿素含量,提高对光和CO2的利用能力促进菠菜的光合作用,进而促进其生长,而凋落叶超过一定量时(L90—L120)则起到相反的作用。     

1个新巨胚等位基因的鉴定与表达分析及其性状考察

该研究以‘超2-10’水稻和‘上师大5号’巨胚水稻为材料,分析了2种水稻的胚重、胚与糙米质量比、巨胚性状的遗传,克隆和分析了其巨胚基因(GE)序列,并对巨胚基因进行了表达分析。结果显示:(1)‘上师大5号’的胚重、胚与糙米质量比均极显著大于‘超2-10’,且‘超2-10’的胚重接近或大于一些已报道的巨胚水稻;(2)‘上师大5号’巨胚表型由1对隐性基因控制,并与韩国巨胚稻‘M-2-565-11-3-B(ge)’属于相同的等位基因突变;(3)‘超2-10’、‘上师大5号’和‘M-2-565-11-3-B(ge)’3种水稻各自具有1个新的GE等位基因,它们的突变位点分别位于启动子、启动子及编码链、编码链;(4)‘上师大5号’启动子及编码链都有突变的GE等位基因(gec),在开花后4~7d的颖果中表达量持续增加,完全不同于只有编码链突变的GE等位基因呈持续下降的表达模式。该研究首次报道了突变在启动子、突变同时发生在启动子及编码链2种新型巨胚等位基因。     

多波长HPLC梯度洗脱法同时测定保安万灵丹中升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、茅术醇、β-桉叶醇和苍术素的含量

目的：建立同时测定保安万灵丹中升麻素苷、5-O- 甲基维斯阿米醇苷、茅术醇、β- 桉叶醇和苍术素含量的方法。方法：采用多波长 HPLC 梯度洗脱法：色谱柱为C18 柱（200 mm×4.6 mm,5 μm）;流动相A 为甲醇- 乙腈（2 : 1）,流动相B 为0.1% 磷酸水溶液,流速为1.0 mL · min-1;进样量为20 μL;检测波长分别为254 nm（用于升麻素苷和5-O- 甲基维斯阿米醇苷）、203 nm（用于茅术醇和β- 桉叶醇）和 340 nm（用于苍术素）。结果：升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、茅术醇、β-桉叶醇和苍术素的线性范围分别为4.30～86.00 mg ·L-（1 r=0.999 4）、5.85～117.00 mg · L-1（r=0.999 7）、16.42 ～ 328.40 mg · L-1（r=0.999 3）、15.16 ～ 303.20 mg · L-1（r=0.999 9）和12.78 ～ 255.60 mg · L-1（r=0.999 5）; 精密度、重复性及稳定性试验中所测各目标组分峰面积的RSD 均小于2.0%;升麻素苷、5-O- 甲基维斯阿米醇苷、茅术醇、β- 桉叶醇和苍术素的平 均加样回收率/RSD(n=6) 分别为97.49％ /1.45％、96.81％ /0.94％、98.60％ /1.65％、97.96％ /1.38％和99.22％ /1.24％。结论：本法操作简便、 结果准确、重复性好,可用作保安万灵丹的质量控制方法。     

EMA3C/SEMA3D基因错义突变对蛋白稳定性和受体亲合力的影响

目的：明确先天性巨结肠患者携带的5 个基因错义突变对Semaphorin 3（Sema3）蛋白自身稳定性和受 体亲合力的影响作用。方法：构建Sema3-Neuropilin-Plexin 配体-受体复合物蛋白质模型,对全部5个错义突变进行定位,通过计 算标准能量功能赋值（驻驻G）和复合物界面值（驻I_sc）预测突变对Sema3 的影响作用。将野生型和突变型AP-tagged Sema3 质粒分 别转染HEK293T 细胞,72 h后收集含有融合蛋白的细胞培养液上清并与分别表达Neuropilin 1（Nrp-1）或Neuropilin 2（Nrp-2）的 COS-7 细胞孵育,洗脱未结合的蛋白后加入碱性磷酸酶底物显色拍片,或提取细胞总蛋白,利用融合蛋白N- 末端含有的碱性磷 酸酶在底物PNPP 存在时可以发生颜色变化的特性,对与受体结合的野生型和突变型AP-Sema3 蛋白进行定量。结果：5 个错义突 变中的4 个都会不同程度地影响相应Semaphorin 3蛋白与其受体Neuropilin 的结合（与Nrp-1 的结合：SEMA3C S329G,V337M, SEMA3D H424Q,V457I,P615T 分别与野生型相比：1.12± 0.15,0.37± 0.03,0.56± 0.07,0.51± 0.05,0.66± 0.05;与Nrp-2 的结合： SEMA3C S329G,V337M,SEMA3D H424Q,V457I,P615T 分别与野生型相比：1.18 ± 0.09,0.37 ± 0.03,0.76 ± 0.01,0.65 ± 0.06,0.85± 0.03,n=3,单因素方差分析,差异有统计学意义),说明它们可能通过严重影响分子通路的信号转导而妨碍蛋白功能的 正常行使。结论：先天性巨结肠患者携带的基因错义突变可不同程度影响蛋白与其受体的结合,提示 Semaphorin 3这类经典的神经元轴突导向因子在功能失常的情况下可能参与先天性巨结肠的发生。     

尾叶桉叶片的离体培养和植株再生

1植物名称尾叶桉(Eucalyptus urophylia). 2材料类别无菌萌发种子苗的幼叶片. 3培养条件萌发培养基:(1)MS 3%蔗糖.诱导分化培养基:(2)MS 6-BA 0.8～1.5 mg·L-1(单位下同) KT 0.5 NAA 0.1 3%蔗糖.丛生芽增殖和生长培养基:(3)MS 6-BA 0.2 NAA 0.02 3%蔗糖.生根培养基:(4)1/2MS NAA 0.5 2%蔗糖;(5)MS NAA 0.5 2%蔗糖;(6)改良H NAA 0.5 2%蔗糖.以上培养基均加入0.65%琼脂,pH 5.8.培养温度(25±2)℃,光照1 6 h·d-1,光照度1900～2000lx.     

尾叶桉叶片氮磷钾钙镁硼元素营养诊断指标

采用临界值法对尾叶桉幼林材积生长进行叶片营养诊断,试验结果表明,氮,磷,钾,钙,镁和硼等营养元素的临界浓度分别为15.3g/kg,1.2g/kg,4.2g/kg,16.1g/kg,2.5g/kg和0.019g/kg;最适浓度范围分别为15.3-18.1g/kg,1.2-1.7g/kg,4.2-5.6g/kg,16.1-19.8g/kg,2.5-3.0g/kg和0.019-0.031g/kg,而对树高生长进行营养诊断时,上选结果稍微有些变化,试验还得到各营养元素比值的临界值和最适范围。     

渤海湾岛屿的丛枝菌根真菌

从渤海湾屿上的天然植被根围土壤中分离到丛标菌根真菌7属35种,其中无柄囊霉属Acaulospora5种,原囊霉属Archaespora1种,内养囊霉各Entrophospora 1种,球囊霉属Glomus属18种,巨孢囊霉属Gigaspora3种,类球囊霉属Paraglomus属1种,盾巨孢囊霉属Scutellospora6种。群生盾巨孢囊霉Scutellospora gregaria和易误巨孢囊霉Gigaspora decipiens为我国的新记录种。标本保藏于莱阳农学院菌根生物技术实验室。     

广东南澳岛不同森林群落的林窗环境对移植树苗生长的影响

在广东南澳岛四个森林群落内移植了大叶相思（Acacia auriculaeformis),尾叶桉（Eucalyptus urophylla)和荷木（Schima superba)三种树苗,通过测定群落内林窗和非林窗生境中的叶面积指数,透光率和幼苗的生长高度,观察林窗环境对移植树苗生长的影响。结果表明：林窗的叶面积指数比非林窗的小;林窗的透光率大于非林窗;各群落的叶面积指数和爱光率有季节性的变化,变化幅度各不同,三种幼苗在林窗内比非林窗的乔木层下生长快;大叶相思和尾叶桉幼苗在林窗内的高度增长量显著大于非林窗下的,荷木虽也存在差异,但不如前两者显著。这些结果反映了不同生态特性的树种对林窗的反应不同。     

肪刺螨属一新种记述及中国已知种检索(中气门目,巨刺螨科)

记述采自海南的小黄蝠Scotophilus temmincki(Horsfield,1824)体表的寄生革螨1新种:吊罗肪刺螨Steatonyssus diaoluoensis sp.nov,.文中给出了中国肪刺螨亚属Steatonyssus 已知种检索表.研究标本保存于贵州大学昆虫研究所标本馆.