乳腔镜腋窝淋巴结清扫术与常规淋巴结清扫术治疗乳腺癌的临床效果

目的:通过对比两种不同的临床治疗乳腺癌的效果,提出临床治疗乳腺癌更可靠的方案,为临床治疗和相关研究提供参考。方法:选取我院2010年12月至2014年12月期间我院临床收治的乳腺癌患者56例,根据患者临床治疗手术方法情况,分成了研究组和对照组,研究组患者给予乳腔镜腋窝淋巴结清扫术,对照组患者均给予常规的腋窝淋巴结清扫术,观察和比较两者患者实施不同手术治疗后的手术时间、住院费用、术中出血量和并发症发生情况。结果:研究组患者的手术时间长于对照组,研究组患者的住院费用高于对照组,而患者术中出血量研究组患者也低于对照组患者,组问比较差异均具有统计学意义(P0.05);两组患者术后并发症的发生率比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:与常规腋窝淋巴结清扫术相比较,乳腔镜手术所需时间较长,并且治疗费用偏高,临床上应给予患者的个体差异情况有针对性的选择实施。     

miRNA-194 在骨肉瘤中靶基因的预测和验证

目的:对miRNA-194在骨肉瘤中的作用机制进行探索和研究,为研究miRNA-194在骨肉瘤中的作用及可能的生物治疗提供理论依据和研究基础。方法:使用生物信息学软件对miRNA-194在骨肉瘤中可能的靶基因进行预测,并在基因水平和蛋白水平进行相应的验证。此外,利用荧光素酶基因报告实验对其靶基因(CDH2)进行DNA水平的直接验证。结果:使用生物信息学软件预测出了多个可能的潜在靶基因(367个,6014个和212个);荧光素酶基因报告实验显示野生PTEN-3'-UTR在miRNA-194上调组明显的低表达,同时下调组明显的高表达(P0.05);同时,western实验显示在蛋白水平miRNA-194直接靶向作用于CDH2(P0.05),而在m RNA水平则无明显作用(P0.05)。结论:经预测和验证,CDH2是miRNA-194在骨肉瘤中的直接靶基因,为接下来关于miRNA-194在骨肉瘤中的各项研究奠定了良好的实验基础。     

产甘油假丝酵母胞浆3-磷酸甘油脱氢酶编码基因的克隆

当酵母细胞处于高渗压环境时,甘油被诱导合成以提高其胞内渗透压,这一过程受ＨＯＧ途径的调控。ＧＰＤ１基因为ＨＯＧ途径的重要靶基因,高效表达使胞内３磷酸甘油脱氢酶酶活水平提高可极大地提高甘油的产量。本研究将产甘油假丝酵母（Ｃａｎｄｉｄａｇｌｙｃｅｒｏｌｏｇｅｎｅｓｉｓ）染色体ＤＮＡ经Ｓａｕ３ＡＩ部分酶解后的５～１０ｋｂＤＮＡ片段与经ＢａｍＨＩ线性化及ＣＩＰ处理过的酵母大肠杆菌穿梭质粒ＹＥｐ５１连接,以大肠杆菌ＤＨ５α为受体,构建产甘油假丝酵母的染色体基因文库。通过遗传互补法,在含５０ｇ／Ｌ氯化钠的培养基上筛选出１５个转化子,对转化子０６０１进行了进一步鉴定,转化子０６０１所含质粒ＹＥｐ０６０１带有ＹＥｐ５１的标记并可以消除Ｓａｃｃｂａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ６４２菌株由于其ＧＰＤ１,ＧＰＤ２两基因的缺失突变而表现出的渗透压敏感性,表明已克隆到产甘油假丝酵母的编码胞浆３磷酸甘油脱氢酶的基因     

PEPCK-Cmus转基因小鼠的表型鉴定

磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK)是催化糖异生的限速酶,其在骨骼肌中表达量很低,作用尚不明确。本研究构建了在骨骼肌中特异表达PEPCK-C的转基因小鼠(PEPCK-Cmus小鼠),探讨PEPCK-C在小鼠骨骼肌中特异性表达后对运动和能量代谢的影响。结果显示,与同龄的野生型小鼠比较,PEPCK-Cmus转基因小鼠运动能力更强,胰岛素敏感性更高,血脂水平较低;骨骼肌中有明显脂肪堆积,但空腹血糖、体重、腹部脂肪体积没有差异。结果表明,PEPCK-C基因在小鼠骨骼肌中的特异性表达,提高了小鼠的运动耐力和糖平衡能力,并使血脂维持在较低水平,提示PEPCK-C基因在骨骼肌中的表达对机体的能量代谢有重要作用。     

慢性前列腺炎患者前列腺液白细胞浓度与前列腺液尿酸 及锌含量的相关性研究

目的:探讨慢性前列腺炎患者前列腺液中白细胞(WBC)数量与前列腺液尿酸(UA)、锌(Zn)含量的关系。方法:选取慢性前列腺炎患者128例,健康对照组52例。分别进行EPS中白细胞(WBC)数量、尿酸(UA)和锌(Zn)含量测定。结果:慢性前列腺炎患者前列腺液UA含量显著高于健康对照组,Zn含量显著低于健康对照组,前列腺液中WBC数量与UA含量呈显著正相关,与Zn含量呈显著负相关(P<0.01)。2慢性前列腺炎患者治疗前后EPS中的UA和Zn对比有显著性差异。结论:EPS中的尿酸(U A)、锌(Zn)含量对慢性前列腺炎的诊断与评估疗效有一定价值。     

EZH2 靶向的shRNA 质粒的构建和有效靶序列的筛选*

目的:构建并筛选靶向zeste基因增强子人类同源物2(Enhancer of zeste homologue 2,EZH2)的短发卡RNA(short hairpinRNA,shRNA)的质粒表达载体。方法:设计并合成针对EZH2基因的带有小发夹结构的DNA片段并克隆至质粒pGPU6/GFP/Neo中,经酶切和测序分析后转染入胶质瘤U251细胞,分别应用实时荧光定量PCR和Western bloting在mRNA和蛋白质水平观察其对EZH2基因表达的沉默效果。结果:重组质粒构建成功,并成功转染入胶质瘤U251细胞,转染效率大约为70%。其中,以靶向hEZH2-715序列的质粒抑制效果最好,其对U251细胞EZH2 mRNA和protein抑制率分别为55%和89%。结论:成功构建了能高效抑制EZH2基因表达shRNA的重组质粒,为下一步探索EZH2在胶质瘤细胞中的生物学作用奠定了基础。     

针对miR-221 基因干扰慢病毒载体的构建及其有效靶序列的 筛选与检测

目的:构建携带人miR-221基因的miRNA干扰慢病毒载体并寻找其有效靶序列,为胶质瘤的研究提供一种新的方法。方法:合成含干扰序列的双链DNAoligo直接连入酶切后的RNA干扰载体上。将产物转入细菌感受态细胞,对长出的克隆进行PCR鉴定,阳性克隆即为目的基因RNA干扰慢病毒载体质粒。再将目的基因与目的载体分别进行双酶切,纯化酶切产物后进行定向连接,其产物转入细菌感受态细胞,再对PCR鉴定阳性的克隆进行测序和分析比对,比对正确即为融合蛋白过表达质粒载体,然后将两种质粒共转染入293T细胞,用westernbolt法检测其有效敲减靶序列。结果:重组质粒经测序鉴定证明各转录模板完整、正确插入到相应质粒中,共转染后发现编号为PscSI576的靶点干扰效果最好。结论:本实验成功构建了人miR-221基因的RNA干扰慢病毒载体,并找到了有效的干扰靶序列。     

血管内皮功能和颈动脉内膜中膜厚度变化在糖尿病肢动脉闭塞症中的表达意义

目的:研究血管内皮功能与颈动脉内膜中膜厚度在监测和评估糖尿病肢动脉闭塞症病情变化中的作用及临床意义。方法:将2012年10月至2013年10月入院的75例糖尿病肢体动脉闭塞症患者为研究对象,按照病程分为一、二和三期组,各25例,并纳入25例健康者为对照组。测定其体内一氧化氮、内皮素1、6-酮-前列腺素F1a和血栓素B2水平变化,并运用高分辨率超声对患者及对照组颈动脉内膜中膜厚度(IMT)、内皮依赖性舒张功能(EDD)及非内皮依赖性舒张功能(EID)进行检测,分析比较各组间差异性。结果:随着病程变化,健康对照组与三组糖尿病肢体动脉闭塞症患者相比较高,一、二和三期患者的EDD逐渐降低,且差异有统计学意义(P0.01)。三期患者的EID值较健康组、一期及二期患者低,差异有统计学意义(P0.01)。二期与三期患者IMT与对照组相比逐渐升高,差异有统计学意义(P0.01)。各病程糖尿病肢体动脉闭塞症患者的总胆固醇水平、空腹血糖水平、收缩压及舒张压均高于健康对照组(P0.05),而各组间差异无统计学意义。结论:血管内皮功能及颈动脉内膜中膜厚度的变化可反映糖尿病肢体动脉闭塞症的病程发展,可作为这临床诊断与监测的参考指标。