重组人干扰素α-2b在大肠杆菌中分泌表达

人干扰素α-2b原始基因在重组原核工程菌中表达量偏低,所以我们在不改变干扰素原有氨基酸组成的前提下,根据大肠杆菌密码子偏爱性使用定向突变技术对huIFNα-2b基因进行点突变。将大肠杆菌STⅡ信号肽基因与突变后huIFNα-2b基因融合并于信号肽5′端和huIFNα-2b基因3′端引入合适的酶切位点。融合基因克隆至载体pCSE,pET-22b和pPAK4L中,此3种载体分别含有组成型启动子、T7启动子和phoA启动子。融合基因在载体pCSE中表达量很低,其中约有50%的目标蛋白能够成功实现分泌。在E.coliBL21中,pET-22b经过IPTG诱导可以实现huIFNα-2b的高表达,但STⅡ信号肽不能被有效切除。含有phoA启动子的载体pPAK4L其在E.coliW3110中可以实现huIFNα-2b较高水平的分泌表达,经过低磷诱导其表达量最高可至20μg/mL(A550)菌液,约有30%的目标蛋白质信号肽能够被成功切除并分泌到胞间质中。     

龈沟液CRP、IL-17、RANKL与种植体周围炎患者牙周临床指标的相关性分析及其联合检测对治疗后预后的评估价值

摘要 目的：分析龈沟液C反应蛋白（CRP）、白细胞介素-17（IL-17）及核因子-kB受体活化因子配体（RANKL）与种植体周围炎（PI）患者牙周临床指标的相关性及探讨其联合检测对治疗后预后的评估价值。方法：选取2018年1月～2022年1月我院收治的80例PI患者,记作炎症组。另取同期种植体健康患者80例作为健康组。检测并比较两组龈沟液CRP、IL-17及RANKL水平,牙周临床指标。并以Pearson相关性分析龈沟液CRP、IL-17及RANKL与牙周临床指标的相关性。此外,将所有PI患者按照急性生理学与慢性健康状况评分Ⅱ（APACHE Ⅱ）评分的差异分为预后良好组27例与预后不良组53例,比较两组龈沟液CRP、IL-17及RANKL水平。通过受试者工作特征（ROC）曲线分析上述三项指标联合预测PI患者治疗后预后不良的效能。结果：炎症组龈沟液CRP、IL-17及RANKL水平均高于健康组（均P＜0.05）。炎症组改良牙龈指数（mGI）、改良龈沟出血指数（mSBI）评分以及探诊深度（PD）均高于健康组（均P＜0.05）。经Pearson相关性分析发现,龈沟液CRP、IL-17及RANKL水平与mGI、mSBI评分及PD均呈正相关关系（均P＜0.05）。预后不良组龈沟液CRP、IL-17及RANKL水平均高于预后良好组（均P＜0.05）。经ROC曲线分析发现,龈沟液CRP、IL-17及RANKL联合预测PI患者治疗后预后不良的曲线下面积（0.95CI）为0.851（0.752～0.944）,优于上述三项指标单独预测。结论：龈沟液CRP、IL-17及RANKL与PI患者mGI、mSBI评分以及PD均密切相关,检测三指标有助于评估患者病情及治疗后预后。     

常压室温等离子体-紫外复合诱变选育β-法尼烯高产菌株

【背景】大肠杆菌(Escherichia coli)由于生长性能优良、遗传背景清楚、遗传操作手段成熟,是合成β-法尼烯的合适生产菌,但其合成β-法尼烯的产量目前仍不能满足工业化生产的需求。【目的】通过诱变筛选技术选育β-法尼烯高产突变株。【方法】采用常压室温等离子体(atmosphericand room temperature plasma,ARTP)诱变技术和紫外线照射对出发菌株大肠杆菌EC-16进行复合诱变,并以异戊烯焦磷酸耐受性为选择压力进行平板初筛,之后进行摇瓶复筛,最后进行发酵罐验证。通过连续多代培养筛选到的高产突变菌株,观察其遗传稳定性。【结果】经复合诱变选育筛选出一株β-法尼烯高产突变株E.coliHVK-9,其产量高达22.1g/L,相比出发菌株提高了168.74%。【结论】采用ARTP-紫外复合诱变,再结合异戊烯焦磷酸抗性筛选的集成方法,使得诱变菌株的正突变率大大提高,可以有效地提高诱变菌株的β-法尼烯产量。突变株HVK-9作为工业化发酵生产菌种具有较好的遗传稳定性,为β-法尼烯的工业化生产和应用奠定了良好的基础。     

贺兰山东麓荒漠藻结皮微生物群落结构及其演替研究

以宁夏贺兰山东麓荒漠藻结皮为研究对象,对处于不同发育阶段的藻结皮中微生物群落结构及其演替进行了研究。结皮样品高通量测序结果分别得到521个16S rDNA序列操作分类单元(OTU)和64个18S rDNA序列OTU,表明藻结皮中原核微生物多样性远高于真核微生物;贺兰山东麓藻结皮中原核微生物分布于26个纲,Cyanobacteria在各个发育阶段中都是优势微生物类群,Actinobacteria、Chloroplast、Alphaproteobacteria和Bacilli在藻结皮发育的各个阶段相对丰度也较高;从属水平上分析,Bacillus、Leptolyngbya、Microcoleus、Microvirga、Chroococcidiopsis、Rubellimicrobium、Phormidium、Mastigocladopsis、Skermanella、Nostoc、Scytonema共11个属在各个发育阶段的藻结皮中都存在,只是出现了丰度的差异。Bacillus在藻结皮形成期、发育初期和发育中期相对丰度较大,成熟期丰度显著下降,而成熟期Microvirga丰度较前3个时期显著增加,表现出明显的细菌菌群演替现象。藻结皮样品中主要真核微生物分布于13个纲,其中Dothideomycetes和Pezizomycetes在各个发育阶段样品中丰度都很高,Agaricomycetes在形成期样品中相对丰度高达32.6%,但在藻结皮发育过程中其相对丰度迅速下降;原生生物的相对丰度在藻结皮发育过程中逐渐增加;4个发育阶段藻结皮样品中均未检测到真核微藻序列。4个发育阶段的藻结皮样品中有明确分类学信息的真核微生物共13个属,其中4个发育阶段中共有的为Coniothyrium、Dendryphion、Friedmanniomyces、Phloeopeccania、Sarocladium共5个属,其余8个属只在个别发育阶段样品中检出,表明在藻结皮发育过程中真核微生物的群落结构也发生着变化。藻结皮厚度、全氮含量及有机质含量是影响结皮层微生物群落组成的主要因素。     

高温下干旱和渍水对冬小麦花后旗叶光合特性和物质转运的影响

以蛋白质含量不同的两个冬小麦品种扬麦9号和豫麦34为材料,研究了不同温度和水分条件下小麦花后旗叶光合特性的变化、营养器官花前贮藏干物质和氮素转运特征及其与籽粒产量和品质形成的关系.结果表明,高温及干旱和渍水均明显降低了旗叶光合速率和叶绿素含量（SPAD值）,但高温下干旱和渍水对光合作用的影响加重.小麦营养器官花前贮藏干物质、氮素转运量和转运率在适温下表现为干旱>对照>渍水,高温下则表现为对照>干旱>渍水.适温下花后同化物积累量表现为对照>渍水>干旱,高温下则表现为对照>干旱>渍水.花后氮素积累量在适温和高温下均表现为对照>渍水>干旱.籽粒淀粉含量以适温适宜水分处理最高,高温渍水下最低;蛋白质含量以高温干旱下最高,适温渍水下最低.温度和水分逆境下小麦粒质量和淀粉含量的降低与花后较低的光合能力及干物质积累有关,而蛋白质含量则与花前贮藏氮素的转运量和转运率有关.     

葡萄糖氧化酶产生菌的诱变育种及发酵工艺优化

文章为优化葡萄糖氧化酶产生菌的诱变育种和发酵工艺，将桔青霉CICC 40277作为生产菌株，通过对固、液培养基中菌种的生长和产酶活力进行比较，选取木薯叶为培养基质，经固体培养活化后，菌株的产酶活力最高达到66.48 U/g。然后采用2-脱氧-D-葡萄糖为菌株抑制剂，以甲基红为指示剂设计了一种高效、简便的筛选方法。通过紫外诱变育种，最终筛选得到一株高产菌株Uv-7，其产酶活力达到79.76 U/g，比原始菌株提高了20%。采用单因素试验对Uv-7菌株产葡萄糖氧化酶的最佳菌种活化条件进行优化，得到最适条件为：培养时间144 h、培养温度30℃、接种量20%(V/V)；最适培养基组分为：以5.5 g木薯叶为固体基质，按照1∶1(W/V)的固液比添加盐溶液(g/L):MgSO₄·7H₂O 0.5、Na₂HPO₄ 2.0、KCl 0.3、CaCO₃ 3.0、葡萄糖30、酵母粉6，当pH为6.0时，菌株经活化后产葡萄糖氧化酶的活性提高到了101.52 U/g，与原始菌株相比提高了52.7%...