三疣梭子蟹HMGBa基因克隆及其应答不同病原入侵的表达特征

为研究三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)高迁移率族蛋白B (High-mobility group box protein, HMGB)在其先天免疫中发挥的功能, 利用RACE技术首次克隆得到了三疣梭子蟹HMGBa基因, 命名为PtHMGBa。其cDNA序列全长1030 bp, 其中5′端非编码区(UTR)为94 bp, 3′端非编码区(UTR)为255 bp, 开放阅读框(ORF)为681 bp, 编码一个含有227个氨基酸, 分子量25.82 kD, 理论等电点为5.94的蛋白质。PtHMGBa蛋白包含2个HMG盒结构域和一个酸性尾部结构域。分析表明, 三疣梭子蟹HMGBa氨基酸序列与凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei) HMGBa相似度最高。实时荧光定量PCR结果显示, PtHMGBa基因在血细胞和肝胰腺的表达量最高, 在眼柄中表达量最低。在副溶血弧菌和WSSV感染过程中, PtHMGBa基因在肝胰腺和血细胞中均出现了表达上调。其中, 经副溶血弧菌感染后, 该基因在上述2种组织中分别于48h和6h达到表达量的峰值; 经WSSV感染后, 该基因在2种组织中均在12h达到表达量的峰值。结果表明PtHMGBa基因参与了三疣梭子蟹抵御外来病原的免疫响应, 研究为深入开展三疣梭子蟹和其他甲壳动物的免疫调控机理提供了科学依据。     

外源基因在苏云金杆菌染色体上的定点整合及表达

[目的]研究构建稳定表达外源基因、无抗性标记基因的苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis简称Bt)工程菌的方法.在构建Bt工程菌时,高拷贝外源质粒的转入导致Bt芽孢数量减少,芽孢形成期延滞,影响Bt菌株的杀虫活力.而且,外源质粒在Bt中的稳定性较差,外源基因容易丢失.将基因整合人染色体是一种构建遗传性状稳定、杀虫活力高的Bt工程菌的有效方法.[方法]本研究采用PCR技术,分两段扩增定位于Bt无晶体突变株XBU001染色体上的trigger factor基因片段作为同源臂,克隆入温度敏感型载体pKSV7,构建了定点整合载体pKTF12.并利用pKTF12质粒将crylAc基因定点整合入XBU001染色体上.[结果]利用载体pKTF12将crylAc定点插入triggerfactor位点,对宿主菌XBU001的正常生长没有影响.重组菌株KCTF12中的crylAc基因能够稳定遗传、表达并形成菱形晶体.与携带高拷贝外源质粒的Bt菌株HTX42相比较,KCTF12具有芽孢数量增多、芽孢形成期提前的优势.[结论]定点整合法是一种构建稳定表达外源基因、无抗性标记基因Bt工程菌的有效方法.     

建筑工程造价预结算审核管理探讨

随着我国城市化建设的不断加快,建设工程也越来越多,工程投资管理工作日益受到人们的重视。如何做好预结算审核工作,使有限的投入发挥最大的效力已成为迫切需要解决的问题。     

荷兰生物毒性在线自动监测仪日常维护应注意的两个问题

生物毒性是国家水质自动监测托管站新项目,针对该套仪器日常维护较难的实际情况,通过一段时间的实践和摸索,对调速方法、计算公式两个日常维护难点进行了阐述。     

门冬氨酸钾镁与黄芪治疗冠心病疗效观察

我们自 1 995年至 2 0 0 0年采用门冬氨酸钾镁与黄芪联合应用治疗慢性冠状动脉供血不足及心律失常 3 4例 ,收到良好效果 ,现报告如下。1　临床资料1 .1　病例选择　所有病例均符合 1 970年 WHO制定的《缺血性心脏疾病命名及诊断标准》。本组3 4例中 ,男 2 8例 ,女 6例 ;年龄 5 2～ 78岁 ,平均6 5岁。病程 6～ 2 4年 ,平均 1 5年。其中 ,冠心病心绞痛者 1 6例 ,占 47%;并发室上性早搏者 6例 ,占 1 7.6 %;合并慢性房颤者 6例 ,占 1 7.6 %;冠心病陈旧性心肌梗死者 4例 ,占 1 1 .7%;室上性心动过速者 2例 ,占 5 .8%。1 .2　治疗方法　门冬氨酸…     

N—（1—萘乙酰基）—N′—（4—氨替吡啉基）硫脲对萝卜中可溶性蛋白含量、过氧化物酶和超氧化物歧化酶活性的影响（简报）

萝卜苗期喷洒不同浓度(1、10、50 mg@L-1)的N-(1-萘乙酰基)-N′-(4-氨替吡啉基)硫脲(NAT)后,萝卜肉质根中可溶性蛋白含量及超氧化物歧化酶活性增加,过氧化物酶活性下降.     

对疗养员开展健康教育的体会

近几年来 ,空军青岛疗养院开展了预防疾病和自我保健方面的教育工作 ,到本院疗养的疗养员在疗养期间的患病率明显减少 ,能愉快地度过疗养期。现将我们开展健康教育的体会报告如下。1　首先是提高医务人员对健康教育的认识　　世界卫生组织 ( WHO)在宪章中对“健康”下的定义是 :“健康不仅仅是没有疾病或不虚弱 ,而且包括身体的、精神的健康和社会适应性良好。”这就要求我们医务人员不仅要治疗患者身体上的疾病 ,而且要医治患者心理上的障碍。平时 ,我们注重收集有关预防保健方面的知识 ,对其进行归纳、总结 ,医务人员之间进行互相学习、…     

红光下氨苄青霉素对菊花水培插枝生根和生理作用

用氨苄青霉素处理的菊花茎段 ,分别放在红光和自然光下的生根和生理作用 ,目的是探索红光与氨苄青霉素对菊花的生根和生理作用是否有叠加作用。将菊花茎段在不同浓度 (10 0、2 0 0、30 0、4 0 0mg·L-1)的氨苄青霉素中浸泡 12h ,再分别在红光和自然光下进行水培 ,各用自来水作对照。结果表明 :红光下各处理比自然光下各处理茎段粗壮、生根早、根系发达、生根率高、根多且长。红光下相对电导率、MDA含量、IAA氧化酶活性均低 ,叶绿素含量高。故红光下 2 0 0mg·L-1氨苄青霉素浓度是促进茎段生根、控制相对电导率和MDA含量升高、降低IAA氧化酶活性的最佳处理浓度     

浅谈环境标准在环境法律体系中的地位

从论述环境标准的法律意义入手,重点从环境立法和司法的角度讨论环境标准在我国环境法律体系中的地位。     

珊瑚树Vibsane型二萜类化合物对人体HepG2细胞增殖的影响及其机制

目的：探讨珊瑚树vibsane型二萜类化合物对肝癌HepG2细胞增殖的影响及其机制,为研发新型天然植物类抗肿瘤药物提供实验依据。方法：采用噻唑蓝比色法及苔盼蓝染色计数法观察珊瑚树vibsane类二萜类化合物对不同肿瘤细胞增殖的影响;应用流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡,利用Apo-ONE Homogeneous Caspase-3/7试剂盒检测vibsane二萜类化合物1#对HepG2细胞内Caspase-3酶活性的影响。结果：活性筛选发现vibsane型二萜类化合物1#显著抑制人肝癌HepG2细胞增殖,构效分析表明化合物C11位连接侧链的基团修饰影响其细胞增殖抑制活性。此外,HepG2细胞对1#化合物最敏感,1#化合物抑制其增殖具有剂量和时间依赖性。机制研究显示1#化合物诱导HepG2细胞发生明显的细胞周期G0/G1期阻滞,具有时间和剂量效应;同时,较高浓度1#化合物（5-10μmol/L）引起HepG2细胞凋亡明显增加,并剂量依赖性诱导细胞内Caspase3/7激活。结论：珊瑚树vibsane型二萜类化合物能够明显抑制人肝癌HepG2细胞增殖,其可能通过诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡发挥抗肿瘤作用。