荧光定量PCR 法检测肿瘤细胞端粒酶活性的变化

目的：利用荧光定量PCR法检测端粒酶抑制剂作用于人肝癌细胞SMMC-7721后端粒酶活性的变化,探讨其抑制端粒酶活性的可能机制,为端粒酶抑制剂的临床应用提供理论依据。方法：利用荧光染料SYBR—Green I建立一种新的端粒酶活性检测方法：FQ—TRAP法。利用FQ—TRAP法检测端粒酶抑制剂作用后肿瘤细胞端粒酶活性变化。结果：端粒酶抑制剂作用后,肝癌细胞端粒酶活性都有变化,其中以ASODN,EGCG,AZT抑制效果较明显。结论：端粒酶FQ—TRAP法是一种特异性、灵敏度、重复性都较好,可快速、简便及定量检测人端粒酶活性的方法,端粒酶抑制剂作用后癌细胞端粒酶活性的变化,为端粒酶抑制剂的临床应用提供理论依据。     

粘弹剂在不同眼球破裂伤手术中的应用

目的：分析粘弹剂在不同眼球破裂伤手术中的有效作用。方法：回顾并分析27例不同程度眼球破裂伤患者的治疗,其中包括复杂角膜裂口并虹膜脱出修复术、摘出前房异物、瞳孔区非磁性异物、虹膜根部断离,晶体损伤或脱位等。术中应用粘弹剂固定异物、充填前房及玻璃体腔。观察术后6个月的眼球形态、视力等指标。结果：术后观察最少6个月。27例眼球全部保留,24例有视力。3例因继发视网膜脱离复住2次手术失败而失明,后眼球萎缩,植入义眼。11例白内障现代囊外摘除或PHACO术后植入人工晶体,3例晶体脱位者摘除晶体后缝线植入人工晶体。11眼视力在0．5以上。无眼内炎及交感性眼炎发生。单纯前节手术10人中均有术后轻度眼压增高,但很快恢复正常。3例因伴有视网膜脱离患者术后眼压低,术后失明。结论：不同重度眼外伤后眼内容大量丢失。眼球形态政变。应用粘弹刑可为手术提供方便,也能为保全眼球并恢复视能提供机会。在前房异物取出时能有效固定异物,为异物的取出创造是好的基础。     

甘肃东大山自然保护区岩羊生态行为的初步观察

2004年7月和8月,通过样线调查、野外直接跟踪观察和瞬间取样的方法,对东大山自然保护区岩羊(Pseudois nayaur)的种群结构和生态行为进行了初步研究。在观察到的720只岩羊中,719只组成了50个群,最大的群82只,最小的群2只,平均群大小(14.38±15.83)只(n=50)。雌雄性比为1∶0.63,成年雌体、亚成体和幼体之比是1∶0.4∶0.24。岩羊的昼间活动中,上午和下午各有一个瞬间觅食高峰,分别在6:30时和15:30时,中午有一段较长时间的休息期。通过对一个46只岩羊群连续12 d的野外跟踪观察,发现该岩羊群昼间的活动范围基本上在1.47 km2内。对152个自然死亡的雄性岩羊头骨的分析表明,东大山雄性岩羊的自然死亡年龄在7.5~11.5龄,其中9.5龄是其自然死亡的高峰。     

黄颡鱼卵水霉病病原的分离鉴定及其无性繁殖特性

【目的】对黄颡鱼卵水霉病病原进行分离鉴定,并对其无性繁殖特性进行研究。【方法】采用传统方法从患水霉病的黄颡鱼卵上进行丝状真菌的分离,然后通过人工感染实验证实分离菌株的致病性,通过形态学观察和ITS rDNA序列分析对致病菌株进行鉴定,并进一步通过单因子法研究其无性繁殖特性。【结果】从患水霉病的黄颡鱼卵上分离了4株丝状真菌,经人工感染试验证实其中一株丝状真菌HP对黄颡鱼卵具有致病性,并进一步研究了其形态与无性繁殖特性,开展了ITS rDNA序列分析。实验结果表明,菌株HP菌丝为透明管状结构,中间无横隔,分枝较少;游动孢子囊多数呈棒状,游动孢子发育成熟后从孢子囊中释放出来,并迅速游离;能够产生第二孢孢子;新孢子囊以内层出的方式产生;藏卵器呈球形,与雄器同枝或异枝。菌株HP的ITS rDNA序列与GenBank基因库中水霉属菌株自然聚类,同源性高达99%,与多子水霉菌株Arg4S(GenBank登录号GQ119935)的亲缘关系最近。结合形态特征与ITS序列鉴定的结果,判定菌株HP为多子水霉(Saprolegnia ferax)。此外,菌株HP在5°C-35°C、pH 4-10范围内均能产生游动孢子,产生游动孢子的最适温度和pH分别为20°C和7,而且5-25 mg/L福尔马林和0.25 1.25 mg/L二硫氰基甲烷对菌株HP产生游动孢子具有明显的抑制作用。【结论】分离鉴定了黄颡鱼卵水霉病病原,并确定了其无性繁殖特性,可以作为该病防治用药的依据。     

利用免疫组织化学及蛋白质组学对树莓提取物抑制大鼠肝癌机制的研究

目的：探讨树莓预防大鼠原发性肝癌增殖抑制和凋亡诱导作用,寻找树莓预防大鼠原发性肝癌的特异性蛋白质靶点。方法：利用二乙基亚硝胺（DEN）建立大鼠原发性肝癌动物模型;通过免疫组织化学方法研究树莓提取物对于大鼠原发性肝癌的预防效果和形态学变化,利用蛋白质组学研究树莓预防大鼠原发性肝癌的特异性蛋白质靶点。结果：树莓提取物能抑制PCNAJVEGF的表达,抑制细胞增殖,并诱导细胞凋亡。蛋白质组学差异分析表明：成瘤组大鼠血清在蛋白质峰2597．93M／Z,4513．88M／Z上与高剂量树莓干预组大鼠血清具有显著性差异（P〈0．05）。结论：树莓提取物可以抑制肝癌细胞PCNA的表达,从而抑制肝癌细胞的增殖;还可以诱导肝癌细胞凋亡;蛋白质峰2597．93M／Z及4513．88M／Z所表达蛋白为其特异性作用靶点。     

石油降解菌株的分离鉴定及降油特性

从甘肃华庆油田污染严重的土壤中采样,通过富集培养、多次筛选分离得到1株优势菌F1。依据生理生化特征和16S rDNA序列将菌株F1鉴定为白色类诺卡氏菌(Nocardioides albus)。GS-MC结果表明,等量原油经F1菌株降解前、后,表现出先降解高碳数正构烷烃为低碳数正构烷烃;高碳数正构烷烃中奇数碳向偶数碳正构烷烃演化规律;平均降油率为64%,F1菌株能较好地促使五环三萜类化合物立体构型中不稳定构型向稳定性构型转化。F1菌株在含油浓度0.3%、0.5%、1.0%土样中降解石油烃的半衰期分别为17.2、18.2、23.7 d,42 d后均达到78%以上。     

用口蹄疫病毒非结构蛋白区分注苗动物和自然感染动物研究进展

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的偶蹄类动物烈性传染病,疫苗接种是防治口蹄疫暴发的主要措施之一,而要控制口蹄疫流行,首先要将病毒感染动物从疫苗接种群体中区分开来。以口蹄疫病毒非结构蛋白（NSP）为抗原,检测动物体内的NSP抗体是一种很好的区分感染动物和疫苗免疫动物的诊断方法,许多实验室开展了相关研究,并取得了一定的成绩。     

利用甲硝唑及外加氧方法筛选耐氧产氢Klebsiella oxytoca HP1突变菌株

摘氢酶是生物制氢的关键酶,大多数氢酶因对氧极敏感而易失活,因此提高氢酶的氧耐受性对生物制氢有重要意义。本研究利用1％甲基磺酸乙酯对Klebsiella oxytoca HPl进行了两轮诱变,经40mmol／L甲硝唑和21％氧联合处理1h（第一轮诱变）或2h（第二轮诱变）进行筛选。所得突变菌株经产氢测试,结果在15％氧浓度条件下,第一代突变菌株HPl-A15产氢活性为出发菌株Klebsiella oxytoca HPl的3.70倍,在21％氧浓度条件下第二代突变菌株HPAl5-37产氢活性为HPl-A15菌株的2.75倍,是出发菌株的11倍。突变菌株HPl-A15和HPAl5-37具有较好的遗传稳定性。本试验结果说明利用MNZ和外加氧的方法适用于兼性厌氧菌耐氧产氢突变菌株的筛选。     

海洋生物多糖的研究与发展

多糖具有多种生理功能,随着陆地资源的消耗,海洋生物多糖的作用逐渐被发现,它不仅具有明显的生物学活性,而且无毒副作用,该将主要从海洋生物多糖的生物学活性及研究现状进行简述。     

漆酶工程菌株的构建及其培养条件的研究

提取产漆酶白腐菌 (Fomelignosus)的总RNA ,利用RT_PCR的方法克隆到漆酶的cDNA ,并将其克隆到表达载体pPIC9k ,重组质粒经线性化、电激转化PichiapastorisGS115、通过底物显色反应筛选到漆酶生产工程菌株。其中 2 #工程菌株产酶活力较高。培养基、培养温度、诱导用甲醇浓度及培养基中铜离子浓度对该菌产酶活力均有一定的影响。在最适条件下 (用含 2 0 0 μmol LCu2 的BMMY培养基 ,于 2 0℃ ,2 5 0r min ;用 0 5 %甲醇诱导 )培养至第 6天时 ,该菌株产酶活力达到最高 (15 10U L)。