植物DNA甲基化及其研究策略

DNA甲基化是表观遗传学研究的热点问题之一,植物DNA甲基化的研究对植物研究领域的发展有着举足轻重的作用。本文阐述了植物DNA甲基化的相关机制,其中包括RdDM（RNA—dependent DNA methylation）、DNA甲基化与组蛋白修饰以及DNA去甲基化等近几年研究的热点问题：讨论了DNA甲基化在植物发育中的功能（包括基因组防御和调控基因表达）、DNA甲基化与转基因沉默的关系以及其在表观遗传学中的地位。最后就目前国内外研究植物DNA甲基化所采取的常用策略,即高效液相色谱法、亚硫酸盐测序法、甲基化敏感的限制性内切酶结合Southern杂交分析法和MSAP（methylation—sensitive amplified polymorphism）法进行了详尽的介绍和讨论。     

富含多糖和次生代谢产物的白桦成熟叶中总RNA的提取

分别采用CTAB法、SDS法、异硫氰酸胍法和缓冲液冰浴-CTAB法从转基因白桦成熟叶中提取总RNA,并对琼脂糖凝胶电泳和紫外光谱分析进行比较。结果表明,缓冲液冰浴-CTAB法提取的总RNA纯度高、完整性好且得率高.应用此法提取的总RNA能够满足RT-PCR和Northern杂交分析要求。     

一种高效的白桦树皮中白桦脂醇分离、纯化方法

通过比较白桦树皮中白桦脂醇的不同的提取方法,获得一种简单、高效的白桦脂醇提取、纯化方法。通过对不同浸提时间比较、超声震荡方法及旋转蒸发仪回收提取3种白桦脂醇提取方案的比较,进一步利用甲醇-氯仿重结晶法、无水乙醇重结晶法及大孔吸附树脂层析法对获得的白桦脂醇初提取物进行纯化。获得了白桦脂醇提取及纯化的最佳方案。用95%乙醇溶液,液固比50∶1(mL∶g)浸泡白桦树皮样品120 h后,用滤纸过滤,收集滤液,将滤液50℃加热回流5 h,减压蒸馏得到米白色固体粉末。接着以70 mL乙酸乙酯为溶剂,将得到的固体加热回流90 min,趁热过滤。滤液使用坩埚50℃浓缩至干。再以无水乙醇为溶剂进行重结晶,无水乙醇∶固体=30 mL∶1 g,-20℃重结晶,重结晶产率可达38.00%,最高纯度达到99.81%。优化后的白桦脂醇提取纯化方法操作简便,产量较高、试剂安全,是一种可用于规模化提取的有效方法。